萬祖英 易春梅 金榕榕 冉曉敏 張國輝

摘要 ?觀察盤二孢菌（Marssonina sp.）對(duì)杉木葉片的危害癥狀，采用組織分離法分離病原微生物，并進(jìn)行盤二孢菌生物學(xué)特性研究，包括菌落形態(tài)、孢子大小和顯微鏡檢特征鑒定。選擇百菌清、甲基硫菌靈分別對(duì)盤二孢菌病原菌進(jìn)行化學(xué)防治試驗(yàn)，結(jié)果表明，百菌清對(duì)盤二孢菌有明顯的抑菌作用，甲基硫菌靈對(duì)盤二孢菌的抑菌作用不顯著。

關(guān)鍵詞 盤二孢菌;杉木;病原微生物;化學(xué)防治

中圖分類號(hào)：S763.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2095-3305（2019）02-001-02

DOI： 10.19383/j.cnki.nyzhyj.2019.02.001

Abstract The symptom of Marssonina sp. on China fir leaves was observed， the pathogenic microorganisms were isolated by tissue isolation method， and the biological characteristics of the funfus were studied， including colony morphology， spore size and microscopic characteristics. Chlorothalonil and thiophanate?methyl were selected to control Marssonina sp.. The results showed that chlorothalonil had obvious bacteriostatic effect on Marssonina sp.， but thiophanate?methyl had no significant bacteriostatic effect on Marssonina sp.

Key words ? Marssonina sp.; China fir; Pathogenic microorganisms; Chemical control

盤二孢菌（Marssonina sp.）隸屬于半知菌亞門腔孢綱黑盤孢目，是由盤長(zhǎng)孢屬更名而來的。從20世紀(jì)初盤二孢菌被發(fā)現(xiàn)以來，國內(nèi)外研究學(xué)者圍繞引致盤二孢菌的病原菌種類、生活史和生物學(xué)特性，盤二孢菌與寄主互作關(guān)系，病害的發(fā)生流行規(guī)律以及藥劑防治等問題開展了一系列探索性研究。但目前對(duì)適宜于盤二孢菌生長(zhǎng)和繁殖的環(huán)境條件尚不清晰，對(duì)盤二孢菌的群體結(jié)構(gòu)、遺傳多樣性以及致病性分化特點(diǎn)等信息的了解尚為空白，對(duì)盤二孢菌在葉片上的侵染致病過程仍不明確，且缺乏各類藥劑對(duì)盤二孢菌不同生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期的毒力作用，以及藥劑防治關(guān)鍵時(shí)期等病害防治的基礎(chǔ)理論信息，造成生產(chǎn)上病害防治盲目，既無法有效控制病害的發(fā)生和蔓延，也不利于安全生產(chǎn)。

盤二孢菌主要危害植物的葉柄和葉片，有時(shí)也危害植物的嫩梢和果穗柄，影響植物光合作用，可能導(dǎo)致大量落葉，極大影響了植物的觀賞性和生長(zhǎng)。盤二孢菌對(duì)黔東南州的杉木危害較重，但至今未見盤二孢菌在黔東南乃至貴州省的相關(guān)研究。通過對(duì)盤二孢菌生物學(xué)特性及化學(xué)抑菌研究，可以有效地掌握它的生物學(xué)特性、適合該菌生長(zhǎng)及病害發(fā)展的氣候條件、研究盤二孢菌的致病性差異，從而為提高黔東南州杉木的抗病性、減少藥劑防治以及促進(jìn)城鎮(zhèn)的綠化發(fā)展提供重要科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1植物標(biāo)本 杉木盤二孢菌病葉于2016年5月23日采自貴州省凱里市舟溪鎮(zhèn)舟南村。

1.1.2 儀器 高壓蒸汽滅菌鍋、無菌操作臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、微波爐、電磁爐、搖床、奧林巴斯BX53熒光顯微鏡、照相機(jī)、培養(yǎng)皿、打孔器、試管、錐形瓶、解剖刀、酒精燈、噴壺、接種針、接種環(huán)、保鮮袋、載玻片、蓋玻片等。

1.1.3 試劑 鏈霉素、蔗糖、瓊脂、72%乙醇、0.1%升汞。采用百菌清、甲基硫菌靈防治盤二孢菌（表1）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 盤二孢菌病葉觀察與描述 對(duì)杉木病株的病害組織進(jìn)行觀察，從病害組織表面病斑形態(tài)、病斑顏色、病斑大小等方面進(jìn)行描述，并拍照記錄。

1.2.2 盤二孢菌的分離純化 采用組織分離法分離杉木病葉的盤二孢菌。在無菌操作臺(tái)上，分別切取2～3塊2～4 mm的病原組織，消毒處理后呈三角形放置在PSA平板上，將其倒置于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)3～5 d;分別挑取新長(zhǎng)菌落的菌絲到新的PSA平板上培養(yǎng)3～5 d，多次操作直至得到純培養(yǎng)，再對(duì)菌落形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察和拍照。

1.2.3 盤二孢菌的鑒定 采用先進(jìn)的光學(xué)顯微鏡觀察菌落形態(tài)結(jié)構(gòu)特征，包括菌絲的顏色、形狀，有無隔膜和分支，觀察孢子的著生方式、形態(tài)等，并測(cè)量菌絲和孢子的大小，同時(shí)拍照記錄。

1.2.4 百菌清對(duì)盤二孢菌的抑制試驗(yàn) ? 用打孔器在長(zhǎng)勢(shì)基本相同的盤二孢菌菌苔上打2～3個(gè)孔，用移液槍取200 μl藥品置于PSA培養(yǎng)基中，倒入培養(yǎng)基搖勻，取一個(gè)菌苔置于處理的PSA平板中央，標(biāo)記為百菌清，同時(shí)取另一相同菌苔于新的PSA培養(yǎng)基中央做對(duì)照試驗(yàn)，將平板倒置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5 d，每天定時(shí)觀察拍照和測(cè)量菌苔的長(zhǎng)勢(shì)。盤二孢菌菌落抑菌率=（CK-處理菌落直徑）/（CK-打孔器直徑）×100%。

1.2.5 甲基硫菌靈對(duì)盤二孢菌的抑制試驗(yàn) 移取甲基硫菌靈20 μl到培養(yǎng)皿中，再加入10 ml PSA培養(yǎng)基混勻，放置冷卻備用，平板冷卻后，用打孔器在長(zhǎng)勢(shì)基本相同的盤二孢菌菌苔上打3～5個(gè)孔，用接種針挑取菌苔分別置于配置好的平板中央，以PSA平板作對(duì)照，倒置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～12 d，每天定時(shí)觀察測(cè)量菌苔的長(zhǎng)勢(shì)，并拍照記錄。

2 結(jié)果與分析

2.1 盤二孢菌危害杉木的病癥

觀察盤二孢菌侵害杉木的病葉，發(fā)病葉片的葉尖部位最先開始發(fā)黃枯萎，然后沿這一部位向葉基擴(kuò)散枯萎，顏色初為褐色，漸變?yōu)楹诤稚?。大部分葉片邊緣先枯萎，最后整個(gè)葉片干枯，有明顯的病害交界線（圖1～2），發(fā)病嚴(yán)重時(shí)整株葉片全部枯萎。

2.2 盤二孢菌的生物學(xué)特性

盤二孢菌菌落呈絨毛狀向四周擴(kuò)展生長(zhǎng)，菌絲前期為桃花色，后期為白粉色，菌絲較粗，氣生菌絲疏松，不致密，易挑取，有同心輪紋。

挑取盤二孢菌菌絲制片在光學(xué)顯微鏡（10×40）下觀察，可以看到菌落菌絲無色透明，有隔膜，有分支，分生孢子梗短，不分支，分生孢子梗顏色略深，分生孢子倒梨形、卵圓形或橢圓形，具有橫隔膜（圖3～4）。通過測(cè)量菌落（50個(gè)孢子）計(jì)算得孢子大小為（2.89～8.72） μm×（10.14～14.11） μm。

2.3 化學(xué)制劑對(duì)盤二孢菌的抑菌結(jié)果

由表2可知，百菌清對(duì)盤二孢菌有明顯的抑菌作用，抑菌率可達(dá)50%;甲基硫菌靈對(duì)盤二孢菌的抑菌作用不顯著，抑菌率僅12.5%（表2）。

3 結(jié)論

試驗(yàn)通過前期的標(biāo)本采集、盤二孢菌侵染特征觀察、分離純化得到盤二孢菌，最后經(jīng)鑒定后得出貴州省凱里市舟溪鎮(zhèn)舟南村的致盤二孢菌主要有盤二孢菌（Marssonina sp.）。盤二孢菌以菌絲體、分生孢子盤在落地病葉上或枝梢的病組織上越冬。翌年雨季到來時(shí)產(chǎn)生分生孢子而成為初侵染源，是引起植物病害的重要真菌類群之一。盤二孢菌存在著地理差異的現(xiàn)象，我國國內(nèi)學(xué)者曾大鵬等研究發(fā)現(xiàn)，我國南方地區(qū)盤二孢菌的致病力要高于北方地區(qū)。

杉木病害不僅造成黔東南州杉木生產(chǎn)和森林資源的重大損失，還使生態(tài)環(huán)境遭受了嚴(yán)重破壞，制約著黔東南州林業(yè)又好又快地發(fā)展，提出科學(xué)、有效的病害防治措施十分必要。采用百菌清、甲基硫菌靈分別對(duì)盤二孢菌進(jìn)行化學(xué)防治，結(jié)果表明百菌清對(duì)盤二孢菌有較顯著的抑制作用。對(duì)盤二孢菌的生物學(xué)特性及防控研究，為提高黔東南州杉木的抗病性、促進(jìn)城鎮(zhèn)綠化的發(fā)展提供了科學(xué)依據(jù)，同時(shí)也為杉木病害的化學(xué)防治提供了有效的參考。

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責(zé)任編輯：鄭丹丹