1.昆藥集團(tuán)股份有限公司藥物研究院，云南 昆明 650100；2.大理市鳳儀衛(wèi)生院，云南 大理 671005

貫眾為常用中藥，現(xiàn)代藥理研究表明具有抗病毒、抗細(xì)菌、抗腫瘤及止血等作用，由于大葉鱗毛蕨形態(tài)特征、藥材的功效主治及應(yīng)用與貫眾相似，同時(shí)全國(guó)各地又普存同名異物、地區(qū)性習(xí)慣用藥、人為摻假等現(xiàn)象，使其在云南民間常作貫眾的習(xí)用品入藥[1]。大葉鱗毛蕨具有清熱解毒、散瘀止血之功效，用于治斑疹毒、痢疾，金瘡、紅崩、帶下、產(chǎn)后出血、衄血等[2]。經(jīng)查閱文獻(xiàn)資料，目前對(duì)本品的研究?jī)H見(jiàn)有染色體數(shù)目的報(bào)道研究[3]，而對(duì)其進(jìn)行生藥學(xué)研究尚未見(jiàn)報(bào)道，對(duì)大葉鱗毛蕨進(jìn)行生藥學(xué)研究，為其鑒別、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定及深入研究和開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Nikon E100型生物顯微鏡、Nikon Eclipse 80i型高級(jí)研究用正置(明場(chǎng)微分干涉系統(tǒng))生物數(shù)碼攝影顯微鏡、DXM1200超高品質(zhì)顯微攝影數(shù)碼相機(jī)、Nikon D-3000數(shù)碼單反相機(jī)、Adobe Photoshop8.0簡(jiǎn)體中文版圖形處理軟件、電熱恒溫水浴鍋DK-98-Ⅱ、NOVA NANOSEM 450 型掃描電鏡。

1.2 材料 水合氯醛試液、稀甘油試液、蒸餾水、(濃)鹽酸(A.R)(成都市欣海興化工試劑廠)、乙醇(A.R)(天津市風(fēng)航化學(xué)試劑科技有限公司)、甲醇(A.R)(重慶川江化學(xué)試劑廠)、正丁醇(天津市博迪化工有限公司)、固綠、番紅、中性樹(shù)膠、固體石蠟。

實(shí)驗(yàn)材料采自大理市漾濞縣，原植物經(jīng)云南大學(xué)陸樹(shù)剛教授鑒定為鱗毛蕨科植物大葉鱗毛蕨Dryopterismarginata(C. B. Clarke) Christ.

2 方法

2.1 性狀鑒別 通過(guò)眼看、鼻聞和口嘗的方法，如眼看藥材形狀、大小、外表、斷面、顏色、質(zhì)地。鼻聞和口嘗藥材氣味。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 根莖和葉柄 將采集的新鮮根莖和葉柄分開(kāi)固定于FAA固定液中，用常規(guī)石蠟切片法即脫水、浸蠟、包埋、切片、脫蠟、染色、封片。(切片厚度8～12 μm，用不同濃度的二甲苯和二甲苯與無(wú)水酒精不同比例的混溶液脫蠟，番紅和固綠染色，加拿大樹(shù)膠封片)；鱗片及葉上下表皮用顯微鏡下觀察其組織構(gòu)造、細(xì)胞特征及內(nèi)含物特征，拍攝其顯微照片，圖片、數(shù)據(jù)處理分析。

2.2.2 鱗葉 取干凈的載玻片，中間滴一點(diǎn)清水，再將清理干凈的鱗片用鑷子放在水滴上，然后進(jìn)行展平，之后壓上蓋玻片，制成臨時(shí)裝片(視鱗片的大小選擇一張裝片放幾個(gè)鱗片，通常3～5個(gè)鱗片)，體式顯微鏡下觀察，并用Nikon E100型生物顯微鏡拍照觀察，每個(gè)物種觀察同一部位3～5個(gè)鱗片。

2.2.3 葉上下表皮 取骨碎補(bǔ)類(lèi)植物已固定的葉片中段，在水中反復(fù)沖洗后用開(kāi)水浸泡，于Jeffery溶液中浸泡2～24 h，具體時(shí)間因材料而異，需要在浸泡過(guò)程中進(jìn)行觀察，直至上下表皮能輕易分開(kāi)為止。將材料放在清水中漂洗干凈，取干凈的載玻片于中央滴一滴清水，然后將分離后的葉表皮用解剖針挑起置于水滴中，吸走多余水分，表皮自動(dòng)展平后蓋上蓋玻片。在Nikon Eelipse 80i生物數(shù)碼顯微鏡下觀察，拍照。

2.2.4 孢子 從野外采集的藥用骨碎補(bǔ)類(lèi)植物，選擇有成熟孢子的標(biāo)本，用解剖針刺破孢子囊獲取孢子，獲取一定數(shù)目(不少于50粒)的孢子，在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)一步檢查孢子的顏色、成熟情況等，選取成熟度好、顏色均勻、發(fā)育良好的孢子，均勻地撒在事先貼好雙面膠的樣品臺(tái)上。取樣過(guò)程中嚴(yán)格避免不同種間孢子的污染。每一個(gè)樣品采集完孢子后，完成所取材料的標(biāo)本相關(guān)信息的記錄。將取好的孢子材料固定在樣品臺(tái)上，經(jīng)噴金后置于NOVA NANOSEM 450型掃描電鏡下觀察。鍍金時(shí)長(zhǎng)為30 s。鍍金結(jié)束后取出樣品臺(tái)，置于NOVA NANOSEM 450掃描電子顯微鏡下進(jìn)行觀察。觀察過(guò)程中選擇發(fā)育良好、具有代表性的孢子對(duì)其裂縫情況、近極面和遠(yuǎn)極面的紋飾情況進(jìn)行拍照，同時(shí)每個(gè)樣品選取不少于20個(gè)孢子來(lái)測(cè)量其極軸長(zhǎng)和赤道軸長(zhǎng)。

3 結(jié)果

3.1 性狀鑒別 干燥根莖呈長(zhǎng)圓柱形或棱柱狀，多彎曲，上端稍大。長(zhǎng)10～25 cm，直徑5～8 cm。表面密被深棕色的鱗片，脫去鱗片之表面呈黃綠色。具葉柄殘基及須根，表面呈瘤狀分歧。質(zhì)硬，不易折斷，斷面多為黃褐色，可見(jiàn)多數(shù)黃白色小點(diǎn)(分體中柱)，排成不規(guī)則環(huán)狀。氣微弱而特異，味微澀。(如圖1)

3.2 顯微鑒別

3.2.1 根莖橫切面 不規(guī)則形。鱗片基著生于表皮層深凹陷處，由3～5列細(xì)胞構(gòu)成，細(xì)胞長(zhǎng)方形或多角形。外層為數(shù)列厚壁細(xì)胞，棕褐色。基本薄壁組織細(xì)胞類(lèi)圓形或不規(guī)則形，壁略波狀彎曲。內(nèi)皮層外側(cè)一列細(xì)胞的內(nèi)壁增厚為7～10 μm，可見(jiàn)孔溝。內(nèi)皮層為一列長(zhǎng)方形細(xì)胞，可見(jiàn)凱氏點(diǎn)。周韌型維管束(分體中柱)21～28個(gè)，類(lèi)圓形或長(zhǎng)橢圓形，直徑125～586 μm，不規(guī)則排列，在分體中柱外側(cè)有較多的葉跡維管束。木質(zhì)部由多角形管胞及非木化纖維狀細(xì)胞構(gòu)成，管胞直徑25～83.4 μm。見(jiàn)圖2、圖3和圖4。

3.2.2 葉柄橫切面 類(lèi)橢圓形，直徑約為6.5 mm，中部一處深陷明顯。表皮細(xì)胞類(lèi)圓形，長(zhǎng)方形，排列較平整，外被角質(zhì)層。下皮為5～14列多角形厚壁細(xì)胞?；颈”诮M織細(xì)胞類(lèi)圓形或多角形。類(lèi)圓形周韌維管束(分體中柱)4～6個(gè)，直徑120～540 μm，呈“U”字型排列，近深陷明顯腹面兩個(gè)較大。每一維管束內(nèi)皮層外側(cè)一列細(xì)胞內(nèi)壁稍增厚。內(nèi)皮層細(xì)胞為一列扁小的細(xì)胞，可見(jiàn)凱氏點(diǎn)。木質(zhì)部由管胞和非木化纖維構(gòu)成。見(jiàn)圖5。

3.2.3 鱗片 長(zhǎng)圓形，先端漸尖，長(zhǎng)2.3～3.6 cm，基部寬8～12 mm。深棕色，邊緣全緣。鱗片細(xì)胞類(lèi)長(zhǎng)方形，長(zhǎng)85～220 μm，寬40～65 μm，壁略彎曲或平直。見(jiàn)圖6、圖7、圖8。

3.2.4 葉上下表皮 上下表皮細(xì)胞大小不均，形狀不規(guī)則，細(xì)胞垂周壁呈深波狀。氣孔分布于下表皮，氣孔器以長(zhǎng)軸方向平行均勻分布，主脈處的氣孔長(zhǎng)軸方向與葉脈處走向相同，氣孔器是由2個(gè)大小相等的副衛(wèi)細(xì)胞包圍2個(gè)腎形的保衛(wèi)細(xì)胞組成，保衛(wèi)細(xì)胞與副衛(wèi)細(xì)胞長(zhǎng)軸方向一致，屬于平列型氣孔器。見(jiàn)圖9、圖10。

3.2.5 孢子囊及孢子 孢子囊呈橢球形，靠近孢子囊柄的一端較小，另一端較大；環(huán)帶隆起，類(lèi)型為垂直環(huán)帶或縱行環(huán)帶，環(huán)帶與孢子囊相連。孢子呈類(lèi)橢圓形，大小為26.03 μm×34.03 μm。孢子表面瘤狀、雞冠狀突起，具球形或近球形較大的突起，均勻分布在孢子表面或相連在一起。

4 討論

通過(guò)來(lái)源鑒別、性狀鑒別、顯微鑒別方法研究大葉鱗毛蕨的生藥學(xué)特征，結(jié)果顯示有顯著的性狀及顯微鑒別特征：藥材具葉柄殘基及須根，表面呈瘤狀分歧；根莖橫切周韌型維管束(分體中柱)21～28個(gè)，類(lèi)圓形或長(zhǎng)橢圓形，不規(guī)則排列，在分體中柱外側(cè)有較多的葉跡維管束；葉柄橫切周韌維管束(分體中柱)5個(gè)，呈“U”字型排列；鱗片長(zhǎng)圓形，先端漸尖，深棕色，邊緣全緣；葉下表皮的氣孔器是由2個(gè)大小相等的副衛(wèi)細(xì)胞包圍2個(gè)腎形的保衛(wèi)細(xì)胞組成；孢子囊環(huán)帶類(lèi)型為垂直環(huán)帶或縱行環(huán)帶，孢子類(lèi)橢圓形，孢子表面瘤狀、雞冠狀突起，具球形或近球形較大的突起。大葉鱗毛蕨的藥材形狀和顯微形態(tài)特征，可作為該藥材真?zhèn)舞b別及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂的理論依據(jù)。

為確定大葉鱗毛蕨根莖和葉柄的分體中柱數(shù)量，分別對(duì)不同植株，不同粗細(xì)根莖及葉柄制作了徒手切片，對(duì)照觀察并統(tǒng)計(jì)得出：根莖分體中柱為21～28個(gè)。葉柄分體中柱為4～6個(gè)，且靠近根莖端較多。大葉鱗毛蕨根莖和葉柄的分體中柱個(gè)數(shù)、形狀和排列方式是鑒別的重要形態(tài)特征之一。