榮瑋 徐晨 李雪松

【摘要】目的：本研究目的是探討visfatin結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其與臨床各個(gè)病理因素之間的關(guān)系。方法：以184例結(jié)直腸癌標(biāo)本作為觀察組，對(duì)應(yīng)遠(yuǎn)切端正常腸粘膜組織作為對(duì)照組進(jìn)行visfatin免疫組化檢測(cè)。結(jié)果：visfatin結(jié)直腸癌對(duì)照組和觀察組陽(yáng)性率分別為315%（58/184）、684%（126/184），兩者比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005），visfatin的表達(dá)與患者年齡、性別和腫瘤的部位、大小無(wú)相關(guān)性，與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、及TNM分期有關(guān)（P<005）。visfatin陽(yáng)性表達(dá)組和陰性表達(dá)組5年生存率分別為302%和776%。Kaplan-Meier生存分析及l(fā)og-rank顯著性檢驗(yàn)（χ2=33757，P<0001）結(jié)論：Visfatin在結(jié)直腸癌高表達(dá)及與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、及TNM分期的相關(guān)性，表明Visfatin影響結(jié)直腸癌的進(jìn)展； visfatin陽(yáng)性表達(dá)與結(jié)直腸癌患者5年生存期密切相關(guān)，是影響結(jié)直腸癌預(yù)后的因素，visfatin可能成為結(jié)直腸癌的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】結(jié)直腸癌；Visfatin；免疫組化；

【中圖分類號(hào)】R821.4+1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】

1005-0019（2019）16-038-01

結(jié)直腸癌（colorectalcancer，CRC）為現(xiàn)今高發(fā)的腫瘤之一，而在CRC的發(fā)病危險(xiǎn)因素中，肥胖具有明顯的獨(dú)立性[1]。

Visfatin是 Samal 等在 1994 年篩選淋巴細(xì)胞cDNA文庫(kù)時(shí)克隆成功的，人類該相關(guān)基因位于第7號(hào)染色體，長(zhǎng)約3741 kb，含 11個(gè)外顯子和 10 個(gè)內(nèi)含子，可編碼 473 個(gè)氨基酸，是一類具有類胰島素作用、促炎、促進(jìn)脂肪組織分化和合成等多種生物學(xué)活性的脂肪細(xì)胞因子，廣泛表達(dá)于體內(nèi)多種組織器官。Visfatin血漿水平升高是中國(guó)患者早期和晚期結(jié)直腸癌的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素[2]。但在能否成為結(jié)直腸癌的預(yù)后判斷指標(biāo)國(guó)內(nèi)報(bào)道很少。

11標(biāo)本來(lái)源

隨機(jī)選取2012年1月～2013年12月期間在齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院臨床病理檢驗(yàn)中心根治性切除術(shù)的結(jié)直腸癌原發(fā)病例184例作為觀察組，術(shù)前均未經(jīng)任何系統(tǒng)的放療和化療。對(duì)照組為大腸癌遠(yuǎn)切端正常組織184例。所有病例均有五年以上隨訪資料，且用于分析的各項(xiàng)指標(biāo)記錄完整。其中男性94例，女性90例；發(fā)病年齡發(fā)病年齡42～78歲，中位年齡575歲；發(fā)生部位結(jié)腸89例，直腸95例；高中分化119例，低分化65例；浸潤(rùn)小于肌層90例，浸及或超過(guò)肌層94例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者103例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者81例；TNM分期中Ⅰ期-Ⅱ期85例，Ⅲ-Ⅳ期99例，生存期大于等于5年者83例，小于5年者101例。

12主要試劑

鼠抗人CD151、MT1-MMP多克隆抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，工作液濃度為1∶600，免疫組織化試劑盒及DAB顯色液為福州邁新生物技術(shù)公司產(chǎn)品。

13實(shí)驗(yàn)方法

切片常規(guī)脫蠟，水化后，3%H2O2-甲醇封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶20min，枸櫞酸高壓修復(fù)10min，PBS洗3×3分鐘，一抗4℃冰箱過(guò)夜，第二天切片恢復(fù)室溫后，依次滴加試劑A：反應(yīng)增強(qiáng)液，試劑B：酶標(biāo)抗小鼠/兔IgG聚合物，室溫各孵育15min， 中間PBS洗3×3分鐘，DAB顯色，蘇木精復(fù)染。以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

14結(jié)果評(píng)定

采用半定量積分法判定結(jié)果，顯色度按細(xì)胞著色深淺計(jì)分：0分基本無(wú)著色；1分淺黃；2分淺棕，3分深棕。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比計(jì)分，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0分；陽(yáng)性細(xì)胞<10%為1分；陽(yáng)性細(xì)胞≥10%～50%為2分；陽(yáng)性細(xì)胞>50%～75%為3分；陽(yáng)性細(xì)胞>75%以上為4分。

15統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用 IBM SPSS Statistics 250 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。visfatin的表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率計(jì)算，visfatin的表達(dá)與生存時(shí)間的關(guān)系采用Kaplan-Meier生存率曲線及l(fā)og-rank檢驗(yàn)，顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)α值等于005。

2結(jié)果

21visfatin在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)

visfatin免疫組化陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕褐色顆粒狀位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)（圖1-2）。visfatin visfatin結(jié)直腸癌對(duì)照組和陽(yáng)性率分別為315%（58/184）、684%（126/184），兩者比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0005）。

22visfatin表達(dá)與結(jié)直腸癌的臨床病理因素的關(guān)系

visfatin的表達(dá)與患者年齡、性別和腫瘤的部位、大小無(wú)相關(guān)性，與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、及Dukes分期有關(guān)（P<005） 見(jiàn)表1。

23visfatin表達(dá)與患者生存期的關(guān)系

184例結(jié)直腸癌患者根據(jù)visfatin陽(yáng)性表達(dá)的情況分為陽(yáng)性組和陰性組進(jìn)行Kaplan-Meier生存分析。visfatin陽(yáng)性表達(dá)組和陰性表達(dá)組5年生存率分別為302%和776%，生存分析函數(shù)曲線和風(fēng)險(xiǎn)函數(shù)曲線（圖3-4）及l(fā)og-rank顯著性檢驗(yàn)（χ2=33757，P<0001）可知， visfatin與結(jié)直腸癌患者5年生存期密切相關(guān)，是影響結(jié)直腸癌預(yù)后的因素。

3討論

Visfatin在CRC患者血清中的水平明顯增高，對(duì)CRC的診斷靈敏度和特異度均在70%左右；Visfatin水平上升與CRC發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，與疾病惡化程度和 腫 瘤 分 期 也 有 關(guān)[3]。本研究通過(guò)免疫組化半定量積分法證實(shí)了visfatin在結(jié)直腸癌過(guò)表達(dá)，與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、及TNM分期有關(guān)（P<005）。新近研究表明visfatin在胃癌本研究顯示，抵抗素和Visfatin協(xié)同促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖，增強(qiáng)端粒酶基因表達(dá)。這些數(shù)據(jù)表明，胃癌組織中這兩種激素可以通過(guò)增強(qiáng)端粒酶作為癌基因的表達(dá)，協(xié)同促進(jìn)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[4]。乳腺癌組織內(nèi)脂素、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、年齡和腫瘤大小，被確定為高度相互作用并與乳腺癌進(jìn)展相關(guān)[5]。子宮內(nèi)膜癌高visfatin血清水平預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后差[6]。本研究通過(guò)對(duì)visfatin表達(dá)與患者生存期的關(guān)系的研究表明visfatin與結(jié)直腸癌患者5年生存期密切相關(guān)，是影響結(jié)直腸癌預(yù)后的因素（χ2=33757，P<0001）。visfatin可能成為結(jié)直腸癌的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)

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