朱方莉,孫浩浩,何鐘瑜,陳 璨,邱 寧,*

(1.國(guó)家蛋品加工技術(shù)研發(fā)分中心,湖北武漢 430070; 2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,湖北武漢 430070)

雞胚蛋是指受精蛋在適宜條件下進(jìn)行孵化一段時(shí)間后,并未破殼且具有生命力、可食用的雞蛋[1]。受精蛋在孵化過(guò)程中只與外界進(jìn)行氣體及熱量交換,雞蛋本身提供胚胎生長(zhǎng)所需的全部營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。蛋清和蛋黃中的蛋白質(zhì)以完整蛋白的形式或降解成肽段進(jìn)入雞胚，為其生長(zhǎng)發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng)[2]。目前研究表明,雞胚蛋孵化早期粗蛋白含量逐漸增多,中期趨于平穩(wěn),在孵化第14 d時(shí)其含量達(dá)到最高值,后期蛋白質(zhì)開(kāi)始被雞胚所吸收利用,故在此階段呈降低趨勢(shì)[3]。然而,目前對(duì)于雞胚蛋中蛋白質(zhì)或肽段何時(shí)進(jìn)入胚胎,且在其中如何發(fā)揮的功能還有待研究。

大部分關(guān)于雞蛋蛋白質(zhì)的研究大多是基于其功能活性,如分離提取雞蛋蛋清中抗氧化性活性肽和抗血管緊張素轉(zhuǎn)化酶肽[4-5],以及對(duì)雞蛋黃漿質(zhì)的肽組學(xué)研究等[6],但關(guān)于雞胚蛋中蛋清產(chǎn)生的多肽種類(lèi)以及與雞胚發(fā)育之間的聯(lián)系還未見(jiàn)報(bào)道。研究表明利用蛋白酶水解的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白抗菌活性肽與完整蛋白均具有較好的抑菌活性[7],也有文獻(xiàn)[8-9]報(bào)道雞蛋蛋白質(zhì)水解物中的多肽同樣也能夠影響雞胚心血管、骨骼和免疫系統(tǒng)的發(fā)育。實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),在孵化以及貯藏過(guò)程中,高分子量的蛋白質(zhì)會(huì)發(fā)生互相作用,通過(guò)質(zhì)譜鑒定發(fā)現(xiàn)其成分是蛋白與肽的結(jié)合產(chǎn)物[10];另外在雞胚蛋孵化前期發(fā)現(xiàn)蛋清中的蛋白質(zhì)在內(nèi)源酶作用下能夠發(fā)生不同程度的降解[11],因此有必要對(duì)孵化過(guò)程中蛋清蛋白質(zhì)所降解的小分子多肽進(jìn)行分析。

本文通過(guò)SDS-PAGE和MALDI-TOF MS/MS串聯(lián)質(zhì)譜鑒定技術(shù),采用“自上而下”的方法對(duì)不同孵化時(shí)期蛋清中的小分子多肽進(jìn)行研究,分析孵化過(guò)程中蛋清產(chǎn)生肽段與雞胚發(fā)育之間的內(nèi)在聯(lián)系,為開(kāi)發(fā)雞胚蛋蛋清天然活性肽提供了一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

白來(lái)航受精蛋(選用雞齡相同,同一批次生產(chǎn)的24 h內(nèi)新鮮雞蛋) 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心;考馬斯亮藍(lán)R-250 北京索萊寶科技有限公司;蛋白質(zhì)電泳預(yù)染Marker Thermo Scientific公司;SDS-PAGE試劑盒 武漢谷歌生物科技有限公司;尿素、硫脲、三羥甲基氨基甲烷、丙烯酰胺、乙腈、乙醇、冰醋酸、四甲基二乙胺 均為國(guó)產(chǎn)分析純(AR),國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;STD緩沖液、尿酸(UA,8 M尿素;150 mmol/L Tris-HCL)、吲哚-3-乙酸(IAA)、CHCA基質(zhì)溶液(50%乙腈,0.1%三氟乙酸) Sigma公司。

ALPHAI 1-4型真空冷凍干燥機(jī) 德國(guó)CHRIST公司;NanoDrop 200C型分光光度計(jì) Thermo Scientific公司;HY-2調(diào)速多用振蕩器 國(guó)華電器有限公司;3-30 K冷凍離心機(jī) 珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司;DYCZ-24D電泳裝置 北京六一儀器廠;UltrafleXtremeTMMALDI-TOF-TOF質(zhì)譜儀 AB SCIEX公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 蛋清樣品制備 將受精蛋在溫度37.8 ℃,相對(duì)濕度60%的條件下進(jìn)行孵化。分別在孵化的第0、6、8、10、14、16、18 d各取出9枚受精蛋作為實(shí)驗(yàn)材料。受精蛋要先-80 ℃冰箱預(yù)凍2 h,再分離蛋黃和蛋清,防止雞胚蛋的其它部分污染樣品,然后使用真空冷凍干燥機(jī)凍干(-40 ℃,35 h,0.01 MPa左右)成粉末備用。

1.2.2 SDS-PAGE凝膠電泳 按照Laemmli等[12]描述的方法,對(duì)第0、6、8、10、14、16、18 d的蛋清樣品進(jìn)行凝膠電泳。

1.2.3 小分子多肽樣品的制備 分離并提取雞胚蛋蛋清中的小分子多肽:稱(chēng)取2 g凍干的蛋清樣品,將其溶解于100 mL去離子水中,在8000 r/min 4 ℃下離心20 min,將所得上清液用0.45 μm微孔濾膜進(jìn)行微濾,最后再用10 kDa超濾管對(duì)所得濾液進(jìn)行超濾,得到分子量小于10 kDa的小分子多肽樣品。冷凍干燥后將其置于-80 ℃條件下密封保存(凍干條件同1.2.1)。小分子多肽提取過(guò)程在4 ℃下進(jìn)行。

1.2.4 質(zhì)譜鑒定 用滅菌槍頭吸取凍干后的小分子多肽樣品,加入30 μL STD緩沖液,沸水浴加熱5 min,冷卻至室溫后,加入200 μL UA緩沖液混合均勻,將其置于10 kDa超濾管進(jìn)行超濾,加入200 μL UA緩沖液后,8000 r/min 4 ℃下離心20 min,取沉淀,向其中加入100 μL IAA,震蕩1 min后,避光放置30 min,8000 r/min 4 ℃下離心5 min。再加入100 μL UA緩沖液,10000×g 4 ℃離心5 min,重復(fù)2次。加入40 μL的25 mmol NH4HCO3,放置過(guò)夜后8000 r/min 4 ℃離心10 min,再加入40 μL 25 mmol的NH4HCO3,進(jìn)行8000 r/min 4 ℃離心5 min,然后用0.1%甲酸進(jìn)行酸化至pH為5。

將得到的樣品進(jìn)行凍干后,取2 μL 20%的乙腈復(fù)溶,取1 μL溶解后的樣品,直接于樣品靶上進(jìn)行點(diǎn)樣,等待溶劑自然風(fēng)干,取0.5 μL過(guò)飽和的CHCA基質(zhì)溶液,于對(duì)應(yīng)靶位上點(diǎn)樣并自然風(fēng)干。使用氮?dú)鈱悠钒写祪?隨后將其放入儀器中,并使用串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(5800 MALDI-TOF MS/MS)進(jìn)行檢測(cè)。質(zhì)譜方法以及條件MALDI-TOF/TOF,激光源為YAG激光器,UA波長(zhǎng)為355 nm,加速電壓為2000 V,采集數(shù)據(jù)的模式為正離子模式與自動(dòng)獲取數(shù)據(jù)的模式,一級(jí)質(zhì)譜(MS)掃描質(zhì)量范圍為800～4000 Da,收集信噪比>50的母離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜(MS/MS)分析,每個(gè)樣品上挑選8個(gè)母離子,二級(jí)質(zhì)譜累計(jì)疊加2500次,碰撞能量為2 kV。

1.3 數(shù)據(jù)處理

利用軟件Mascot distiller過(guò)濾基線峰、識(shí)別信號(hào)峰。利用Mascot軟件及Biotools軟件搜索NCBI庫(kù),搜索IPI_Gallusgallus數(shù)據(jù)庫(kù),尋找匹配的相關(guān)蛋白質(zhì)。查詢(xún)條件為:a.物種選Gallus gallus;b.肽的分子質(zhì)量在0.8～4 kDa之間;c.表觀等電點(diǎn)與表觀分子量的誤差范圍:無(wú)限制;d.肽片段分子量最大容許誤差為:±50 ppm;e.最小匹配肽片段數(shù):4;f.離子選擇MH和monoisotopic;g.固定修飾和可變修飾分別為Carbamidomethy1(C)和Oxidation(M)。

2 結(jié)果與分析

2.1 蛋清SDS-PAGE圖譜

孵化至第0、6、8、10、14、16、18 d的受精蛋蛋清蛋白質(zhì),經(jīng)過(guò)12%的分離膠分離后的SDS-PAGE圖譜如圖1所示。從圖1中可以得到,在前期(0～6 d),受精蛋蛋清蛋白質(zhì)隨著孵化時(shí)間的增加變化不太明顯,可能由于在孵化前期蛋清蛋白質(zhì)主要發(fā)揮生物活性作用,如參與免疫調(diào)節(jié)、抗微生物、保持血壓處于穩(wěn)定狀態(tài)等。而從孵化至14 d后,分子量小于55 kDa蛋白條帶的灰度值隨孵化時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低,這是由于孵化后期蛋清蛋白質(zhì)逐漸被內(nèi)源酶水解或進(jìn)入蛋黃,為胚胎提供能量和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[13]。另外,孵化第8 d和10 d卵清蛋白條帶明顯比第0 d灰度值高,可能由于隨著孵化時(shí)間的延長(zhǎng),一些小分子蛋白或蛋白質(zhì)片段相互聚集形成大分子物質(zhì)[10-11]。孵化至第18 d后,卵清蛋白條帶的灰度值明顯降低,可能是由于蛋清進(jìn)入蛋黃或被胚胎吸收并利用[14]。另外,通過(guò)上述受精蛋蛋清蛋白質(zhì)在孵化期間的變化情況,我們選取了第0、6、14和16 d作為重要的時(shí)間節(jié)點(diǎn),利用MALDI-TOF MS/MS鑒定不同孵化時(shí)期受精蛋蛋清小分子多肽。

圖1 不同孵化時(shí)期受精蛋蛋清的SDS-PAGE電泳圖Fig.1 SDS-PAGE analysis of egg white proteins collected from fertilized chicken eggs during incubation 注:圖上橫坐標(biāo)對(duì)應(yīng)分別為孵化至第0、6、8、10、14、16 和18 d的受精蛋蛋清樣品;Marker是寬分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白 (分子量范圍是10～170 kDa)。

2.2 MALDI-TOF MS鑒定結(jié)果

通過(guò)MALDI-TOF MS的手段鑒定不同孵化時(shí)期受精蛋蛋清小分子多肽樣品(小于10 kDa)中肽的指紋圖譜如圖2所示,圖中分別表示孵化至第0、6、14和16 d的小分子多肽指紋圖譜。孵化0 d時(shí),小分子多肽分子量主要集中于799.0～2727.4 Da,蛋清中豐度較高的幾種小分子多肽的分子量分別為877、1042、1746和2505 Da;孵化6 d時(shí),小分子多肽分子量主要集中于799.0～1441.8 Da,蛋清中豐度較高的幾種小分子多肽的分子量分別為822、1042、1297和1930 Da,可能是由于在孵化過(guò)程中內(nèi)源酶分解蛋白質(zhì)或大分子肽段而產(chǎn)生;孵化14 d時(shí),小分子多肽分子量主要集中于1441.8～2084.6 Da,蛋清中豐度較高的幾種小分子多肽分子量分別為1645、1686、1901和2355 Da;孵化16 d時(shí),分子量分布于14 d相同,蛋清中豐度較高的幾種小分子多肽分子量分別為1686、1901、2213和2350 Da,可能是蛋白質(zhì)或大分子肽持續(xù)降解[13],也有可能是由于小分子多肽進(jìn)入蛋黃或被胚胎吸收利用[14]。

圖2 受精蛋在不同孵化時(shí)期蛋清中小分子多肽分子量分析圖譜Fig.2 Molecular weight analysis atlas of small peptide of egg white from fertilized eggs at different days of incubation

2.3 MALDI-TOF MS/MS鑒定結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)MALDI-TOF MS/MS對(duì)所制取的不同孵化時(shí)期(第0、6、14、16 d)受精蛋蛋清小分子多肽樣品進(jìn)行測(cè)定,最后分別在孵化第0、6、14、16 d得到837、879、872和842條肽段(共計(jì)3430條),這些肽主要來(lái)自于22種蛋白質(zhì)。從表1可以得到,第0、6 d所得到的共有肽段主要來(lái)自于叢生蛋白(clusterin precursor)、一氧化氮合酶相互作用蛋白(nitric oxide synthase-interacting protein)、新城疫病毒類(lèi)感染蛋白(NDV infected-like protein)以及一種未知蛋白,其中第0 d所得到特有肽段來(lái)自于跨膜蛋白14A X3亞型(transmembrane protein 14A isoform X3)、白細(xì)胞介素6(interleukin 6)和熱休克蛋白70(Hsp-70),第6 d所得到特有肽段來(lái)自于乳清酸性蛋白類(lèi)似蛋白X3亞型(whey acidic protein isoform X2)和T細(xì)胞受體Vg3-Jg2(T-cell receptor gamma Vg3-Jg2)。

表1 孵化第0、6、14、16 d受精蛋蛋清中鑒定到的小分子多肽Table 1 Small peptides of egg white identified by MALDI-TOF MS/MS at 0,6,14 and 16 d of incubation

研究發(fā)現(xiàn)第0、6 d叢生蛋白前體肽段以較高豐度多次被檢測(cè)到,而在孵化后期未檢測(cè)到,其結(jié)果與前人的研究基本一致[11]。叢生蛋白作為一種分泌糖蛋白[15],屬于伴侶蛋白家族[16],曾多次在雞胚的某些組織中被鑒定到,包括蛋清和蛋殼[17]。另外也有學(xué)者提出雞胚可以看作閉鎖吸收的代表性材料,叢生蛋白能夠防止蛋白質(zhì)聚集和沉淀,對(duì)胚胎發(fā)育過(guò)程具有重要的意義[18]。因此,孵化前期叢生蛋白豐度較高對(duì)維持蛋白質(zhì)的相對(duì)穩(wěn)定具有一定作用,而孵化后期叢生蛋白的降解有益于打破蛋清蛋白質(zhì)的穩(wěn)定系統(tǒng),從而使其更容易被雞胚吸收。另一方面,第0、6 d都檢測(cè)到高豐度的新城疫病毒類(lèi)感染蛋白。研究表明該蛋白與機(jī)體氧化壓力有關(guān)[19],且該蛋白過(guò)表達(dá)能夠產(chǎn)生更多的抗干擾素-α抗體[20]。在孵化前期大量檢測(cè)到此蛋白的存在與雞胚發(fā)育早期尚未形成完善的免疫系統(tǒng),對(duì)外源性病毒的防御主要依賴(lài)蛋清蛋白質(zhì)或肽的作用有關(guān)。

第0 d所得到特有的跨膜蛋白14A X3亞型的肽段,該蛋白屬于跨膜蛋白家族[21],跨膜蛋白家族成員經(jīng)常在各類(lèi)癌癥中異常表達(dá)?？缒さ鞍?4A是含有3個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域的膜蛋白,研究表明跨膜蛋白14A是人類(lèi)肝細(xì)胞癌變中的上調(diào)基因[22]。另有學(xué)者研究得出跨膜蛋白14A在卵巢中過(guò)表達(dá),引起癌癥[23],即作用于細(xì)胞膜的人前膠原C端肽酶組分,在不同的器官的過(guò)表達(dá)會(huì)引起不同種類(lèi)的惡性腫瘤[24]?？缒さ鞍?4A在本實(shí)驗(yàn)中只在孵化前期受精蛋蛋清中被檢測(cè)到,其在胚胎發(fā)育過(guò)程中可能對(duì)細(xì)胞增殖以及凋亡起調(diào)控作用需進(jìn)一步研究。白細(xì)胞介素6和熱休克蛋白70僅在第0 d被檢測(cè)到,它們均屬于應(yīng)激性蛋白,可能對(duì)胚胎發(fā)育過(guò)程中抵御外界不良反應(yīng)起到重要作用[25]。研究表明乳清酸性蛋白類(lèi)似X3亞型蛋白基因包含多個(gè)四硫化二核結(jié)構(gòu)域,能夠調(diào)節(jié)肺部炎癥反應(yīng)發(fā)[26],T細(xì)胞受體Vg3-Jg2只在脾淋巴細(xì)胞中表達(dá),與胚胎脾淋巴發(fā)育有關(guān)[27]?？偟膩?lái)說(shuō),孵化前期檢測(cè)到的肽主要來(lái)自于某些具有抗菌抗病毒能力以及與胚胎正常發(fā)育密切相關(guān)的蛋白,這些由雞蛋自身內(nèi)源酶降解的小分子多肽一方面在蛋清中發(fā)揮防御功能抵御等外界不良刺激,另一方面它們通過(guò)降解成小分子肽更加有利于被胚胎吸收合成自身的防御系統(tǒng)。

表1中第14、16 d所得到的共有肽段主要來(lái)自于包含cx9C基序蛋白4(motif-containing protein 4)、sprouty同源蛋白1(protein sprouty homolog)、核糖體60S L37a蛋白(60S ribosomal protein L37a)、碳酸酐酶2(carbonic anhydrase 2)和防御素A1前體(ovodefensin A1 precursor),其中第14 d所鑒定到特有肽段來(lái)自于蛋白α-Ⅰ膠原蛋白III 型(alpha-1 collagen type III)、結(jié)合甘露糖凝集素前體蛋白(mannose-binding lectin precursor)、LIM 結(jié)構(gòu)域衰老細(xì)胞抗原蛋白1(LIM and senescent cell antigen-like-containing domain protein 1)和coiled-coil domain-containing protein 81-like isoform X3;第16 d所鑒定到特有的肽段來(lái)自于活性氧調(diào)節(jié)劑蛋白1(reactive oxygen species modulator 1)、溶質(zhì)載體家族12成員5蛋白(solute carrier family 12 member 5-like)、垂體特異性轉(zhuǎn)錄因子(pituitary specific transcription factor)和防御素蛋白11(Gal 11)。

第14、16 d均得到大量來(lái)自于與胚胎發(fā)育呼吸作用相關(guān)蛋白的肽段,如cx9C基序蛋白、Sprouty 1蛋白和碳酸酐酶2。研究表明將雞胚暴露在CO2環(huán)境下,在孵化第二階段紅細(xì)胞中碳酸酐酶的含量和活性明顯高于普通環(huán)境,碳酸酐酶能夠調(diào)節(jié)胚胎的呼吸作用[28]。另外,Sprouty 1蛋白最早是在果蠅的遺傳基因中鑒定到,具有調(diào)控眼睛等器官發(fā)育的作用[29]。有研究者對(duì)非洲蟾蜍的Sprouty 1進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)此蛋白能夠抑制成纖維細(xì)胞表皮生長(zhǎng)因子所引起蛋白激酶信號(hào)通路的激活,從而影響呼吸器官的正常功能[30]。cx9C基序蛋白對(duì)于呼吸鏈復(fù)合物的組裝或穩(wěn)定性發(fā)揮關(guān)鍵性作用[31],此蛋白可能對(duì)雞胚生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中對(duì)其呼吸及呼吸道酶至關(guān)重要。這一系列與呼吸作用相關(guān)的肽段可能被胚胎吸收利用用于合成自身的呼吸系統(tǒng)。

核糖體蛋白L37a具有單個(gè)C2-C2鋅指狀基序,該蛋白質(zhì)在胚胎發(fā)育中的功能是促進(jìn)轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)結(jié)合[32]。防御素A1前體可能與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)和防御功能有關(guān)。一般認(rèn)為防御素具有廣譜抗菌能力,即對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌都有抑菌作用,但有文獻(xiàn)報(bào)道雞防御素能夠?qū)追N大腸桿菌具有潛在的抗菌活性,當(dāng)防御素濃度為0.25 μmol時(shí)能夠有效抑制大腸桿菌的生長(zhǎng),但對(duì)于其他菌株沒(méi)有抑制能力[33]。防御素較窄的抗菌譜推測(cè)其可能在雞胚發(fā)育過(guò)程中主要承擔(dān)的是生物學(xué)功能即保護(hù)胚胎的能力,而不僅僅是抗菌能力[34],而本實(shí)驗(yàn)室在胚胎發(fā)育后期檢測(cè)到大量來(lái)自于防御素蛋白的肽段似乎也佐證了這一觀點(diǎn)。前人在雞蛋殼膜的厚外膜和薄內(nèi)膜中的每一層均鑒定到膠原蛋白,這是由于母雞輸卵管將膠原樣物質(zhì)沉積到發(fā)育中的卵表面[35]。另外也有研究證實(shí)鯰魚(yú)卵中的膠原蛋白被組裝在三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中,形成耐久性較好的外殼,此外殼對(duì)胚胎具有保護(hù)和過(guò)濾作用[36]。本實(shí)驗(yàn)在胚胎發(fā)育后期檢測(cè)到膠原蛋白肽段,是否該蛋白是從蛋殼膜轉(zhuǎn)移至蛋清后降解以供胚胎吸收利用還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)是抵御病毒,寄生蟲(chóng)和細(xì)菌病原體的第一道防線,是先天免疫過(guò)程中具有重要作用的C型血清凝集素蛋白[37]。有學(xué)者對(duì)雞MBL進(jìn)行關(guān)于其吞噬作用和補(bǔ)體激活作用的研究,發(fā)現(xiàn)高濃度MBL血清相比低濃度MBL對(duì)金黃色葡萄球菌的殺菌作用更強(qiáng),且雞MLB與哺乳動(dòng)物MLB相似,都在吞噬和補(bǔ)體激活方面發(fā)揮重要功能[38]。coiled-coil domain-containing protein 81-like isoform X3與發(fā)育過(guò)程中免疫調(diào)節(jié)相關(guān)[39]。LIM 結(jié)構(gòu)域衰老細(xì)胞抗原蛋白1可能與胚胎發(fā)育中血液運(yùn)輸和調(diào)節(jié)內(nèi)環(huán)境有關(guān)[40]。溶質(zhì)載體家族12 成員5是K+/Cl-協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,在腦部發(fā)育中具有重要作用[41]。簡(jiǎn)而言之,在胚胎發(fā)育后期,得到大部分肽段都是來(lái)自于與胚胎發(fā)育相關(guān)的蛋白,這些肽段可能能夠協(xié)助胚胎建立自身呼吸系統(tǒng)和防御系統(tǒng)等。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)研究了不同孵化時(shí)期雞胚蛋蛋清產(chǎn)生的小分子多肽之間的差異,分別在孵化第0、6、14、16 d得到837、879、872和842條肽段(共3430條)。在孵化前期主要檢測(cè)到的肽來(lái)源于與抗菌抗病毒能力相關(guān)的蛋白,如類(lèi)新城疫病毒蛋白、白細(xì)胞介素6、熱休克蛋白70等;而后期多是來(lái)自于與雞胚胎發(fā)育過(guò)程中呼吸和防御系統(tǒng)建立相關(guān)的蛋白,如Sprouty 1蛋白、碳酸酐酶2和防御素等。這些被雞蛋自身內(nèi)源酶水解的肽段,有一部分會(huì)繼續(xù)發(fā)揮著其特定功能,如抗菌、抗病毒的作用;而另一部分則會(huì)被胚胎吸收利用為其建立自身呼吸系統(tǒng)和防御系統(tǒng)等提供物質(zhì)基礎(chǔ)。本研究提供了不同孵化期間蛋清肽組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù),為雞胚在孵化期間蛋清產(chǎn)生的小分子多肽如何參與胚胎器官發(fā)育以及系統(tǒng)形成等奠定理論基礎(chǔ),并進(jìn)一步為雞胚蛋蛋清天然活性肽提供更加開(kāi)闊的前景。