溫康 劉龍

摘 要：本試驗(yàn)主要是研究在飼糧中添加乳酸菌對(duì)朗德鵝產(chǎn)肝性能的影響。通過在飼糧中添加乳酸菌，對(duì)朗德鵝的體重、免疫器官、產(chǎn)肝性能以及腹脂等方面的測(cè)定，來闡明乳酸添加對(duì)于朗德鵝產(chǎn)肝性能的影響。乳酸菌作為有益菌種在食品、保健品等產(chǎn)品中的得到運(yùn)用，但其作為飼料添加劑在填飼鵝肝臟形成的作用還沒有過報(bào)道。因此，本試驗(yàn)在飼糧中添加乳酸菌，旨在活體水平研究乳酸菌對(duì)鵝肥肝形成和補(bǔ)體基因表達(dá)的影響，進(jìn)一步探索鵝肥肝形成機(jī)理。

關(guān)鍵詞：鵝肥肝;乳酸菌;C3;C5

鵝肥肝（鵝脂肪肝）是公認(rèn)的世界三大珍饈之一，一直備受人們的青睞。在肥肝生產(chǎn)過程中，鵝肝可增大8倍以上而不發(fā)生明顯的病理癥狀，表明鵝肝在脂肪變性過程中存在著某種保護(hù)機(jī)制。因此，鵝肥肝形成的生物學(xué)機(jī)制一直是人們的研究重點(diǎn)。肝臟是機(jī)體最大的器官，具有來自肝動(dòng)脈及門靜脈的雙重血液供應(yīng)。其中，肝門靜脈系統(tǒng)主要接收腸道血液并匯至肝臟，使得腸道與肝臟存在密切聯(lián)系，形成腸-肝軸。人和動(dòng)物腸道內(nèi)定植著大量的微生物，這些微生物統(tǒng)稱為腸道菌群。腸道菌群在與其宿主長期的共生共代謝過程中不斷進(jìn)化，可消化各種植物多糖及其他營養(yǎng)物質(zhì)，是一個(gè)巨大而復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)。腸道來源的血液經(jīng)門靜脈回流進(jìn)入肝臟，伴隨進(jìn)入肝臟的還有來自腸道的食物抗原、細(xì)菌產(chǎn)物及環(huán)境毒素等，這些物質(zhì)的進(jìn)入可被肝臟徹底或部分清除;肝臟具有調(diào)節(jié)代謝、內(nèi)分泌和免疫應(yīng)答等功能，可分泌膽汁入腸道，并通過肝腸循環(huán)作用于腸道及腸道菌群。正常情況下，僅少量毒素穿過腸黏膜屏障經(jīng)門靜脈進(jìn)入肝臟，使肝臟網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)持續(xù)處于激活狀態(tài)。若腸黏膜屏障被破壞，大量細(xì)菌及毒素經(jīng)門靜脈移位至肝臟，破壞肝臟的保護(hù)機(jī)制使肝臟成為最先受累的器官。而肝臟分泌的炎癥因子通過膽汁的分泌進(jìn)入腸道，加重腸道損傷。 近年來，由于對(duì)腸-肝軸認(rèn)識(shí)的逐步深入，腸道菌群在脂肪肝形成過程中的作用備受關(guān)注，越來越多的研究證實(shí)，腸道菌群的改變與代謝紊亂、營養(yǎng)因素和遺傳因素等相互作用，共同在脂肪肝發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。

根據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織與世界衛(wèi)生組織定義，益生菌為“能達(dá)到足夠的數(shù)量并且對(duì)宿主產(chǎn)生一定的益生效應(yīng)的活的微生物”。尤其乳桿菌屬、乳酸球菌屬分別為腸道微生物中主要優(yōu)勢(shì)益生地位的組分。它們均與乳酸發(fā)酵密切相關(guān)，對(duì)人畜機(jī)體保健有重要作用。此外，作為在自然發(fā)酵乳制品中的益生菌，這些菌屬在發(fā)酵乳制品工業(yè)中作為主要商業(yè)啟動(dòng)菌，有很高的應(yīng)用價(jià)值;由于其有益無害的生理特性，是一種基本的營養(yǎng)源和胃腸調(diào)節(jié)劑，可以在臨床使用來治療由飲食、年齡等原因引起的菌群失調(diào)，也是現(xiàn)在飼料工業(yè)中應(yīng)用的主要微生態(tài)制劑。有然而，有關(guān)乳酸菌與鵝肥肝的關(guān)系在國內(nèi)外文獻(xiàn)中尚未見報(bào)道。本課題組在長期的鵝肥肝形成機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)，填飼鵝與對(duì)照組相比，其腸道生理指標(biāo)發(fā)生了明顯的變化，表明鵝腸道及其菌群可能參與鵝肥肝的形成。因此，本研究對(duì)鵝肥肝形成過程中在飼糧中添加乳酸菌，乳酸菌與鵝肥肝形成的關(guān)系，為深入研究鵝肥肝形成機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

一、研究?jī)?nèi)容

1.材料與方法

（1）試驗(yàn)動(dòng)物及設(shè)計(jì)處理

本實(shí)驗(yàn)選取70日齡體重相近的60只朗德鵝公鵝，隨機(jī)分成對(duì)照組、填飼組、加菌對(duì)照組和加菌填飼組，每組各15只。填飼組于71日齡開始，在填飼第25天進(jìn)行。

（2）乳酸菌劑的制備

本實(shí)驗(yàn)乳酸菌存放于0-4℃冰箱中，每次填飼的時(shí)候按飼料比例添加1‰的乳酸菌?，F(xiàn)場(chǎng)配置。

（3）基礎(chǔ)日糧

對(duì)照組的飼料處理：稱適量玉米，入鍋煮沸3-5分鐘，取出瀝干，趁熱加入1%鵝油、0.8%-1%食鹽，充分?jǐn)嚢韬竺看挝?00g。對(duì)照組加菌的飼料處理：稱適量玉米，入鍋煮沸3-5分鐘，取出瀝干，趁熱加入1%鵝油、0.8%-1%食鹽，充分?jǐn)嚢韬竺看挝?00g加0.1g乳酸菌。填飼用的飼料處理：稱適量玉米，入鍋煮沸3-5分鐘，取出瀝干，趁熱加入1%鵝油、0.8%-1%食鹽，充分?jǐn)嚢韬蠹纯商铒暋Ｌ铒暭泳玫娘暳咸幚恚悍Q適量玉米，入鍋煮沸3-5分鐘，取出瀝干，趁熱加入1%鵝油、0.8%-1%食鹽，充分?jǐn)嚢韬筇铒暭用看翁铒暳系?‰的比例添加乳酸菌。

（4）飼養(yǎng)管理

實(shí)驗(yàn)鵝填飼期間單籠飼養(yǎng)，自由飲水，填飼方法及飼養(yǎng)管理按常規(guī)方法進(jìn)行。

（5）樣品采集

樣品采集分為四組，對(duì)照組、對(duì)照加菌、填飼和填飼加菌。每組15只鵝，稱完體重，采集腹脂、肝臟和脾臟稱重后放入凍存管中，將凍存管立即放入液氮中待測(cè)。

（6）數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 結(jié)果采用 2-ΔΔCt進(jìn)行分析。圖中數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用SPSS 的 t 檢驗(yàn)進(jìn)行。

2.結(jié)果與分析

（1）乳酸菌對(duì)填飼朗德鵝生長性能的影響

由圖1可知，與對(duì)照組相比，填飼組體重增加，差異極顯著（p<0.01）;與對(duì)照組相比，對(duì)照加菌體重增加，差異顯著（p<0.05）;與填飼組相比，填飼加菌組體重減小，差異不顯著（p>0.05）;

（2）乳酸菌對(duì)填飼朗德鵝免疫器官的影響

由圖2可知，與對(duì)照組相比，填飼組脾臟重量增加，差異不顯著（p>0.05）;與對(duì)照組相比，對(duì)照加菌組脾臟增加且差異顯著（p<0.05）;與填飼組相比，填飼加菌脾臟重量減少差異不顯著（p>0.05）.

（3）乳酸菌對(duì)填飼朗德鵝肝臟的影響

由圖3可知，相比于對(duì)照組，填飼組肝重增加且差異極顯著（p<0.01）;相比于對(duì)照組，對(duì)照加菌組肝重增加差異不顯著（p>0.05）;相比于填飼組，填飼加菌組肝重降低且差異顯著（p<0.05）。

（4）乳酸菌對(duì)填飼朗德鵝脂肪代謝的影響

由圖4可知，相比于對(duì)照組，填飼組腹脂重增加且差異極顯著（p<0.01）;相比于對(duì)照組，對(duì)照加菌組腹脂重增加差異極顯著（p<0.01）;相比于填飼組，填飼加菌組腹脂重降低且差異極顯著（p<0.01）。

（5）補(bǔ)體C3、C5在朗德鵝肝臟中的表達(dá)

定量結(jié)果顯示，加菌對(duì)照組中C3和C5的表達(dá)水平相對(duì)于對(duì)照組有上調(diào)趨勢(shì)，但差異不顯著;與對(duì)照組相比，填飼組和加菌填飼組C3的表達(dá)水平顯著降低（P<0.05），C5的表達(dá)水平呈下調(diào)趨勢(shì)，但沒有達(dá)到顯著水平，而加菌填飼組C3和C5的表達(dá)水平均顯著高于填飼組。

二、討論

由研究結(jié)果可知，加菌對(duì)照組體重、肝重等指標(biāo)均高于對(duì)照組，表明在正常飼養(yǎng)條件下，飼糧中添加乳酸菌可以促進(jìn)鵝的生長。而填飼組添加乳酸菌后，肝臟重量相對(duì)減小，這與前人研究結(jié)果一致，因?yàn)槿樗峋梢栽谝欢ǔ潭壬暇徑庵靖蔚男纬?。而腹脂含量的增加則說明乳酸菌的添加可能改變了體內(nèi)脂肪的沉積路徑，從而延緩了肝臟中脂肪的沉積。

本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，填飼組肝臟中C3和C5的表達(dá)顯著低于對(duì)照組。從本試驗(yàn)的研究結(jié)果來看，各組肝臟中C3和C5的表達(dá)量似乎與各組別肝臟重量情況相對(duì)應(yīng)，即肝重較大的組C3和C5水平也相對(duì)較高。有研究證實(shí)，補(bǔ)體系統(tǒng)在人和嚙齒動(dòng)物的肝臟脂肪變性和炎癥反應(yīng)的發(fā)生中起促進(jìn)作用。本課題組在前期的研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)體系統(tǒng)在鵝脂肪肝形成過程中存在與人和嚙齒動(dòng)物相反的表達(dá)模式，提示其與鵝肝對(duì)脂肪變性的耐受機(jī)制相關(guān)。填飼組加菌后C3、C5表達(dá)量上升的原因及其作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

三、結(jié)語

乳酸菌可以在一定程度上緩解脂肪肝的形成。

參考文獻(xiàn)：

[1]Fournier E ， Peresson R ， Guy G ， et al. Relationships between storage and secretion of hepatic lipids in two breeds of geese with different susceptibility to liver steatosis[J]. Poultry Science， 1997， 76（4）：599.

[2]侯杰， 王寶維. 我國鵝肥肝產(chǎn)業(yè)的現(xiàn)狀及發(fā)展前景[J]. 包裝與食品機(jī)械， 2012， 30（6）：46-48.

[3]王來娣， 邵丹， 龔道清. 鵝肥肝生產(chǎn)性能及品質(zhì)影響因素的研究進(jìn)展[J]. 中國畜牧獸醫(yī)， 2012， 39（6）.

[4]DeLong， E.F.， Alien invasions and gut "island biogeography"[J]. Cell， 2014. 159（2）： 233-5.

[5] 劉龍，龔晗，楊彪，夏麗麗，耿拓宇，龔道清.鵝肥肝形成中腸道生理指標(biāo)、菌群及代謝物的變化[J].揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），2016，37（04）：37-42.

[6]Imajo K ， Yoneda M ， Ogawa Y ， et al. Microbiota and nonalcoholic steatohepatitis[J]. Seminars in Immunopathology， 2013， 36（1）：115-132.

[7]張蕊，張宜輝，洪勝輝，龔道清.填飼期朗德鵝血漿生化指標(biāo)變化規(guī)律及其與產(chǎn)肝性能關(guān)系[J].揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），2011，32（01）：73-77.

[8]丁武蓉， 青藏高原傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛奶中乳酸菌多樣性及其益生功能研究[D]，博士. 蘭州大學(xué)，2014.

[9]郭壯， 應(yīng)用焦磷酸測(cè)序技術(shù)對(duì)不同人群腸道微生物群落結(jié)構(gòu)的研究[D]，博士. 江南大學(xué)，2013.

[10]Klaenhammer， T.R.， Dairy Starter Cultures， T.M. Cogan， J-P. Accolas， 1996， VCH， ISBN： 156081 628 7， p. xii + 277[J]. Trends in Food Science & Technology， 1997. 8（4）： 127–128.

[11]Smith， J.， Technology of Reduced-Additive Foods[J]. Int. J. Food Sci. Technol.， 2005. 40（5）：572-574.

[12]岳壽松， 尤升波， 王世榮， 徐龍， 鐘平華， 季廣庭， 益生菌對(duì)奶牛泌乳性能影響的試驗(yàn)研究[J]. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2003（04）： 40-41.

[13]孟濤， 郭興華， 乳酸菌及其生長因子對(duì)人畜健康的作用[J]. 生物工程進(jìn)展， 1993（04）：48-52.

[14]渠敬峰， 朱小甫， 高睿， 樊松濤， 吳旭錦， 吳施祺， 益生菌在畜牧業(yè)上的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].飼料研究， 2007（01）： 34-35.

基金項(xiàng)目：江蘇省指導(dǎo)科創(chuàng)項(xiàng)目（X20170706）;國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31672405）