李才武，李果，王一，胡正泉，成彥曦，王群，何鳴，周宇，曾文，周繼秋，瞿祖鳳，張志忠，4*，楊光友，謝約

(1. 中國大熊貓保護研究中心，四川都江堰611830； 2. 大熊貓國家公園珍稀動物保護生物學國家林業(yè)和草原局重點實驗室，四川都江堰611830； 3. 沈陽森林動物園管理有限公司，沈陽110000；4. 國家林業(yè)和草原局野生動植物保護司，北京100714； 5. 四川農(nóng)業(yè)大學，成都611130)

大熊貓Ailuropodamelanoleuca是中國特有珍稀瀕危動物，是全球最具觀賞價值和科學研究價值的動物之一。盡管中國大熊貓遷地保護已取得了可喜成績，圈養(yǎng)種群數(shù)量持續(xù)增加，但疾病依然嚴重威脅其種群安全(鐘志軍等，2014)。在各類疾病中，寄生蟲病占有極其重要的位置(張華等，2010)。西氏貝蛔蟲Baylisascarisschroederi是圈養(yǎng)大熊貓體內(nèi)寄生蟲病中感染率最高的(賴從龍等，1993；Wangetal.，2018)，野生個體感染率幾乎達100%(葉志勇，1989；馮文和，張安居，1991；Pengetal.，2017)。蛔蟲通過掠奪宿主的營養(yǎng)以及大量蟲體寄生引起胃腸道阻塞并可進入膽管、肝管及胰管等對宿主產(chǎn)生機械性損害?；紫x病對大熊貓健康影響嚴重，嚴重感染時可致死(楊光友，1998；李德生等，2014)。據(jù)統(tǒng)計，由蛔蟲病引起的大熊貓直接、間接死亡率高達66.67%(張華等，2010)。在圈養(yǎng)大熊貓蛔蟲的防治中，伊維菌素和雙羥萘酸噻嘧啶等是常用的驅(qū)蟲藥物(李德生等，2015)。西氏貝蛔蟲產(chǎn)卵量大，蟲卵在外環(huán)境中的生存能力強，大熊貓在圈養(yǎng)環(huán)境下重復感染率很高。雖然獸醫(yī)使用常用藥物每月驅(qū)蟲，但大熊貓仍呈現(xiàn)蛔蟲反復感染的現(xiàn)象，驅(qū)蟲藥物有待進一步優(yōu)化篩選。同時，長期使用某種藥物導致蟲體耐藥性增加，因此，對一些驅(qū)蟲藥的驅(qū)蟲效果進行評價并篩選出高效的藥物及有效劑量對預防和治療圈養(yǎng)大熊貓蛔蟲病具有重要意義。阿苯達唑和甲苯咪唑被廣泛應用在人身上，安全性較高。目前在大熊貓感染蛔蟲的臨床治療中，也選用阿苯達唑、芬苯達唑和甲苯咪唑3種藥物，但是缺乏對這3種藥物驅(qū)蟲效果的有效評估。因此，本試驗選用這3種苯并咪唑類藥物對圈養(yǎng)大熊貓進行驅(qū)蟲，并對驅(qū)蟲效果進行統(tǒng)計分析，以期為圈養(yǎng)大熊貓西氏貝蛔蟲病的防控提供新的策略。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗動物為中國大熊貓保護研究中心臥龍神樹坪基地的圈養(yǎng)大熊貓。試驗藥物包括阿苯達唑(片劑，批號：17020410，中美天津史克制藥有限公司)、芬苯達唑(膏劑，批號：16280356，Merck Animal Health)、甲苯咪唑(片劑，批號：160328505，西安楊森制藥有限公司)。主要試劑有飽和硫酸鎂溶液(440 g無水硫酸鎂溶解于1 000 mL水)。主要儀器有光學顯微鏡(日本奧林巴斯)和離心機(Werk Nruniversal)等。

1.2 試驗方法

阿苯達唑按10 mg·kg-1體質(zhì)量，芬苯達唑按5 mg·kg-1、10 mg·kg-1體質(zhì)量，甲苯咪唑按10 mg·kg-1體質(zhì)量每天口服1次，連續(xù)服用 2 d。分別在驅(qū)蟲前3 d和驅(qū)蟲后的第10天、第20天用一次性自封袋收集大熊貓排出的新鮮糞便約200 g，逐一登記編號后帶回實驗室，4 ℃保存待檢。采用飽和硫酸鎂離心漂浮法檢查蟲卵。投藥后觀察供試大熊貓的采食、排糞、精神狀態(tài)及活動情況等。在投藥前后觀察供試動物糞樣中的排蟲情況，并進行記錄與統(tǒng)計。根據(jù)投藥后大熊貓的排蟲情況及蟲卵轉(zhuǎn)陰率判定驅(qū)蟲效果。蟲卵轉(zhuǎn)陰率(%)=(驅(qū)蟲前蟲卵陽性糞樣數(shù)-驅(qū)蟲后蟲卵陽性糞樣數(shù))/驅(qū)蟲前蟲卵陽性糞樣數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1 阿苯達唑片劑組

口服阿苯達唑后，13只供試大熊貓的采食、排糞、精神狀態(tài)及活動情況等未見異常。

5只投藥前糞檢蛔蟲卵為陽性的大熊貓(冰華、發(fā)發(fā)、思嘉、蘇星、禧禧)在投藥后排出大量蛔蟲(最高達89條)，投藥后第10天、第20天糞檢蛔蟲卵為陰性，蟲卵轉(zhuǎn)陰率為100%。其余8只大熊貓在投藥前糞便中自然排出蛔蟲幼蟲(香琳、紫煙)或糞檢蛔蟲卵為陰性者(傲傲、華虎、蒲蒲、森森、希望、香琳、鑫鑫、紫煙)在投藥后均排出了數(shù)量不等(1～50條)的蛔蟲幼蟲，投藥后第10天、第20天糞檢蛔蟲卵均為陰性(表1)。

2.2 芬苯達唑膏劑組

口服芬苯達唑后，10只供試大熊貓的采食、排糞、精神狀態(tài)及活動情況等未見異常。

1只投藥前糞檢蛔蟲卵為陽性的大熊貓(正正)，按5 mg·kg-1體質(zhì)量口服，投藥后第10天、第20天糞檢蛔蟲卵仍為陽性；而2只投藥前糞檢蛔蟲卵為陽性的大熊貓(華美、森森)按10 mg·kg-1體質(zhì)量口服，投藥后第10天、第20天糞檢蛔蟲卵為陰性，蟲卵轉(zhuǎn)陰率為100%。其余7只大熊貓在投藥前糞便中自然排出蛔蟲幼蟲(森森、珍珍)或糞檢蛔蟲卵為陰性者(冰華、回回、彤彤、優(yōu)優(yōu))在投藥后均排出了數(shù)量不等(1～13條)的幼蟲，投藥后第10天、第20天糞檢蛔蟲卵均為陰性(表2)。

表1 阿苯達唑片劑對大熊貓蛔蟲的驅(qū)蟲效果Table 1 The deworming effect of albendazole tablets on Ailuropoda melanoleuca

表2 芬苯達唑膏劑對大熊貓蛔蟲的驅(qū)蟲效果Table 2 The deworming effect of fenbendazole ointments on Ailuropoda melanoleuca

2.3 甲苯咪唑片劑組

口服甲苯咪唑后，16只供試大熊貓的采食、排糞、精神狀態(tài)及活動情況等未見異常。

這16只大熊貓在投藥前糞檢蛔蟲卵為陰性者，在投藥后均排出了數(shù)量不等(1～171條)的幼蟲，投藥后第10天、第20天糞檢蛔蟲卵均為陰性(表3)。

3 討論

蛔蟲病是大熊貓的一種常見寄生蟲病，嚴重威脅著大熊貓的健康(葉志勇，1989；馮文和，張安居，1991；楊光友，1998；張華等，2010；李德生等，2014)。針對蛔蟲病的藥物治療和驅(qū)蟲已開展了一些初步研究與篩選，葉志勇和張安居(1981)應用驅(qū)蟲凈、驅(qū)蛔靈、山道年酚酞及獸用敵百蟲4種藥物對8只大熊貓進行了驅(qū)蟲試驗，驅(qū)蟲凈、驅(qū)蛔靈和獸用敵百蟲效果較好，但研究未做定量分析。雙羥萘酸噻嘧啶和伊維菌素是廣譜、高效、低毒的腸道寄生蟲驅(qū)蟲藥物，普遍用于圈養(yǎng)大熊貓腸道驅(qū)蟲(張均利，蔡蓉根，1987；李德生等，2014)。對馬蛔蟲Parascarisequorum的驅(qū)蟲效果研究表明，雙羥萘酸噻嘧啶的有效率為97.6%，而伊維菌素的驅(qū)蟲效果差，僅為33.5%(Slocombeetal.，2007)。李德生等(2014)定量分析了2種藥物對大熊貓的驅(qū)蟲效果，得到了類似的結(jié)果，雙羥萘酸噻嘧啶的蟲卵轉(zhuǎn)陰率為80.00%，而伊維菌素的僅為44.44%，可能與伊維菌素的長期使用導致了寄生蟲的耐藥性有關(guān)(曹授俊等，2005)。阿苯達唑、芬苯達唑和甲苯咪唑是廣譜、高效、低毒的苯并咪唑類驅(qū)蟲藥，廣泛應用于人、家畜及野生動物蠕蟲病的防治(周忠勇等，1997；孫四平等，2008；楊美蘭等，2008；Lietal.，2012；唐耀，陳小麗，2018)，3種藥物在圈養(yǎng)大熊貓中已有零星使用(張銳，1991；劉維忠，楊光成，1994)，但對大熊貓蛔蟲的驅(qū)蟲效果還未做定量評估。本研究中，阿苯達唑?qū)Υ笮茇埢紫x成蟲和腸道幼蟲均有顯著的驅(qū)除效果。芬苯達唑的驅(qū)蟲效果需進一步觀察。甲苯咪唑?qū)Υ笮茇埢紫x4～5期幼蟲有很好的驅(qū)除效果。

表3 甲苯咪唑片劑對大熊貓蛔蟲的驅(qū)蟲效果Table 3 The deworming effect of mebendazole tablets on Ailuropoda melanoleuca

蠕蟲藥驅(qū)蟲效果的判定可以用蟲卵減少率和蟲卵轉(zhuǎn)陰率2個指標來判定。本實驗未選用蟲卵減少率這個指標，主要是因為考慮大熊貓的生活習性。大熊貓99%的食物都是竹子，但是它們對竹類的消化利用率較低，食物在體內(nèi)停留的時間短，為了滿足能量需求而大量進食，故而排糞量多(10～13 kg)，糞便中蟲卵密度極低，因而對糞樣蟲卵進行糞便蟲卵數(shù)計數(shù)的值極不準確，容易造成人為取樣誤差。同時，大熊貓西氏貝蛔蟲完成其生活史的時間在60 d 以上，圈養(yǎng)大熊貓常自然排出或嘔吐出未發(fā)育成熟的幼蟲，初步評價藥物對幼蟲的驅(qū)除效果也是很重要的。

一些藥物會引起大熊貓的不適，存在安全隱患，如服用驅(qū)蟲凈、驅(qū)蛔靈后，大熊貓活動減少，有腹部不適，表現(xiàn)側(cè)臥、仰睡、排稀便等，而服用獸用敵百蟲后的反應更加強烈，會出現(xiàn)腸蠕動加快、口流清水、精神不振、爬臥或側(cè)臥、腹疼劇烈、呼吸和脈博加快等(葉志勇，張安居，1981)。本研究中的受試大熊貓在喂藥后未發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，表明3種藥物在10 mg·kg-1體質(zhì)量連續(xù)口服2 d喂藥配置中的安全性較好，但因受試樣本數(shù)量有限，用藥安全性還有待進一步觀察。同時由于個體差異，對藥物毒性的敏感性不同，用藥時還需小心謹慎、密切觀察，避免事故發(fā)生。

制定合理的驅(qū)蟲計劃，對防治大熊貓蛔蟲病、保障大熊貓的健康有重要意義。輪換用藥是防止大熊貓蛔蟲產(chǎn)生抗藥性、保證驅(qū)蟲效果的重要手段。本研究為阿苯達唑、芬苯達唑和甲苯咪唑3種藥物對大熊貓西氏貝蛔蟲有效使用提供了重要參考。