白麗真，劉 偉，劉洪銀

（北京順鑫農(nóng)業(yè)股份有限公司牛欄山酒廠，北京101301）

紐甜，是一種新型的功能性非營(yíng)養(yǎng)型甜味劑，甜度極高，易溶于水，是阿斯巴甜的衍生物。因其在安全性、穩(wěn)定性、經(jīng)濟(jì)性等各方面突出的表現(xiàn)，被廣泛使用[1-4]。2002年美國(guó)FDA審核通過(guò)允許紐甜作為食品添加物應(yīng)用在所有食品及飲料。歐盟于2010年正式批準(zhǔn)其應(yīng)用，其指定代碼為E961。中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部2003年第4號(hào)公告也正式批準(zhǔn)紐甜為新的食品添加劑品種，適用各類食品生產(chǎn)[5]。但是國(guó)標(biāo)強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)GB 2760—2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定，白酒中不得添加甜味劑[6]。

GB 5009.247—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中紐甜的測(cè)定》[7]中規(guī)定食品中紐甜的測(cè)定方法為高效液相色譜法，樣品需經(jīng)混合提取液提取，固相萃取柱凈化后，方可進(jìn)樣，過(guò)程較復(fù)雜，影響因素很多。本實(shí)驗(yàn)在國(guó)標(biāo)方法的基礎(chǔ)上，簡(jiǎn)化前處理過(guò)程，無(wú)需過(guò)萃取柱，去酒精后定容直接進(jìn)樣，操作簡(jiǎn)單，進(jìn)樣時(shí)間短，經(jīng)超高效液相色譜檢測(cè)，結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，檢出限低，經(jīng)濟(jì)有效，該方法可用于對(duì)白酒中紐甜含量的測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

樣品：均為市售的不同香型白酒樣品，共4個(gè)。

試劑及耗材：乙腈（LC/MS級(jí)，F(xiàn)isher）；實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q超純水；紐甜（含量98%，北京百靈威科技有限公司）；磷酸（分析純，北京化工廠）；1-辛烷磺酸鈉鹽（HPLC級(jí)，Alfa aeser）。

儀器設(shè)備：超高效液相色譜儀(ACQUITY UPLC?，美國(guó)Waters公司)，配二極管陣列檢測(cè)器；Milli-Q Reference超純水發(fā)生器(美國(guó)Millipore公司)；電熱板（廣州格丹納儀器有限公司）；0.22 μm有機(jī)濾膜（天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；萬(wàn)分之一分析天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

離子對(duì)試劑緩沖液：稱取2.00 g辛烷磺酸鈉用水溶解，加入1.0 mL磷酸，用超純水定容至1000 mL，過(guò)膜。

1000 mg/L紐甜儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取0.1 g紐甜至100 mL容量瓶，用超純水溶解并定容到100 mL，置于4℃冰箱中保存待用。根據(jù)使用需要用超純水逐級(jí)稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

樣品前處理：準(zhǔn)確量取10 mL酒樣于50 mL玻璃燒杯，置于電熱板上，120℃蒸發(fā)去酒精處理90 min，將剩余的樣品用超純水定容至10 mL，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜，待上機(jī)分析。

1.3 色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7 μm)；柱溫：30 ℃；樣品室溫度：20 ℃；進(jìn)樣體積：2 μL；流動(dòng)相：A相為乙腈，B相為離子對(duì)試劑緩沖液；流速：0.4 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：218 nm；梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 紐甜的梯度洗脫程序

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理方法的優(yōu)化

國(guó)標(biāo)中前處理的方法比較繁瑣，耗用的試劑材料比較多，且耗時(shí)較長(zhǎng)，因此本研究中尋求一種簡(jiǎn)單快捷的前處理方法。由于白酒樣品中含有乙醇，直接進(jìn)樣容易造成溶劑效應(yīng)，因此本實(shí)驗(yàn)先揮發(fā)掉乙醇，再用超純水定容至原體積。圖1是直接進(jìn)樣和揮發(fā)酒精后進(jìn)樣兩種方法的比較。

圖1 兩種前處理方式比較示意圖

從圖1可以看出，酒樣加入2 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品后直接進(jìn)樣后得到的色譜圖，非目標(biāo)峰比較多，且峰面積較大，尤其是在靠近目標(biāo)峰時(shí)有一個(gè)較大的峰，保留時(shí)間稍有偏移，就會(huì)造成目標(biāo)峰識(shí)別錯(cuò)誤，從而引起假陽(yáng)性的錯(cuò)誤?；蛘咴斐赡繕?biāo)物含量變化，定量結(jié)果不準(zhǔn)確，一般情況下是含量增加。圖1中揮發(fā)進(jìn)樣譜圖是將10 mL樣品加標(biāo)對(duì)應(yīng)濃度后再在120℃電熱板上將樣品蒸發(fā)至剩余約1 mL，然后定容至10 mL后在相同條件下進(jìn)樣分析得到的色譜圖。相對(duì)于直接進(jìn)樣來(lái)說(shuō)，揮發(fā)酒精后色譜圖比較干凈，目標(biāo)峰前后的干擾峰較少，從而提高了目標(biāo)峰識(shí)別的正確率，保證了定量的穩(wěn)定性。

通過(guò)兩種前處理方式得到的色譜圖的比較，最后選擇揮發(fā)酒精后再進(jìn)樣的前處理方式。去酒精處理后進(jìn)樣色譜圖見(jiàn)圖2。

2.2 液相條件的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)用國(guó)標(biāo)方法中的流動(dòng)相，將流動(dòng)相梯度洗脫程序進(jìn)行轉(zhuǎn)換和調(diào)整，找到了適合超高效液相色譜儀的梯度洗脫程序，見(jiàn)表1，進(jìn)樣時(shí)間為4 min。

2.3 線性范圍和檢出限

用1000mg/L的紐甜儲(chǔ)備液分別稀釋至0.1mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L和5 mg/L，進(jìn)樣，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖3，標(biāo)線曲線R2為0.9999。以信噪比（S/N）為3確定檢出限（LOD），紐甜的檢出限為0.03 mg/L。

2.4 精密度和回收率

本實(shí)驗(yàn)對(duì)4個(gè)市售的不同香型白酒樣品進(jìn)行前處理進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果均為未檢出。選取某市售酒樣（編號(hào)Y1）作為加標(biāo)回收的樣品。選取標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍內(nèi)高濃度2 mg/L和低濃度0.5 mg/L做加標(biāo)回收（標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍0.1～5 mg/L）。結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可看出，樣品高濃度和低濃度的回收率均在95%～105%之間，符合回收率的測(cè)定要求，RSD值小于2%。

2.5 與國(guó)標(biāo)方法比較（表3）

如表3所示，本文的方法與GB 5009.247—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中紐甜的測(cè)定》標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定食品中紐甜的測(cè)定方法相比，本文建立的方法有前處理簡(jiǎn)單，進(jìn)樣時(shí)間短，大大減少了有機(jī)溶劑的消耗，經(jīng)濟(jì)節(jié)約，方法準(zhǔn)確，靈敏度高，檢出限低等優(yōu)點(diǎn)。

圖2 紐甜的色譜圖（5 mg/L）

圖3 紐甜標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

表2 樣品回收率數(shù)據(jù)

表3 兩種方法比較

3 結(jié)論

本試驗(yàn)在GB 5009.247—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中紐甜的測(cè)定》的基礎(chǔ)上，簡(jiǎn)化了紐甜檢測(cè)的前處理方法，優(yōu)化了液相條件，將其用于對(duì)白酒中紐甜含量的檢測(cè)。該方法簡(jiǎn)單快速，進(jìn)樣時(shí)間為4 min，經(jīng)濟(jì)節(jié)約，與國(guó)標(biāo)方法相比，該方法靈敏度高，準(zhǔn)確性好，檢出限低，同時(shí)，該方法的回收率和精密度均可滿足國(guó)標(biāo)要求，為白酒生產(chǎn)企業(yè)對(duì)白酒中紐甜含量的監(jiān)督提供了有力的技術(shù)支持。