高艷梅 谷俊峰

【摘 要】 目的：對高效液相色譜法進行板藍根顆粒中表告依春含量測定的可行性進行研究。方法：采用實驗分析方法，以色譜柱為Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）為條件，流動相為甲醇-水（15∶85），流速為1.0mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為245nm，對板藍根顆粒中表告依春的含量進行檢測分析。結(jié)果：實驗結(jié)果顯示表告依春進樣量為0.1032～2.064μg時，與峰值面積變化具有良好線性關(guān)系，其平均加樣回收率為99.20%，RSD為0.94%。結(jié)論：高效液相色譜法測定板藍根顆粒中表告依春含量操作簡單且迅速、準確性較高，具有較好的推廣應(yīng)用價值。

【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法測定;板藍根顆粒;表告依春;含量測定

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2019）1-0017-02

板藍根顆粒是采用板藍根等中藥材加工制成，具有清熱解毒、涼血利咽功效，在肺胃熱盛引起的咽喉腫痛、口咽干燥、腮部腫痛等癥狀疾病治療中具有較好的作用效果。其中，表告依春作為板藍根顆粒抗病毒功效的主要成分之一，也是板藍根顆粒質(zhì)量檢測控制的重要指標，通過對板藍根顆粒中表告依春含量測定分析，能夠有效鑒別和判斷板藍根顆粒的質(zhì)量[1]。因此，采用高效液相色譜法測定板藍根顆粒中表告依春含量具有十分積極的作用和意義[2]。本研究采用高效液相色譜法對板藍根顆粒中表告依春含量檢測進行測定研究。報告如下。

1 儀器及材料

1.1 儀器 Agilent1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）;DV215CD型號的電子天平（十萬分之一，OHAUS）;BS110S型號的電子天平（萬分之一，北京賽多利斯天平有限公司）;KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 試劑板藍根顆粒（批號：090624、090625、090626，蚌埠豐原涂山制藥廠，每袋10g，有蔗糖型），表告依春（批號：100018-200107，中國藥品生物制品檢定所）;甲醇（色譜純），水（蒸餾水）[3]等。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）;流動相：甲醇-水（15∶85）;流速：1.0mL/min;柱溫：30℃;檢測波長：245nm;進樣量：10μL，以進行板藍根顆粒中表告依春含量的檢測分析。

2.2 供試品溶液的制備 精確稱取樣品2.0g，加入75%乙醇25mL，稱定重量，超聲提取30min（頻率為40kHz，功率為250W），放置冷卻，再稱定重量，用75%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5mL，水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，用甲醇定容，搖勻，用0.45μm微孔濾膜進行過濾，濾液作為供試品溶液[4]。

2.3 對照品溶液的制備 精確稱量10.32mg的表告依春對照品，放置于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜進行過濾，得濃度為0.1032mg/mL的對照品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備 按照處方比例將板藍根去除后，根據(jù)相關(guān)制備工藝要求進行陰性樣品制備，再按“2.2”方法制備陰性對照溶液。

2.5 專屬性試驗 分別吸取上述2.2～2.4制備的三種溶液，按2.1的色譜條件進行檢測分析，經(jīng)分析后顯示，供試品溶液的色譜圖與對照品溶液的色譜圖在相對應(yīng)位置存在相同保留時間的色譜峰;此外可以看出，供試品溶液的色譜圖與陰性對照溶液的色譜圖對比，無相同保留時間的色譜峰值變化特征，表明陰性干擾不存在。如圖1所示。

2.6 線性關(guān)系考察 精確量取2.3的對照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、15.0、20.0mL，分別置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成不同濃度的對照品溶液，并按“2.1”色譜分析條件進行檢測分析，對不同進樣量的色譜峰值變化進行記錄，以表告依春對照品峰面積（Y）的變化與進樣量（X）的關(guān)系進行線性回歸分析。得回歸方程為 Y=105655.6X-0.73（r=0.9999），表明表告依春在0.1032～2.064μg范圍內(nèi)與峰面積具良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗 取同一批次樣品（批號： 090624），按“2.2”項下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果表告依春峰面積的RSD為0.33%，表明儀器精密度良好。

2.8 溶液穩(wěn)定性試驗 取同一批次樣品（批號： 090625）， 按“2.2”的方法制備供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、24h時按“2.1”的色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果表告依春峰面積的RSD為0.85%，表明供試品溶液在24h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗取 同一批次樣品（批號： 090626）， 按“2.2”的方法制備供試品溶液，平行制備6份，按“2.1”的色譜條件進樣測定。表告依春的平均含量為0.821mg/g，RSD為1.0%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.10 回收率試驗 精密稱取6份供試品（批號： 090626，表告依春含量為0.821mg/g），每份約2.0g，置具塞的錐形瓶中，分別加入表告依春對照品約10.0mg，按“2.2”方法制備供試品溶液，按“2.1”的色譜條件進樣測定。計算回收率。結(jié)果表告依春的平均回收率為99.20%，RSD（n=6）為0.94% 。

2.11 樣品含量測定 取三個批次的板藍根顆粒，按“2.2”方法制備供試品溶液，按“2.1”的色譜條件進樣測定，計算含量。結(jié)果見表1。

3 討論

通過上述實驗方法，對市場上多個生產(chǎn)廠家所生產(chǎn)板藍根顆粒中表告依春含量檢測分析顯示，部分廠家生產(chǎn)的板藍根顆粒中表告依春含量均比較低，甚至存在未檢出表告依春含量的情況。由此可見，加強對市場上供應(yīng)板藍根顆粒中表告依春含量檢測，有利于促進其產(chǎn)品質(zhì)量控制，確保其作用功效發(fā)揮。

高效液相色譜法檢測分析的流動相比例確定中，通過對多種比例對比分析顯示，其比例設(shè)計為15∶85時，以甲醇-水為流動相的實驗分析過程中能夠?qū)崿F(xiàn)表告依春峰達的較好分離，且峰形變化較好。

對高效液相色譜法測定板藍根顆粒中表告依春含量的可行性進行驗證，有利于促進其在實踐中的推廣應(yīng)用，對實現(xiàn)板藍根顆粒生產(chǎn)質(zhì)量的全面監(jiān)控有積極作用，值得進一步研究。

參考文獻

[1]王亞芳，鐘昆芮，李應(yīng)超，等.高效液相色譜法測定板藍根顆粒中腺苷的含量[J].中國獸藥雜志，2018，52（7）：59-63.

[2]曾朝暉，林明越.高效液相色譜法測定喉疾靈膠囊中表告依春、連翹苷、山豆根的含量[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2017，38（13）：1835-1836.

[3]肖春霞，黃曉婧，文永盛，等.HPLC法同時測定板藍根顆粒中腺苷和（R，S）-告依春的含量[J].中國藥物評價，2017，34（2）：81-85.

[4]肖平，陳建偉，李祥，等.高效液相色譜法同時測定板藍根藥材中5種成分的含量[J].醫(yī)藥導報，2014，33（11）：1482-1486.