謝玉娜

福建省龍巖市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 （福建龍巖 36400）

乙型肝炎病毒 （HBV）是一種嗜肝DNA病毒，乙型病毒性肝炎是一種傳染性疾病，該病發(fā)病率極高，且傳播途徑復(fù)雜、感染率高、流行面廣等，長(zhǎng)期攜帶HBV可造成肝臟炎性損傷，誘發(fā)肝衰竭、肝硬化等疾病，且可引起肝細(xì)胞癌［1-2］。我國(guó)乙型病毒性肝炎的患病人數(shù)位居世界首位，嚴(yán)重危害人們的健康。因此，尋找一種快速有效的檢測(cè)方式意義重大。熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （FQ-PCR）法與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ELISA）法是臨床常用的兩種檢測(cè)方式。本研究旨在探討FQ-PCR法與ELISA法在HBV檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年5月至2018年6月我院接診的248例疑似HBV感染患者為研究對(duì)象，男151例，女97例；年齡21～75歲，平均 （38．64±8．57）歲。排除出血傾向、凝血功能障礙，以及精神類疾病等患者。

1.2 方法

（1）ELISA法。采集入選患者2 ml空腹靜脈血，進(jìn)行10 min的3 500 r／min離心操作，取血清。使用Bio-Tek（ELX-808）酶標(biāo)儀、PW-960Plus全自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī) （購(gòu)自深圳匯松科技發(fā)展有限公司）和上?？迫A生物工程股份有限公司提供的試紙盒檢測(cè)乙型肝炎標(biāo)志物，包括乙型肝炎表面抗體（HBsAb）、乙型肝炎表面抗原 （HBsAg）、乙型肝炎e抗體（HBeAb）、乙型肝炎核心抗體 （HBcAb）、乙型肝炎 e抗原（HBeAg）。嚴(yán)格按照試紙盒說(shuō)明書上步驟進(jìn)行操作。經(jīng)（A450～630 nm）計(jì)算吸光度值，或用酶標(biāo)儀讀取450 nm位置吸光度值，經(jīng)吸光度值判定檢測(cè)結(jié)果。（2）FQ-PCR法。采集入選患者2 ml空腹靜脈血，放置在真空惰性分離膠促凝管內(nèi)，進(jìn)行10 min的3 500 r／min離心操作，以制備血漿標(biāo)本，使用購(gòu)自美國(guó)ABI公司7500型FQ-PCR儀、艾康生物技術(shù) （杭州）有限公司提供的HBV核酸定量檢測(cè)試劑盒檢測(cè)HBV-DNA濃度。

1.3 臨床評(píng)價(jià)

記錄乙型肝炎核酸定量DNA的陽(yáng)性率與HBsAb、HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBeAg的陽(yáng)性率。將ELISA法檢測(cè)5項(xiàng)乙型肝炎標(biāo)志物結(jié)果分為HBeAb、HBsAg、HBcAb陽(yáng)性等 “小三陽(yáng)”組與HBeAg、HBsAg、HBcAb陽(yáng)性等 “大三陽(yáng)”組，將兩者的陽(yáng)性率和乙型肝炎核酸定量DNA結(jié)果進(jìn)行比較。判斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）FQ-PCR法，HBV-DNA濃度＜500 copies／ml為陰性，濃度≥500 copies／ml為陽(yáng)性；（2）ELISA法，檢測(cè)樣本吸光度值臨界值為1，當(dāng)測(cè)定值＞1時(shí)結(jié)果評(píng)定為陽(yáng)性，＜1時(shí)判定為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS21．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FQ-PCR法與ELISA法檢測(cè)陽(yáng)性率

FQ-PCR法與ELISA法檢測(cè)HBV-DNA、HBsAb、HB-sAg、HBeAb、HBcAb、HBeAg陽(yáng) 性 率 分 別 為 60．48%、43．95%、36．29%、15．32%、33．47%、6．45%。見(jiàn)表 1。

表1 FQ-PCR法與ELISA法檢測(cè)陽(yáng)性率 ［例 （%）］

2.2 HBV-DNA組與大、小三陽(yáng)組檢測(cè)陽(yáng)性率比較

HBV-DNA組檢測(cè)陽(yáng)性率高于大、小三陽(yáng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （χ2=162．581、107．451，P=0．000、0．000）。見(jiàn)表2。

表2 HBV-DNA組與大、小三陽(yáng)組檢測(cè)陽(yáng)性率比較 ［例 （%）］

3 討論

乙型肝炎屬于病毒性肝炎，有較強(qiáng)的傳染性，HBV為主要病毒。我國(guó)攜帶HBV人數(shù)高達(dá)9 300萬(wàn)人，其長(zhǎng)期潛伏于機(jī)體內(nèi)，部分HBV攜帶者會(huì)因機(jī)體內(nèi)HBV被激活而患乙型肝炎。乙型肝炎存在起病緩慢、病情遷延不愈、傳染率高、傳播途徑廣等特點(diǎn)，且大部分患者的臨床癥狀不明顯，就診時(shí)已發(fā)展為晚期，患者需持續(xù)治療，使其身體痛苦與經(jīng)濟(jì)上的負(fù)擔(dān)大幅度上升。早期、高效的確診，實(shí)施正確、有效的治療，可防止病情進(jìn)一步惡化，是提高患者生存率的關(guān)鍵。由于臨床上大量使用抗病毒藥物，大幅度增加了HBV變異株數(shù)量，增加了傳統(tǒng)的HBV血清學(xué)檢測(cè)難度，檢測(cè)的敏感性、準(zhǔn)確性和可重復(fù)性均存在缺陷。ELISA法為傳統(tǒng)的檢測(cè)HBV感染手段，可有效檢測(cè)血清中特異性抗體和抗原，對(duì)患者是否感染HBV進(jìn)行判斷，且操作簡(jiǎn)單［3-4］。其檢測(cè)結(jié)果受到多種因素的影響，如血清分離，標(biāo)本保存；加樣是否存在濺出、氣泡；加樣加在孔壁非包被區(qū)；洗板情況；孵育方式與時(shí)間等。ELISA法檢測(cè)需要特殊設(shè)備、反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，且難以定量分析病毒的量與感染程度，不適用于無(wú)償獻(xiàn)血及門診、急診初篩工作。FQ-PCR法融合了DNA探針雜交與PCR兩種技術(shù)，可經(jīng)閉管檢測(cè)與熒光技術(shù)直接探測(cè)到熒光信號(hào)在PCR過(guò)程中的變化，定量、定性分析HBV感染患者的感染程度［5］。

HBeAg是判斷血清是否存在傳染性的主要指標(biāo)，而HB-sAg是診斷健康攜帶者與急性乙型肝炎患者的主要指標(biāo)。HBeAg、HBsAg、HBcAb三者陽(yáng)性 （大三陽(yáng)）表示患者機(jī)體內(nèi)HBV-DNA傳染性強(qiáng)、復(fù)制率高［6］。本研究結(jié)果顯示，HBV-DNA組檢測(cè)陽(yáng)性率高于大、小三陽(yáng)組，提示FQ-PCR法檢測(cè)價(jià)值高于ELISA法，可較好地判斷患者是否處于HBV感染期。FQ-PCR法是以每毫升的拷貝數(shù)定量地發(fā)出檢測(cè)報(bào)告，可準(zhǔn)確、真實(shí)、可靠、定量地反映HBV-DNA濃度。FQ-PCR法可經(jīng)分子水平對(duì)HBV-DNA濃度進(jìn)行直接檢測(cè)，可直觀體現(xiàn)HBV活動(dòng)性、存活與復(fù)制水平以及傳染性［7］。本研究小三陽(yáng)組的陽(yáng)性率較低，提示該組存在少量傳染性不強(qiáng)、復(fù)制較弱的HBV，可能與基本核心及前C區(qū)啟動(dòng)子區(qū)變異而形成終止密碼子有關(guān)，因其處于感染潛伏狀態(tài)，需積極監(jiān)測(cè)病情，并及時(shí)實(shí)施抗病毒治療。大三陽(yáng)組的陽(yáng)性率最低，提示大量存在傳染性強(qiáng)、高度復(fù)制的HBV，臨床需及時(shí)確診，并對(duì)患者實(shí)施足量、長(zhǎng)期的抗病毒治療。FQ-PCR法檢測(cè)HBV-DNA也存在一定的不足，如無(wú)法反映機(jī)體經(jīng)病原體入侵后，抗體如何做應(yīng)答及其結(jié)果；無(wú)法檢測(cè)出病原體的數(shù)量等，難以取代血清學(xué)標(biāo)志物的地位，但因其具有檢測(cè)結(jié)果可靠、高敏感度等優(yōu)點(diǎn)，可真實(shí)反映病毒DNA復(fù)制情況和HBV感染狀態(tài)，可為判斷乙型肝炎傳染性、早期診斷、治療監(jiān)測(cè)，以及評(píng)估病情轉(zhuǎn)歸提供參考依據(jù)，必要時(shí)可使用ELISA法與FQ-PCR法聯(lián)合檢測(cè)，進(jìn)一步提升診斷準(zhǔn)確性，進(jìn)而提高治療有效性，改善患者預(yù)后。

綜上所述，與ELISA法相比，F(xiàn)Q-PCR法可直觀反映肝細(xì)胞內(nèi)HBV復(fù)制情況。