楊睿

摘 要：目的：探討PIWIL2在乳腺癌組織中的表達，為臨床診斷和治療提供實驗依據(jù)。 方法：篩選漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院自2013年1月至2018年11月就診的女性乳腺癌患者80 例，以及同期良性乳腺組織女性20例，利用免疫組織化學(xué)方法檢測PIWIL2在不同患者乳腺組織中的表達情況，并針對患者的年齡、月經(jīng)狀況等一般臨床資料進行相關(guān)性統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果：PIWIL2在乳腺癌患者癌組織中的表達顯著高于癌旁組織和良性乳腺組織（P<0.05），其表達強度與患者的年齡、月經(jīng)狀況未呈現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性。結(jié)論：PIWIL2在乳腺癌組織中的表達升高，對乳腺癌的診斷和治療具有一定的臨床意義。

關(guān)鍵詞：PIWIL2 乳腺癌 免疫組化

中圖分類號：R737.9 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1003-9082（2019）07-0-02

乳腺癌是一種發(fā)生于乳腺腺上皮組織的多發(fā)性惡性腫瘤，99%見于女性，據(jù)國際癌癥研究機構(gòu)（International Agency for Research on Cancer，IARC）統(tǒng)計，乳腺癌已成為全球女性最常見的惡性腫瘤，也是女性惡性腫瘤死亡的主要原因。中國婦女乳腺癌的發(fā)病率并不高，但由于中國人口基數(shù)較大，其發(fā)病例數(shù)位列全球前列[1]。近些年來，全球乳腺癌患者的絕對數(shù)量仍然呈現(xiàn)不斷上升的趨勢。乳腺癌的病因復(fù)雜，遺傳、年齡、酗酒、晚育、生活環(huán)境、生活方式改變等都是與之相關(guān)的因素。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展進步，人們對于乳腺癌的認識逐漸加深，越來越多新的技術(shù)手段和治療理念被應(yīng)用于臨床治療，使乳腺癌的治療由傳統(tǒng)的化療、手術(shù)為主，轉(zhuǎn)變?yōu)槎喾N治療手段并重的綜合治療時代。PIWIL2（P-element-induced wimpy testis like 2）屬于PIWI/AGO（P-element-induced wimpy testis/Argonaute）家族。近些年來，越來越多的研究結(jié)果表明[2]，PIWIL2在大多數(shù)惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)特異性表達，而其在除睪丸外的其他正常組織中則未見明顯表達。PIWIL2可能通過沉默或降解抑癌基因，使原癌基因激活，從而參與或?qū)е赂鞣N組織腫瘤的發(fā)生[3]。本研究通過檢測80例女性乳腺癌患者癌組織、癌旁組織以及同期20例正常良性乳腺女性的乳腺組織中PIWIL2的表達情況，統(tǒng)計分析PIWIL2的表達與乳腺癌患者臨床病理及一般資料的相關(guān)性，探索PIWIL2在乳腺癌組織中的表達及其臨床意義。

一、材料與方法

1.研究對象

選取2013年1月至2018年11月在漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院就診的女性乳腺癌患者80例，取其患處組織及癌旁組織，分別設(shè)為乳腺癌組和癌旁組織組，同時選取同期良性乳腺組織女性20例，設(shè)置為良性乳腺組。 觀察對象納入標(biāo)準(zhǔn)： ①初診，未曾接受放、化療或免疫治療；②女性患者，年齡25～70歲；③無其他既往腫瘤病史，目前未發(fā)現(xiàn)其他部位的腫瘤；④有確切的組織學(xué)病理報告；⑤患者本人同意參加本次調(diào)查。

2.儀器設(shè)備與試劑

石蠟切片機、自動包埋機、防脫玻片、恒溫箱、BX-51顯微鏡、顯微鏡攝像系統(tǒng)、電磁爐、移液器、濕盒；PBS緩沖液、0.3%H2O2.90%酒精、酸性蘇木素染色劑、枸櫞酸鈉修復(fù)液、松節(jié)油；兔抗人PIWIL2多克隆抗體、正常非免疫動物血清、生物素標(biāo)記的Ⅱ抗、抗體稀釋液、AEC顯色試劑盒。本實驗使用的兔抗人PIWIL2多克隆抗體生產(chǎn)廠家為天津賽爾生物技術(shù)有限公司，AEC顯色試劑盒、正常非免疫動物血清等的生產(chǎn)廠家為福州邁新生物技術(shù)有限公司。

3.實驗方法

3.1采用SP三步法處理樣本

將采集好的臨床樣本連續(xù)3μm切片，使用防脫玻片攤片，在60℃恒溫箱中烘烤20min，使用松節(jié)油脫蠟后，先后浸泡于90%和80%的酒精各2min，清水中漂洗1min，蒸餾水中漂洗2min，再使用PBS緩沖液沖洗2-3次，每次5min，采用3%H2O2的去離子水靜置孵育10min，PBS沖洗2-3次，每次5min，再置于100mL0.01M的枸緣酸鈉緩沖液（PH6.0）中煮沸20min，自然冷卻20min后，用冷水至室溫，再次使用PBS緩沖液沖洗2-3次，每次5min，滴加正常山羊血清封閉液，室溫靜置孵育20min，滴加50μLI抗，室溫靜置60min，PBS沖洗3次，每次5min，滴加50μL含0.05%tween-20的Ⅱ抗，室溫靜置90min，PBS沖洗3次，每次5min，采用AEC顯色試劑盒，室溫下孵育10-30min，直至顯色達到預(yù)期，蒸餾水洗滌終止反應(yīng)，PBS沖洗2次，每次5min，使用蘇木素復(fù)染5min，自來水沖洗10min，再水洗，反藍10min，甘油明膠封片。

3.2觀察并計數(shù)

PIWIL2染色的陽性表現(xiàn)為紅色或棕紅色，在光鏡下進行形態(tài)學(xué)觀察，每張組織切片隨機選取10個具有代表性的高倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞，以胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)紅色或淡紅色判斷為陽性，計算該切片陽性細胞的百分率并評分：細胞著色≤5%為陰性表達，6%～25%為+、26%～50%為++，>51%為 +++，其中+、++、+++均屬于陽性評分。

3.3統(tǒng)計學(xué)分析

采取SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件對本文數(shù)據(jù)進行分析處理，判斷PIWIL2在不同年齡、月經(jīng)狀況患者體內(nèi)的表達狀況，計數(shù)資料采用χ2檢驗，當(dāng)P<0.05時，表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

二、實驗結(jié)果

1.PIWIL2在乳腺癌患者癌組織、癌旁組織及良性乳腺組織中的表達情況

各組樣本中的免疫組化結(jié)果分析表明，PIWIL2蛋白在乳腺癌患者癌組織中的陽性表達率為76.3%（61/80），在癌旁組織中的陽性表達率為33.8%（27/80），PIWIL2在乳腺癌組織中的表達明顯高于癌旁組織，兩者之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。PIWIL2在良性乳腺組，僅有1例顯示為弱陽性表達，表明PIWIL2在乳腺癌組織中的表達遠遠高于良性乳腺組織（P<0.01），見表2。

2.PIWIL2在乳腺癌患者中的表達與患者年齡、月經(jīng)狀況等一般臨床資料的關(guān)系

將乳腺癌患者的免疫組化結(jié)果與其年齡、月經(jīng)狀況等臨床一般資料進行χ2檢驗分析，結(jié)果表明，PIWIL2在不同年齡、月經(jīng)狀況的患者中表達均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），見表3。

三、討論

隨著全球生態(tài)環(huán)境的惡化、人類生存壓力的增大以及老齡化人口的不斷增多，癌癥的發(fā)病率和死亡率快速增長，癌癥已逐漸成為阻礙人類壽命增長的主要疾病。近期，國際癌癥研究中心（International Agency for Research on Cancer，IARC）發(fā)布了2018全球癌癥統(tǒng)計報告，結(jié)果顯示，2018年全球共新增癌癥病例18078957例，發(fā)病率為236.9/10萬，其中約50%集中在肺癌（11.6%）、乳腺癌（11.6%）、結(jié)直腸癌（10.2%）、前列腺癌（7.1%）和胃癌（5.7%），乳腺癌居第二位。2018年全球癌癥死亡病例共9555027例，死亡率為125.2/10萬，其中6.6%為乳腺癌，排名第五位。乳腺癌多見于女性，是女性最常見的癌癥，高居女性因癌死亡的首位，嚴重威脅女性的健康。中國女性乳腺癌的發(fā)病和死亡例數(shù)在全球位居前列，分別占全球發(fā)病和死亡總數(shù)的11.2%和9.2%[4]。女性乳腺癌的發(fā)病受生育、年齡、缺乏體力勞動、肥胖、乳腺癌認識不足等多種因素的影響，中國70%左右的乳腺癌病例發(fā)生于45歲以上的女性，且城市發(fā)達地區(qū)乳腺癌的患病率和死亡率明顯高于農(nóng)村地區(qū)[5]。目前乳腺癌的治療主要采用手術(shù)、化療、放療、內(nèi)分泌治療、中醫(yī)藥輔助治療等手段，但其發(fā)生和調(diào)控機制尚不完全清楚，因此對乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中各類因子的表達調(diào)控依然是腫瘤分子生物學(xué)領(lǐng)域研究的重要課題。近年來研究表明[6]，PIWI家族蛋白在胃癌、乳腺癌、精原細胞瘤、肝癌、胰腺癌、膠質(zhì)瘤等多種腫瘤中均呈現(xiàn)異常表達，能作用于STAT3/Bcl-xl和STAT3/CynlinD1細胞信號通路，其機制之一即為PIWIL2的過度表達，導(dǎo)致內(nèi)源性RNAi激活，信號通路增強，在各種腫瘤中發(fā)揮作用。

本研究利用免疫組化檢測PIWIL2在乳腺癌中的表達情況，發(fā)現(xiàn)PIWIL2在乳腺癌組織中的表達明顯高于癌旁組織和正常乳腺組織，并且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），提示乳腺癌組織中的PIWIL2存在過表達，可能參與乳腺癌的發(fā)生及調(diào)控。結(jié)合免疫組化結(jié)果與患者的一般資料分析表明，PIWIL2在女性乳腺癌患者中的表達與年齡、月經(jīng)狀況無關(guān)（P>0.05）。

綜上所述，PIWIL2在女性乳腺癌組織中高表達，且與患者的年齡、月經(jīng)狀況無關(guān)，可作為乳腺癌的診斷和觀察指標(biāo)，但PIWIL2作用的具體機制尚不明確，需要結(jié)合細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)新技術(shù)，進行進一步研究，為乳腺癌的臨床診治及檢測提供更加充分的實驗數(shù)據(jù)。

參考文獻

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