孟凱

摘 要：分別采用A、B、C三個公司的商品化酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）抗體檢測試劑盒和血凝抑制（HI）試驗方法對168份臨床免疫雞血清和標(biāo)準(zhǔn)陰陽性血清進行新城疫抗體監(jiān)測方法的比對試驗與研究，比較間接ELISA和血凝抑制（HI）兩種試驗方法的相關(guān)性。研究結(jié)果表明，A、B、C三個公司生產(chǎn)的商品化間接ELISA抗體檢測試劑盒的檢測結(jié)果與血凝抑制（HI）試驗的陽性符合率分別為98%、96.7%、90.2%；陰性符合率分別為86.7%、80%、86.7%；陰陽性總體符合率分別為97%、95.2%、89.9%；A、B、C三個公司的ELISA抗體檢測試劑盒的檢測時間分別為2.5、3、3h。產(chǎn)品價格分別為1100、800、700元。比較發(fā)現(xiàn)，間接ELISA方法是一種快速、敏感、特異的血清學(xué)診斷方法，不同公司生產(chǎn)的商品化ELISA抗體檢測試劑盒在敏感性、特異性和檢測時間上均存在較大的差異，綜合分析，B公司生產(chǎn)的商品化酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）抗體檢測試劑盒成本較低，敏感性較高，可以用于臨床樣本的大規(guī)模檢測。

關(guān)鍵詞：雞新城疫；抗體；ELISA；HI

新城疫又稱“偽雞瘟”或“亞洲雞瘟”，病毒高度依賴接觸方式傳染，主要影響雞的呼吸系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)并表現(xiàn)黏膜出血的體征[1]。雞新城疫病在我國的流行非常廣泛，往往在季節(jié)交替時高發(fā)，給養(yǎng)殖戶造成了巨大的經(jīng)濟損失[2]。新城疫病毒（NDV）的血清學(xué)檢測方法主要有病毒中和試驗（VN）、瓊脂擴散試驗（AGP）、血凝抑制試驗（HI）和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）等[3]。其中血凝抑制試驗（HI）仍然是目前應(yīng)用最廣泛的血清學(xué)檢測方法，但是由于ELISA具有快速、準(zhǔn)確、簡便的優(yōu)點，加之ELISA具有可批量檢測及自動化檢測的優(yōu)勢，其更適合于大規(guī)模檢測和便于標(biāo)準(zhǔn)化，用間接ELISA方法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的血凝抑制（HI）方法來檢測NDV抗體水平已成為一種趨勢，ELISA技術(shù)已越來越被廣大實驗室所采用。

目前，ELISA方法與HI試驗的比較研究已有多次報道，然而兩種試驗方法的相關(guān)性比較結(jié)果從不相關(guān)到顯著相關(guān)存在很大的差異。與此同時，采用不同公司生產(chǎn)的商品化ELISA抗體檢測試劑盒所得出的結(jié)果也是不盡相同。本試驗中，我們選取了A、B、C三家公司的商品化ELISA新城疫抗體檢測試劑盒對168份HI滴度不同的血清樣本和ND的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清進行NDV的抗體檢測試驗，分析不同公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒檢測結(jié)果與HI法檢測雞血清中NDV抗體結(jié)果的相關(guān)性，比較了A、B、C三家公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒檢測結(jié)果的陽性符合率、試劑盒價格以及試驗時長等數(shù)據(jù)，以期選出適用于臨床大規(guī)模雞場新城疫抗體檢測的ELISA試劑盒。

1 材料與方法

1.1 試劑材料 雞新城疫血凝抗原、陰性血清、陽性血清，購自青島易邦生物工程有限公司；雞新城疫抗體測試劑盒分別購自A、B、C三家生物科技有限公司；待檢的168份血清樣品，來自山東省濱州市某大型肉種雞養(yǎng)殖場的2個雞舍，均從消毒過的雞翅靜脈采集，每份1～2ml，分離血清置4℃條件下備用。

1.2 方法

1.2.1 HI試驗方法 采用微量血凝抑制試驗，按照GB/16550-2008進行操作。使用1%的雞紅細(xì)胞和4個HA單位的病毒抗原進行常規(guī)操作。只有在陰性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原對照的HI滴度不大于2log2、陽性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原對照的HI滴度與已知滴度相差在一個稀釋度范圍內(nèi)、并且陰、陽性血清都不發(fā)生自凝的情況下，HI的試驗結(jié)果才能判定有效。檢測結(jié)果以HI效價大于或等于23為陽性。

1.2.2 間接ELISA方法 其操作方法分別依照A、B、C三家公司的禽新城疫抗體ELISA檢測試劑盒說明書進行。

1.3 間接ELISA方法和HI方法的檢測符合率分析[4] 以HI為基礎(chǔ)，HI檢測結(jié)果為陽性的樣本用ELISA方法得出的陽性率便為二者的陽性符合率，HI檢測結(jié)果為陰性的樣本用ELISA方法得出的陰性率便為二者的陰性符合率，用兩種方法檢測同為陽性或陰性的血清樣本占檢測總樣本的比率為二者的總體符合率。

1.4 待檢樣品的檢測 采用A、B、C三家公司的禽新城疫抗體ELISA檢測試劑盒分別對168份HI滴度不同的樣品（其中153份為陽性血清樣品，15份為陰性血清樣品）進行檢測，利用統(tǒng)計學(xué)方法對檢測結(jié)果進行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 ELISA方法對HI血清樣品的檢測結(jié)果 按照新城疫抗體ELISA檢測試劑盒提供的臨界點判定值，采用A、B、C三家公司的禽新城疫抗體ELISA檢測試劑盒分別對168份常規(guī)血清樣品進行檢測，結(jié)果見表1、表2、表3。

由表1、表2、表3可以看出，A公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒與HI方法的陽性符合率達到了98%，陰性符合率為86.7%，陰陽性總體符合率為97%；B公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒與HI方法的陽性符合率為96.7%，陰性符合率為80%，陰陽性總體符合率為95.2%；C公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒與HI方法的陽性符合率為94.8%，陰性符合率為86.7%，陰陽性總體符合率為94%。

2.2 三家公司ELISA檢測試劑盒的價格及試驗時長 A、B、C三家公司的禽新城疫抗體ELISA檢測試劑盒價格及試驗時長見表4。

3 討論

目前，已經(jīng)有多種血清學(xué)方法用于NDV抗體的檢測，其中ELISA和血凝抑制試驗（HI）的應(yīng)用最為廣泛，兩種方法簡單易學(xué)，對養(yǎng)雞場及養(yǎng)殖戶來說，掌握一種適合自己的檢測方法就可以節(jié)約雞新城疫抗體檢測的成本，并且能夠?qū)崟r監(jiān)測雞群的免疫狀況，在臨床上對雞新城疫疾病的防控能夠起到很好的預(yù)防效果。

結(jié)合本試驗所得出的數(shù)據(jù)可以看出，A公司生產(chǎn)的雞新城疫抗體ELISA檢測試劑盒與HI方法的陽性符合率最高，達到了98%，陰陽性總體符合率達到了97%，產(chǎn)品性能在三家公司中最好，平均試驗時長為2.5h，試驗時間短，但是其試劑盒的價格為1100元，較其他兩家公司生產(chǎn)的試劑盒的價格偏貴，不適于臨床上大規(guī)模推廣；其次是B公司生產(chǎn)的雞新城疫抗體ELISA檢測試劑盒，該試劑盒檢測結(jié)果與HI方法的陽性符合率為96.7%，陰陽性總體符合率為95.2%，產(chǎn)品性能稍低于A公司產(chǎn)品，但其試劑盒價格為800元，價格優(yōu)勢明顯；C公司生產(chǎn)的試劑盒檢測結(jié)果與HI方法的陽性符合率僅為90.2%，陰陽性總體符合率為89.9%，雖然價格最低，但在產(chǎn)品性能上均與其他兩家公司的產(chǎn)品存在差異。

與HI方法檢測ND抗體靈敏度低、耗時長，且經(jīng)驗依賴性強相比，ELISA法檢測ND抗體，其敏感性、特異性、檢測時長等均優(yōu)于HI檢測方法，是一種快速、特異、敏感的血清學(xué)診斷方法，本試驗中，通過比較A、B、C三家公司生產(chǎn)的雞新城疫抗體ELISA檢測試劑盒的性能、價格及試驗時長等數(shù)據(jù)，B公司生產(chǎn)的ELISA檢測試劑盒價格優(yōu)勢明顯且產(chǎn)品性能完全能夠滿足臨床需要，適于臨床樣本的大規(guī)模檢測。

參考文獻：

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[2] 劉金玲，李曉靜，李紅杰，等.檢測雞新城疫病毒和雞傳染性支氣管炎病毒雙重RT-PCR的建立與初步應(yīng)用[J].中國獸醫(yī)學(xué)報，2016，36（10）：1701-1705.

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