程 華謝 冬李 健畢建洪洪志堅

(合肥師范學院 化學與化學工程學院，安徽 合肥 230061)

0 引言

隨著屠呦呦的研究成果獲得諾貝爾獎之后，中藥吸引著大量研究者的注意，在世界舞臺上扮演著越來越重要的作用.為充分發(fā)揮中藥飲片的藥效，保證藥品生產(chǎn)加工階段的質(zhì)量，我國需要對中藥行業(yè)的認知和質(zhì)量標準規(guī)范進行完善，加強對中藥飲片炮制規(guī)范的研究，使得中藥產(chǎn)業(yè)實現(xiàn)跨越式發(fā)展.而蒼術是我國傳統(tǒng)中藥材，具有燥濕健脾，祛風散寒，明目等功效，本文將對焦蒼術中藥炮制品的質(zhì)量標準進行研究，以期為大力發(fā)展蒼術的炮制產(chǎn)品提供數(shù)據(jù)支撐.

蒼術為多年生的草本植物，根莖單生或者簇生，莖枝具有疏被蛛絲狀毛，根狀莖呈平臥或者斜升狀，根莖粗長或者通常呈現(xiàn)疙瘩狀，一般生多數(shù)等粗等長或者近似等長的不定根.[1]蒼術通常生長在稀疏柞樺林和灌木林帶山坡草地，灌叢及林間草叢當中，為稀見伴生植物.按照生長地理位置的不同可分類為茅蒼術，北蒼術和關蒼術.常分布于黑龍江，遼寧，內(nèi)蒙古，河北，山西，吉林，江蘇，湖北省房縣等地.其中江蘇是茅蒼術的主要產(chǎn)區(qū)，被稱為主要的地道蒼術產(chǎn)區(qū)，通常供應全國.[2-4]

蒼術具有燥濕健脾，祛風濕的功效，它主治脘腹脹滿，濕阻中焦，夜盲，泄瀉，水腫，腳氣痿蹙，風寒感冒，風濕痹痛，眼目昏澀等病癥.其主要具有調(diào)整胃腸運動的作用，同時由于它能夠抑制胃酸的分泌和增強胃黏膜保護作用，從而達到抗?jié)兊哪康?蒼術也可以調(diào)節(jié)血糖(一般降低血糖)，它還具有抑菌和保肝的作用，同時具有較強的抗缺氧能力.蒼術在大劑量使用時會抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)，具有鎮(zhèn)靜的作用.[5-9]

蒼術在炮制前，需要對其進行一般的處理.首先取其原藥材，除去雜質(zhì)，并且用水浸泡，洗凈，潤透，然后切厚片，干燥.最后篩去碎屑，進行炮制.目前市場上主要的幾種蒼術中藥炮制品是按以下方法制成的：[10-12](1)制蒼術：取蒼術片，用米泔水浸泡數(shù)小時，取出，置于炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒干，篩去碎屑.(2)麩炒蒼術：首先將鍋燒熱，向其中撒入麥麩，用中火加熱.待冒煙時投入蒼術片，不斷翻炒，當炒至深黃色時，取出，篩去麥麩，放涼.蒼術片每100 kg用麥麩10 kg.(3)焦蒼術：取蒼術片，放于炒制容器內(nèi)，用中火加熱，炒至褐色時，噴淋少量清水，再用文火炒干，取出放涼，篩去碎屑即可.

但參閱目前中國藥典數(shù)據(jù)，雖然對相關藥材如蒼術有明確的質(zhì)量標準數(shù)據(jù)，但是對其炮制品并沒有確切的質(zhì)量規(guī)范數(shù)據(jù)，在公開文獻中也很少有這方面的資料.為此，本研究選取了不同產(chǎn)地不同批次的焦蒼術中藥炮制品，對其中藥炮制規(guī)范項目進行測定研究，探討其性狀及質(zhì)量標準數(shù)據(jù)如有效成分蒼術素、水分、總灰分含量，望為進一步制定焦蒼術中藥飲片炮制標準提供參考數(shù)據(jù)資料.

1 實驗材料與方法

1.1 實驗材料

樣品：本研究收集的蒼術采收地來源于江蘇，湖北等地，采用了10批樣品，代號分別為：a-湖北，b-黑龍江，c-遼寧，d-內(nèi)蒙古，e-吉林，f-山西，g-河北，YP-JCZ-001-江蘇，YP-JCZ-002-江蘇，YP-JCZ-003-江蘇.選取蒼術(茅蒼術)作為對照藥材，來源于中國食品藥品檢定研究院，批號為120932-201407.選取蒼術素為對照品，來源于中國食品藥品檢定研究院，批號為111924-201404.

試劑：純化水、無水乙醇AR、濃鹽酸AR、甲苯AR、丙酮AR、甲醇(色譜級)、石油醚(60℃～90℃)AR、甘油AR、硫酸AR、水合氯醛AR等.

1.2 主要儀器

高效液相色譜儀(型號：LC-20A，日本島津公司);分析天平(型號：AL204，杭州康納科技有限公司);六兩裝高速中藥粉碎機(型號：LG-06A，瑞安市百信藥機械廠);電熱鼓風干燥箱(型號：GZX-9240MBE，上海博迅實業(yè)有限公司);顯微鏡(型號：BA-310，北京中儀光科科技發(fā)展有限公司);超聲波清洗器(型號：700VDE，合肥金尼克機械制造有限公司);薄層電動點樣器(型號：HAD8-DYQ-I，北京恒奧德儀器有限公司);循環(huán)水式真空泵(型號：SHZ-DⅢ型，河南省予華儀器有限公司);回旋式振蕩器(型號：HY-5，江蘇金城國勝實驗儀器廠);馬弗爐(型號：SX-4-10，天津泰斯特儀器有限公司)等.

1.3 實驗方法

1.3.1 顯微鑒別[13]

取焦蒼術樣品置于六兩裝高速中藥粉碎機中粉碎，然后取粉末過3號篩，挑取少量粉末置于載玻片上，滴加兩滴水合氯醛溶液(取水合氯醛50 g，加蒸餾水15 ml與甘油10 ml使溶解)和稀甘油試液(取甘油33 ml，加蒸餾水10 ml，再加樟腦少許或液化苯酚1滴)，不可加熱，蓋上載玻片，吸出氣泡.顯微鏡下檢視樣品內(nèi)部結構.

1.3.2 薄層色譜鑒別

2015版藥典將蒼術素作為蒼術定性鑒別的指標成分，因此在薄層色譜定性鑒別中選取蒼術素作為對照品.[14]

供試品溶液的制備：用電子分析天平稱取本品粉末0.8 g，倒入貼好標簽的錐形瓶，用10 ml移液管移取甲醇l0 ml，用超聲清洗器超聲處理15分鐘，過濾，取過濾液作為供試品溶液.同法制對照藥材溶液.

對照品溶液的制備：取蒼術素對照品，用甲醇溶解，而后制成每1 ml甲醇含0.2 mg對照品溶液.

將電動點樣器平穩(wěn)放在工作臺上，插上電源，打開開關，預熱，當上升溫度縮回，再設定到所定溫度，輸入供試品溶液6μl、對照藥材溶液6μl、對照品溶液2μl和打點數(shù)12等一系列參數(shù)在電腦程序上，然后用甲醇潤洗微量注射器2次，而后吸取供試品溶液10次、照藥材溶液1次、對照品溶液1次，每次吸都得用甲醇潤洗，并排除氣泡，針頭擦拭干凈，然后將微量注射器放在點樣針尖，然后點擊運行按鈕，打點.而后將硅膠G板分別在以石油醚(60℃～90℃)-丙酮體積配比為9∶2展開劑的展缸里豎直展開，大約跑版跑到板最上端1 cm處，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，并加熱至顯色明晰.

1.3.3 水分測定(甲苯法[15])

甲苯法：取供試品適量(相當于含水量1～4 ml)，精密稱定，置蒸餾燒瓶中，加甲苯200 ml，必要時加入干燥、潔凈的沸石數(shù)粒，將儀器各部分連接，自冷凝管頂端加入甲苯，至充滿收集管的狹細部分.將燒瓶置電熱套中緩緩加熱，待甲苯開始沸騰時，調(diào)節(jié)溫度，使每秒鐘餾出2滴.待水分完全餾出，即測定管刻度部分的水量不再增加時，將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗，再用飽蘸甲苯的長刷或其他適宜的方法，將管壁上附著的甲苯推下，繼續(xù)蒸餾5分鐘，放冷至室溫，拆卸裝置，如有水黏附在收集管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置，使水分與甲苯完全分離(可加亞甲藍粉末少量，使水染成藍色，以便分離觀察).檢讀水量，并計算供試品中的含水量(%).每批樣品分別測試兩次，取其平均值.

1.3.4 總灰分測定

將焦蒼術粉碎，使能通過2號篩，混合均勻后，取供試品2～3 g，放置于熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量(準確至0.0001 g)，緩緩熾熱，注意避免燃燒.實驗操作時，首先將樣品放進馬弗爐里于150℃炭化2小時，待炭化完全，再升高溫度到600℃計時灼燒5小時，實驗中發(fā)現(xiàn)樣品出現(xiàn)灰化不完全現(xiàn)象，通過往坩堝里加入適量熱水，在電爐上蒸干后再放入馬弗爐里在600℃條件下灼燒5小時，逐漸升高至600℃，使其完全灰化并至恒重.根據(jù)殘渣重量，計算供試品中總灰分的含量(%).如供試品不易灰化，可將坩堝放冷，加熱水或10%硝酸鐵溶液2 ml，使殘渣濕潤，然后置于電爐上蒸干，殘渣照前法熾灼，至坩堝內(nèi)容物完全灰化.每批樣品分別測試兩次，取其平均值.

1.3.5 有效成分蒼術素的含量測定

1.3.5.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑

儀器設備：島津LC-20A液相色譜儀

色譜柱：島津InertSustain C18柱5 um(250 mm*4.6 mm)

檢測波長：340 nnm;流速：1 ml/min;

柱溫：35℃

流動相：甲醇-水(79∶21)

1.3.5.2 樣品前處理與有效成分測定[16]

對照品溶液的制備：取蒼術素的對照品，用甲醇溶解，而后制成每1 ml甲醇含0.2 mg的溶液.

供試品溶液的制備：精密稱定本品粉末0.2 g，置錐形瓶中，移取甲醇50 ml，塞緊，稱重，用超聲清洗器超聲處理1小時，放冷，再稱重，用甲醇補重，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得.

測定時分別移取對照品溶液、試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得.

1.3.5.3 線性關系考察

精密稱取蒼術素對照品4.01 mg，用甲醇溶解，而后稀釋到200 ml，搖勻，即得母液.精密吸取1μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，注入液相色譜儀測定.

1.3.5.4 穩(wěn)定性實驗

精密吸取對照品溶液10μl，依照各自色譜條件，分別在0、15及19小時進樣一次.

1.3.5.5 重復性實驗

取蒼術素對照品6.35 mg溶于250 ml甲醇中，配制成蒼術素對照品溶液(0.0254 mg/ml)，取該對照品6份，每份進樣10μl.

2 結果與討論

2.1 性狀描述

關于焦蒼術性狀的描述，其顏色范圍基本屬于黃褐色，再結合10批焦蒼術樣品實物性狀，將本品性狀描述為“黃褐色的飲片”.將本品攤開，嗅其氣味，本品香氣較淡，味辛、苦，故性狀描述為“香氣較淡，味辛、苦”.將其打粉，粉末呈黃棕色.圖1是焦蒼術的樣品及其粉末圖.

圖1 焦蒼術樣品及其粉末Fig.1 The sample and its powder of coked rhizoma atractylodis

2.2 樣品鑒別

2.2.1 顯微鑒別

本品粉末呈黃棕色.其內(nèi)部結構中纖維大多成束，呈長梭形，木質(zhì)化，細胞壁厚.石細胞較多，有長方形、多角形，細胞壁厚.菊糖常見，呈紋理噴射狀.導管多見(見圖2).

圖2 焦蒼術粉末顯微圖Fig.2 The microscopic images of coked rhizoma atractylodis

2.2.2 薄層色譜

取10批焦蒼術樣品，按照前述薄層色譜鑒別方法進行實驗，鑒別結果如下圖3所示.日光下檢視，發(fā)現(xiàn)供試品色譜與蒼術對照藥材，蒼術素對照品色譜在G板的相同位置顯示相同顏色的斑點，見圖3.說明10批供試品中都含有蒼術中的特征成分蒼術素，鑒定供試品是焦蒼術樣品.

圖3 日光下焦蒼術薄層色譜圖Fig.3 The thin-layer chromatography image of coked rhizoma atractylodis under sunlight

2.3 水分測定

分別取焦蒼術粉末，按照前述甲苯法對10批樣品進行水分測定，見表1.結果平均值為10.382% ，最大值為16.025%，最小值為5.505%.鑒于本品屬于蒼術的炮制品，受炮制過程影響，本品比原藥材水分含量大;其次可看出不同批次產(chǎn)品，由于全國各地土壤濕度、氣候等條件不同，導致由于生長環(huán)境不同帶來的水分含量數(shù)據(jù)有較大差異.總體來說焦蒼術炮制品水分含量的規(guī)定限度應不得過17.0%.

表1 10批焦蒼術樣品水分測定數(shù)據(jù)Tab.1 The results of moisture of 10 batches of coked rhizoma atractylodis

2.4 總灰分測定

分別取焦蒼術粉末，按照前述總灰分測定方法對10批樣品進行總灰分測定進行實驗，結果見表2.其結果平均值為8.316%，最大值為13.115%，最小值為4.370%;可看出不同產(chǎn)地不同批次產(chǎn)品，由于其生長環(huán)境不同，總灰分含量也有較大差異.總體來說焦蒼術炮制品總灰分含量的規(guī)定限度應不得超過14.0%.

表2 10批焦蒼術樣品總灰分測定數(shù)據(jù)Tab.2 The results of total ash of 10 batches of coked rhizoma atractylodis

2.5 有效成分蒼術素的含量測定

蒼術主要含揮發(fā)油，約占5%～9%，倍半萜類和聚乙烯炔成分是蒼術中最主要的兩大類活性成分，前者主要的指標性成分為β-桉葉醇，后者則為蒼術素.[16]2015版藥典已將蒼術素作為蒼術定性鑒別的指標成分，故在焦蒼術炮制品中依然選擇蒼術中主要成分蒼術素作為含量測定指標，可以較好地控制本品的內(nèi)在品質(zhì).

2.5.1 有效成分含量限度的確定

按照前述高效液相色譜操作條件，對10批樣品蒼術素的含量進行測定，結果見表4.由于生長環(huán)境及可能炮制過程處理上的差異，致使不同樣品有效成分含量有較大差別.根據(jù)10批樣品測定數(shù)據(jù)，結果平均值為0.364%，最大值為0.582%，最小值為0.083%，根據(jù)測定結果建議本品蒼術素含量限度暫定為：本品按干燥品計算，含蒼術素計，不得少于0.08%.

表3 10批焦蒼術樣品有效成分含量測定數(shù)據(jù)Tab.3 The results of effective component of 10 batches of coked rhizoma atractylodis

2.5.2 線性關系考察

精密稱取蒼術素對照品4.01 mg稀釋至200 ml，加甲醇使溶解稀釋至刻度，搖勻即成母液.精密吸取上述對照品溶液1μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl注入液相色譜儀，按前述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值取l g為底的對數(shù)值為縱坐標，對照品進樣量取l g為底的對數(shù)值為橫坐標，繪制標準曲線，蒼術素回歸方程y=1.0063x+7.064，R2=0.9998，測量結果詳見表4及圖4，表明蒼術素在0.02005～0.50125μg之間呈良好線性.

表4 線性關系測定結果Tab.4 The results of linear relation

圖4 線性關系圖Fig.4 The image of linear relation

2.5.3 穩(wěn)定性實驗

精密吸取對照品溶液10μl，按照各自色譜條件，分別在0、15及19小時進樣一次，結果如表5所示，表明對照品溶液中各成分在19小時內(nèi)穩(wěn)定性良好.

表5 穩(wěn)定性實驗結果Tab.5 The results of stability

2.5.4 重復性實驗

取蒼術素對照品6.35 mg溶于250 ml甲醇中，配制成蒼術素對照品溶液(0.0254 mg/ml)，取該對照品6份，每份進樣10μl，峰面積及統(tǒng)計結果見表6.實驗結果表明該方法重現(xiàn)性較好.

表6 重復性實驗Tab.6 The results of repeatability

3 結語

本研究工作結合了中國藥典的研究方法，使用顯微鑒別和薄層色譜分析法對焦蒼術做定性鑒別.同時對不同產(chǎn)地、不同批次的10批焦蒼術樣品進行水分、總灰分、蒼術素有效成分含量進行測定.結果顯示，由于生長環(huán)境及可能炮制過程處理上的差異，致使不同樣品質(zhì)量數(shù)據(jù)有較大差別.為統(tǒng)籌兼顧全國市場上的焦蒼術品質(zhì)特征，規(guī)定焦蒼術炮制品水分含量應不得超過17.0%，總灰分含量應不得超過14.0%，蒼術素含量按干燥品計算含量應不得少于0.08%.希望這些研究結果能為進一步制定焦蒼術中藥飲片炮制標準做參考.