王 秀，曹桂群，文 強(qiáng)，徐志紅

(德陽(yáng)市人民醫(yī)院生殖遺傳科，四川德陽(yáng) 618000)

地中海貧血(地貧)是一種常染色體隱性遺傳病，是由于編碼珠蛋白的基因發(fā)生缺失或點(diǎn)突變，使珠蛋白鏈合成缺如或不足所致的遺傳性溶血性貧血。在我國(guó)主要以α地貧和β地貧最為常見(jiàn)[1]。在長(zhǎng)江以南地區(qū)，廣東、廣西、四川、海南等地發(fā)病率較高。由于重型α地貧患兒大多數(shù)在懷孕的中晚期宮內(nèi)死亡，而重型β地貧患兒除定期輸血、除鐵治療和造血干細(xì)胞移植外，尚無(wú)有效的治愈方法，只能通過(guò)生育前進(jìn)行胎兒羊水細(xì)胞的地貧基因產(chǎn)前診斷，提早發(fā)現(xiàn)并終止妊娠，從而避免重型地貧患兒的出生[2]。為初步了解德陽(yáng)地區(qū)人群中α地貧和β地貧基因型的分布情況，本研究對(duì)2 498例疑診地貧患者進(jìn)行了基因型分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2012年2月至2018年9月本院門(mén)診及住院部就診的2 498例疑診地貧患者作為研究對(duì)象。血常規(guī)檢測(cè)為小細(xì)胞低色素性貧血，以平均紅細(xì)胞比容小于80 fL，平均紅細(xì)胞血紅蛋白小于27 pg作為篩查依據(jù)[3]，部分患者為有地貧家族史，需進(jìn)一步確診者。其中男462例，女2 036例；年齡生后5 h～84歲。

1.2樣本采集與處理 采用枸櫞酸鈉抗凝管采集靜脈全血2 mL，及時(shí)按DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)的方法提取DNA檢測(cè)或置于-20 ℃冰箱冷凍保存并于7 d內(nèi)提取DNA檢測(cè)。

1.3主要設(shè)備與檢測(cè)試劑 主要設(shè)備為美國(guó)BIO-RAD定量擴(kuò)增儀，凱普HB 2012A核酸分子雜交儀等。采用潮州凱普生物化學(xué)有限公司生產(chǎn)的血液基因DNA提取試劑盒(離心柱型)和α/β地貧基因檢測(cè)試劑盒。

1.4方法 采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)進(jìn)行地貧基因檢測(cè)(PCR+導(dǎo)流雜交法)，檢測(cè)3種缺失型α-地貧(--SEA、-α3.7、-α4.2)、3種突變型α-地貧(CS、QS、WS)及17個(gè)位點(diǎn)的19種突變型β-地貧。α/β地貧基因擴(kuò)增及檢測(cè)采用凱普配套DNA提取試劑盒提取DNA基因組，提取的樣本DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行導(dǎo)流雜交。雜交顯色后人工肉眼判讀，陽(yáng)性結(jié)果為藍(lán)紫色斑點(diǎn)。操作過(guò)程參照凱普地貧基因檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1地貧基因檢出率 2 498例疑診患者檢出地貧基因攜帶者1 537例，檢出率為61.53%，共檢出41種地貧基因突變類(lèi)型，其中α-地貧756例，占49.19%(756/1 537)，β-地貧752例，占48.93%(752/1 537)，αβ復(fù)合型地貧29例，占1.89%(29/1 537)。

2.2α地貧的基因類(lèi)型及其分布 756例α-地貧基因攜帶者中檢出13種基因型，前4位α-地貧的基因型及構(gòu)成比分別為--SEA/αα(74.87%)、-α3.7/αα(12.70%)、--SEA/αα合并-α3.7(3.70%)、-α4.2/αα(2.65%)。根據(jù)臨床特點(diǎn)區(qū)分，靜止型145例(19.18%)，標(biāo)準(zhǔn)型571例(75.53%)，中間型40例(5.29%)。見(jiàn)表1。

表1 α-地貧基因型及構(gòu)成比

2.3β-地貧的基因類(lèi)型及其分布 752例β-地貧基因突變類(lèi)型以CD41-42(35.37%)、IVS-2-654(26.60%)、CD17(24.20%)、-28(5.98%)為主。其基因型和構(gòu)成比見(jiàn)表2。

表2 β-地貧基因型及構(gòu)成比

2.4αβ復(fù)合地貧的基因類(lèi)型 αβ復(fù)合地貧29例，涉及5種α-地貧基因突變類(lèi)型和5種β-地貧基因突變類(lèi)型。復(fù)合型α-地貧基因型以--SEA/αα(48.28%)、-α3.7/αα(31.03%)為主，β-地貧基因突變類(lèi)型多見(jiàn)于CD41-42(58.62%)。見(jiàn)表3。

表3 αβ復(fù)合地貧基因型及構(gòu)成比[n(%)]

3 討 論

地貧是全球分布最廣、累及人群最多的一種單基因遺傳病。在我國(guó)南方各地報(bào)道的地貧檢出率為2.50%～20.00%[4]。由于地貧基因攜帶率存在明顯的地域差異，在不同種族、不同地域具有不同的分布特點(diǎn)，德陽(yáng)地區(qū)2 498例疑診患者檢出地貧基因攜帶者1 537例，檢出率為61.53%，α-地貧檢出率為30.26%，β-地貧檢出率為30.10%，αβ復(fù)合地貧檢出率為1.16%，檢出率明顯高于四川自貢、遂寧、瀘州地區(qū)等。α型和β型地貧基因陽(yáng)性病例的比值為1.01∶1，較自貢(1.27∶1)低，高于遂寧(0.58∶1)、瀘州(0.65∶1)[5-7]。表明德陽(yáng)地區(qū)地貧檢出率較高，α地貧與β地貧檢出率相接近，與毗鄰地區(qū)明顯不同。

本研究α地貧756例，檢出13種α地貧基因類(lèi)型，主要以東南亞型(--SEA/αα缺失型)為主(74.86%)，α-3.7/αα缺失型占12.70%，--SEA/α3.7缺失型占3.70%，-α4.2/αα缺失型占2.65%。德陽(yáng)地區(qū)α地貧基因常見(jiàn)類(lèi)型與賀鈺磊等[8]報(bào)道的四川地區(qū)相似，但構(gòu)成比稍有所不同。其中非缺失型比例為3.97%，以HbQS突變占多數(shù)(15/30)，這點(diǎn)又與四川地區(qū)、廣東和廣西地貧高發(fā)地區(qū)非缺失突變以HbCS突變占多數(shù)不同[8-10]。

本研究β地貧752例，檢出12種突變基因類(lèi)型，15種基因組合形式，雜合突變?yōu)橹?。?位依次為CD 41-42、IVS-2-654、CD17、-28。這4類(lèi)基因型總例數(shù)為693例，占92.15%。德陽(yáng)地區(qū)β地貧主要類(lèi)型為CD 41-42，與相關(guān)研究結(jié)果相似[5-6]，與陳紅英等[7]和唐敏等[11]報(bào)道的四川瀘州地區(qū)和川南地區(qū)以CD17突變型為主有差異。

本研究αβ復(fù)合型地貧29例(1.89%),13種基因突變類(lèi)型，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的自貢地區(qū)復(fù)合型地貧檢出率為2.06%相近[5]。αβ復(fù)合地貧基因型以β-地貧CD41-42復(fù)合α-地貧——SEA/αα和-α3.7/αα為主，可能與--SEA/αα、-α3.7/αα與CD41-42在德陽(yáng)地區(qū)地貧基因型中最為常見(jiàn)有關(guān)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，αβ復(fù)合型地貧患者無(wú)論與α或β地貧患者婚配，下一代均可能生出中或重型地貧患兒，如雙方均為αβ復(fù)合型地貧患者，生出重型患兒的概率將會(huì)大大提升[12]。

德陽(yáng)地區(qū)人口歷經(jīng)“湖廣填四川”、支援三線建設(shè)人群的遷移混雜，遺傳背景復(fù)雜，地貧檢出率較高且基因類(lèi)型較多，共檢出41種，α地貧與β地貧攜帶率相接近，分布具有區(qū)域性特點(diǎn)。本研究較好地了解了德陽(yáng)地區(qū)地貧的基因型檢出情況及分布特點(diǎn)，為開(kāi)展地貧的產(chǎn)前診斷提供了有益資料。因此，作為高發(fā)地區(qū),積極開(kāi)展地貧人群的基因檢測(cè)，對(duì)夫婦雙方均為地貧攜帶者或已生育過(guò)地貧兒的孕婦進(jìn)行產(chǎn)前診斷，防止重型地貧兒出生是降低地貧發(fā)生率最有效的預(yù)防措施[8]。有效貫徹遺傳咨詢及產(chǎn)前診斷，對(duì)地貧的預(yù)防、診治均具有十分重要的臨床意義。