彭 洋，楊書珍，張美紅，程運(yùn)江，彭麗桃,*

（1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，湖北 武漢 430070；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝林學(xué)學(xué)院，湖北 武漢 430070）

我國柑橘種植面積廣、品種多、資源豐富，其果實(shí)營養(yǎng)豐富，深受消費(fèi)者歡迎[1]。但柑橘產(chǎn)地偏遠(yuǎn)，同時(shí)果實(shí)成熟期集中，采后極易因感染病原菌腐爛變質(zhì)而降低品質(zhì)，造成較大的經(jīng)濟(jì)損失和環(huán)境污染問題[2]，其中意大利青霉（Penicillium italicum）和指狀青霉（Penicillium digitatum）引起的侵染性病害最為常見[3]。

目前，柑橘采后病害防治技術(shù)主要是通過如苯并咪唑、咪鮮胺、抑霉唑、丙環(huán)唑及鄰苯基苯酚鈉等化學(xué)殺菌劑處理果實(shí)[4]。但長期使用化學(xué)殺菌劑會(huì)帶來諸如病菌抗藥性、環(huán)境污染、食用安全風(fēng)險(xiǎn)等問題[5]。因此，各國都在積極探索效果良好且對人類無潛在危害的病害控制措施，包括如采用熱燙、覆膜和輻射處理等物理措施；利用通常被認(rèn)為是安全的藥劑如碳酸鹽、殼聚糖等處理；采用微生物拮抗菌、生物活性物質(zhì)和誘導(dǎo)自然抗性等生物防治措施，以及上述技術(shù)的綜合運(yùn)用[6]。其中，植物誘導(dǎo)抗病性這種新興的生物防治方式已成為研究熱點(diǎn)，其主要是利用各類誘導(dǎo)因子使植物產(chǎn)生并積累植保素類的抗病物質(zhì)，從而增強(qiáng)植物抗病性，抵抗病原菌的侵染[7]。

本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，接種毛霉（Actinomucor elegan）能刺激臍橙組織在接種部位局部產(chǎn)生紅色物質(zhì)，在該位置再接種意大利青霉后果實(shí)不會(huì)腐爛，表明紅色物質(zhì)與果實(shí)抗病性密切相關(guān)[8]。本實(shí)驗(yàn)在制備出該物質(zhì)的基礎(chǔ)上評價(jià)其對意大利青霉的體外抑菌活性，分析其對意大利青霉細(xì)胞壁、細(xì)胞膜通透性及細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)組分的影響，探討其抑菌作用機(jī)制，以期為后續(xù)抑菌機(jī)理的深入研究及柑橘采后病害的防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

臍橙產(chǎn)自贛南，從白沙洲水果批發(fā)市場采購后運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行相關(guān)處理。毛霉（Actinomucor elegan）由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心保存，馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基4 ℃保存，備用。意大利青霉購自國家菌種保藏中心，PDA培養(yǎng)基4 ℃保存。

甲醇（色譜純）、二氯甲烷、石油醚、正庚烷、氯仿、濃硫酸、氫氧化鉀、次氯酸鈉溶液、無水乙醇國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；磷酸香草醛、D-硫酸鹽葡糖胺、熒光增白劑（calcofluor white，CFW） 上海甄準(zhǔn)生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海愛明儀器有限公司；光學(xué)顯微鏡、免疫熒光顯微鏡（immunof l urorescence microscopy，IFM） 美國INOVA Diagnostics公司；恒溫培養(yǎng)箱武漢德力祥儀器設(shè)備有限公司；高效液相色譜儀 日本島津公司。

1.3 方法

1.3.1 抗病性紅色物質(zhì)的制備、分離及純化

臍橙用質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%次氯酸鈉溶液清洗后再用清水清洗兩次，晾干。對每個(gè)果實(shí)進(jìn)行造傷，傷口注射20～30 μL 1h107CFU/mL毛霉孢子懸浮液，置于26 ℃生化培養(yǎng)箱觀察培養(yǎng)4～5 d。將帶有紅色物質(zhì)的果皮組織剝離，液氮研磨，冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

取樣品粉末，加入甲醇，超聲浸提，4 ℃離心，收集上清液，重復(fù)提取兩次。提取液濃縮后用石油醚除去脂溶性成分，再用二氯甲烷萃取，萃取相過C18柱后冷凍干燥得到紅色物質(zhì)，提取及分離純化過程中采用高效液相色譜檢測以確保所提物質(zhì)為果皮紅色物質(zhì)。

1.3.2 意大利青霉孢子萌發(fā)及芽管伸長的測定

參考柳麗梅等[9]的方法，取紅色物質(zhì)溶液（體積分?jǐn)?shù)20%甲醇溶液溶解）與培養(yǎng)基混勻，使培養(yǎng)基中紅色物質(zhì)的最終質(zhì)量濃度分別為12.5、25、50、100、200 μg/mL，以無菌水作為空白對照（CK），將培養(yǎng)基涂于載玻片上，取20 μL意大利青霉孢子懸浮液，滴于凝固的含紅色物質(zhì)的培養(yǎng)基上，放在26 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，7～8 h后觀察孢子萌發(fā)情況，按式（1）、（2）計(jì)算孢子萌發(fā)率及抑制率。芽管伸長實(shí)驗(yàn)操作步驟同上，在26 ℃培養(yǎng)11～12 h后測量芽管伸長長度。

1.3.3 意大利青霉絲生長量的測定

參考Yang Shuzhen等[10]的菌餅實(shí)驗(yàn)方法。取適量紅色物質(zhì)溶液與培養(yǎng)基混勻，使得培養(yǎng)基紅色物質(zhì)的終質(zhì)量濃度分別為25、50、100、200 μg/mL，將在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)12 h的意大利青霉用打孔器打出直徑5 mm的菌餅，將菌餅反貼在含紅色物質(zhì)的培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)皿貼3 塊，26 ℃培養(yǎng)，每24 h測量菌斑直徑。

菌絲生長量測定參考Dikbas等[11]的方法。將孢子懸浮液加入馬鈴薯-葡萄糖肉湯（potato-dextrose broth，PDB）培養(yǎng)基中，封口、搖勻，于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中125 r/min、28 ℃培養(yǎng)24 h。將菌絲過濾，除去多余水分后用無菌水沖洗兩次，稱取3 g濕菌絲，分別加入紅色物質(zhì)質(zhì)量濃度為25、50、100、200 μg/mL的PDB培養(yǎng)基中，以無菌水作為空白對照（CK），繼續(xù)培養(yǎng)48 h。4 層紗布過濾菌絲，蒸餾水沖洗3 次，濾干表面水分后冷凍干燥，記錄菌絲干質(zhì)量。

1.3.4 CFW染色觀察幾丁質(zhì)轉(zhuǎn)移現(xiàn)象

參考Viragh等[12]的方法進(jìn)行CFW染色，將意大利青霉孢子懸浮液分別涂布于紅色物質(zhì)質(zhì)量濃度為50、100 μg/mL的25 mL PDA平板上，以無菌水作為空白對照（CK），斜插無菌蓋玻片后封口，26 ℃倒置培養(yǎng)2 d，取出長有菌絲的蓋玻片，置于潔凈的載玻片上，滴加足量CFW染液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)10% KOH溶液混合液（現(xiàn)配現(xiàn)用）充分浸潤菌絲，室溫染色1 min，蒸餾水洗去多余染液，IFM觀察，紫外光激發(fā)，菌絲細(xì)胞壁呈藍(lán)色熒光。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。

1.3.5 幾丁質(zhì)含量的測定

參考Viragh[12]和Stalhberger[13]等的方法。將意大利青霉孢子懸浮液接種于PDB培養(yǎng)基中，加入適量紅色物質(zhì)溶液，控制最終質(zhì)量濃度為50、100、200 μg/mL，以無菌水作空白對照（CK），26 ℃、125 r/min振蕩培養(yǎng)48 h，4 層紗布過濾菌絲，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗2 次，濾干水分。將菌絲除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)后冷凍干燥，取10 mg凍干粉末于10 mL離心管中，向各管中加0.5 mL 2 mol/L濃硫酸，沸水浴4 h充分裂解。收集裂解產(chǎn)物，12 000 r/min離心5 min，上清液用2 mol/L KOH調(diào)至pH 3，取100 μL加1 mL乙酰丙酮溶液，以蒸餾水為空白對照（CK），搖勻，沸水浴25 min，冷卻后加1.5 mL對二甲胺基苯甲醛溶液和3.0 mL無水乙醇，搖勻，60 ℃水浴1 h，測定各樣品在520 nm波長處的吸光度，用D-硫酸鹽葡糖胺做標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算幾丁質(zhì)含量。

1.3.6 PI染色觀察菌絲體細(xì)胞膜的完整性

參考Ouyang Qiuli等[14]的方法，將意大利青霉孢子懸浮液分別涂布于紅色物質(zhì)質(zhì)量濃度為50、100 μg/mL的PDA培養(yǎng)基上，以無菌水作對照，斜插無菌蓋玻片后封口，26 ℃倒置培養(yǎng)2 d，取出蓋玻片，置于長有菌絲的潔凈載玻片上，滴幾滴50 μg/mL PI染色液（PBS配制），避光染色10 min，用蒸餾水洗去多余染色液，置于IFM下觀察。

1.3.7 菌絲膜外電導(dǎo)率的測定

參考Tao Nengguo等[15]的方法。菌絲培養(yǎng)方法同1.3.5節(jié)，稱取2.00 g濕菌絲于50 mL潔凈離心管中，用20 mL雙蒸水重懸，加入適量紅色物質(zhì)溶液，控制最終質(zhì)量濃度為50、100、200 μg/mL，以無菌水作空白對照（CK），用電導(dǎo)率儀測定加入紅色物質(zhì)后0、30、60、90、120 min時(shí)溶液的電導(dǎo)率。

1.3.8 總脂質(zhì)含量的測定

參考Ahmad等[16]的方法。菌絲培養(yǎng)方法同1.3.5節(jié)，將菌絲冷凍干燥，液氮研磨成干粉，4 ℃保存?zhèn)溆?。精確稱取0.10 g菌絲干粉于10 mL離心管中，依次加入0.8 mL蒸餾水、1 mL甲醇、2 mL氯仿，漩渦振蕩，65 ℃水浴30 min，6 000hg離心，吸取全部氯仿相到另一離心管中，加入0.2 mL生理鹽水，漩渦振蕩后靜置分層，取氯仿相到玻璃試管中，加入500 μL濃硫酸，沸水浴10 min后加入3 mL磷酸香草醛，以無菌水作空白對照（CK）。測定520 nm波長處吸光度，用膽固醇做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.9 麥角固醇含量的測定

參考Tian Jun等[17]的方法。菌絲培養(yǎng)方法同1.3.5節(jié)，稱取1.0 g濕菌絲于50 mL離心管中，加入4 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)25% KOH-乙醇溶液，劇烈振搖2 min后漩渦振蕩1 min，85 ℃水浴4 h，再加入2 mL蒸餾水和5 mL正庚烷，漩渦振蕩2 min，靜置1 h至完全分層，取上層正庚烷相，采用紫外-可見分光光度計(jì)掃描溶液在230～300 nm波長范圍內(nèi)吸光度。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

所有數(shù)據(jù)均為3 次平行實(shí)驗(yàn)測定的平均值，用SPSS 18.0軟件進(jìn)行單因素方差分析及繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗病性紅色物質(zhì)對意大利青霉孢子萌發(fā)及芽管伸長的影響

表1 紅色物質(zhì)對意大利青霉孢子萌發(fā)和芽管伸長的影響Table1 Effects of the red substances on spore germination and germ tube elongation of Penicillium italicum

由表1可看出，紅色物質(zhì)能夠抑制意大利青霉孢子萌發(fā)和芽管伸長，且都呈現(xiàn)明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系（P＜0.05）。紅色物質(zhì)質(zhì)量濃度為25、50、100 μg/mL時(shí)，孢子萌發(fā)率分別為（55.43f0.02）%、（33.61f0.03）%、（1.41f0.00）%，明顯低于空白對照組（91.42f0.01）%。同樣，各質(zhì)量濃度處理組的芽管伸長長度也明顯低于空白對照組（（22.96f1.19）μm）；當(dāng)紅色物質(zhì)質(zhì)量濃度達(dá)到200 μg/mL時(shí)孢子無法長出芽管。

2.2 抗病性紅色物質(zhì)對意大利青霉菌絲生長的影響

圖1 紅色物質(zhì)對意大利青霉菌絲生長的影響Fig.1 Effect of the red substances on mycelial growth of Penicillium italicum

意大利青霉的菌絲體生長受到紅色物質(zhì)的劑量依賴性影響（圖1A），培養(yǎng)初期菌斑直徑增長顯著，但在培養(yǎng)48 h后處理組的菌斑直徑均明顯小于空白對照組；而質(zhì)量濃度為200 μg/mL時(shí)，直到培養(yǎng)的第4天仍能完全抑制意大利青霉菌絲的生長。圖1B為液態(tài)培養(yǎng)后去除初始菌絲質(zhì)量的菌絲干質(zhì)量。經(jīng)液態(tài)培養(yǎng)后，不同處理組的菌絲干質(zhì)量都顯著低于空白對照組（（0.947f0.029）g），說明紅色物質(zhì)對意大利青霉菌絲成熟期也表現(xiàn)出明顯抑制作用；紅色物質(zhì)質(zhì)量濃度達(dá)到200 μg/mL時(shí)，菌絲仍有生長（干質(zhì)量為（0.270f0.009）g），說明菌絲成熟期的耐藥性較孢子萌發(fā)期強(qiáng)。

2.3 抗病性紅色物質(zhì)對幾丁質(zhì)分布的影響

圖2 CFW染色觀察紅色物質(zhì)對菌絲幾丁質(zhì)分布的影響Fig.2 Effect of the red substances on chitin distribution of mycelia observed by CFW staining

如圖2所示，明場下觀察，空白對照組菌絲粗壯、結(jié)構(gòu)完整（圖2A1），而處理組菌絲多分枝（圖2B1），并生成分生孢子（圖2C1）；在暗場下觀察，對照組的少部分菌絲呈微弱的藍(lán)色熒光（圖2A2），處理組菌絲則呈現(xiàn)強(qiáng)烈藍(lán)色熒光（圖2B2、C2），質(zhì)量濃度越高熒光越強(qiáng)，且菌絲末端熒光明顯弱于菌絲根部，細(xì)胞壁節(jié)間熒光強(qiáng)度更高，幾丁質(zhì)轉(zhuǎn)移現(xiàn)象明顯。

2.4 紅色物質(zhì)對意大利青霉菌絲細(xì)胞壁幾丁質(zhì)含量的影響

圖3 紅色物質(zhì)對意大利青霉菌絲細(xì)胞壁幾丁質(zhì)含量的影響Fig.3 Effect of the red substances on chitin content of Penicillium italicum cell wall

總體來看，紅色物質(zhì)處理會(huì)造成意大利青霉菌絲細(xì)胞壁的幾丁質(zhì)含量下降（圖3）。相對于空白對照組（（71.017f1.928）μg/mg），紅色物質(zhì)質(zhì)量濃度分別為25、50、100 μg/mL時(shí)，幾丁質(zhì)含量相應(yīng)下降了22.52%、38.96%、65.26%，紅色物質(zhì)質(zhì)量濃度與幾丁質(zhì)含量變化間呈現(xiàn)明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。

2.5 紅色物質(zhì)對菌絲體細(xì)胞膜完整性的影響

圖4 意大利青霉菌絲PI染色觀察細(xì)胞膜完整性Fig.4 Cell membrane integrity of Penicilicum italicum observed with PI staining

明場下觀察，空白對照組菌絲長勢良好（圖4A1），而處理組的菌絲纖細(xì)，且在逆境生長條件下產(chǎn)生了分生孢子（圖4B1、C1）；暗場下觀察，對照組菌絲基本無紅色熒光（圖4A2），處理組菌絲則呈現(xiàn)較強(qiáng)的熒光，且熒光強(qiáng)度隨紅色物質(zhì)質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)（圖4B2、C2）。

2.6 紅色物質(zhì)對菌絲膜外電導(dǎo)率的影響

圖5 紅色物質(zhì)對菌絲體膜外電導(dǎo)率的影響Fig.5 Effect of the red substances on extracellular conductivity of mycelia

如圖5所示，紅色物質(zhì)對菌絲膜外電導(dǎo)率影響的劑量-效應(yīng)關(guān)系顯著，各組的膜外電導(dǎo)率都隨時(shí)間變化而上升。紅色物質(zhì)處理60 min時(shí)，質(zhì)量濃度為50、100 μg/mL處理組的膜外電導(dǎo)率接近，且高于空白對照組；處理時(shí)間達(dá)到120 min時(shí)，50、100、200 μg/mL處理組的膜外電導(dǎo)率分別為（42.53f0.89）、（49.43f0.63）、（59.37f0.78）μS/cm，顯著高于空白對照組（（34.64f0.79）μS/cm）。

2.7 紅色物質(zhì)對菌絲細(xì)胞膜總脂質(zhì)含量和麥角固醇含量的影響

圖6 紅色物質(zhì)對意大利青霉菌絲細(xì)胞膜總脂質(zhì)含量（A）和麥角固醇含量（B）的影響Fig.6 Effect of the red substances on lipid (A) and ergosterol (B)contents in the cell membrane of mycelia of Penicillium italicus

如圖6所示，隨著紅色物質(zhì)質(zhì)量濃度的增加，菌絲體的細(xì)胞膜總脂質(zhì)含量逐漸降低。相對于空白對照組（（149.519f4.121）mg/g），經(jīng)過50、100、200 μg/mL紅色物質(zhì)處理的菌絲細(xì)胞膜總脂質(zhì)含量分別下降了38.880、64.659、94.030 mg/g。

隨著紅色物質(zhì)質(zhì)量濃度的增加，菌絲體的細(xì)胞膜麥角固醇含量顯著降低。經(jīng)過100、200 μg/mL高質(zhì)量濃度的紅色物質(zhì)處理后，菌絲的細(xì)胞膜麥角固醇含量分別為（1.291f0.025）、（0.729f0.059）mg/g，顯著低于空白對照組（（2.038f0.104）mg/g），而50 μg/mL紅色物質(zhì)處理的菌絲細(xì)胞膜麥角固醇含量下降幅度較小，為（1.845f0.056）mg/g。

3 討 論

毛霉誘導(dǎo)產(chǎn)生的紅色物質(zhì)對意大利青霉的孢子萌發(fā)、芽管伸長、菌絲生長均有很強(qiáng)的抑制作用，且具有濃度效應(yīng)，在質(zhì)量濃度200 μg/mL時(shí)孢子萌發(fā)和菌絲生長幾乎被完全抑制。據(jù)報(bào)道，1.0 μL/mL檸檬醛能完全抑制意大利青霉的生長[16]；2.0 μL/mL松油醇對指狀青霉的孢子萌發(fā)有強(qiáng)烈的抑制作用[18]；對從Koelreuteria apiculata中分離出來的抗真菌物質(zhì)2-苯乙醇進(jìn)行活體實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其能夠抑制意大利青霉和指狀青霉生長的含量為1.5 μL/mL[19]。紅色物質(zhì)的抗菌活性強(qiáng)于上述活性成分，表明其具有很強(qiáng)的抑菌活性，值得深入探討其可能的抑菌作用機(jī)制。

幾丁質(zhì)作為絲狀真菌細(xì)胞壁的主要成分，構(gòu)成了細(xì)胞壁的支架結(jié)構(gòu)，也常被認(rèn)為是抗菌劑作用于細(xì)胞壁的靶點(diǎn)[20]。通過CFW染色發(fā)現(xiàn)幾丁質(zhì)轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象，且紅色物質(zhì)處理會(huì)降低菌絲的幾丁質(zhì)含量，這說明其能夠造成細(xì)胞壁的主要成分幾丁質(zhì)的缺失，使細(xì)胞支架結(jié)構(gòu)遭到破壞。這與D-檸檬烯對酵母菌的抑菌研究中CFW染色觀察到幾丁質(zhì)轉(zhuǎn)移現(xiàn)象[20]以及茴香精油的主要成分茴香腦能抑制毛霉幾丁質(zhì)的合成[21]等研究的結(jié)果一致。

膜通透性是常見的抗真菌劑作用靶標(biāo)。熒光染料PI是一種可對DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，其不能通過活細(xì)胞膜，但能穿過破損的細(xì)胞膜，與細(xì)胞中的DNA結(jié)合產(chǎn)生紅色熒光[17]。IMF觀察表明紅色物質(zhì)能夠破壞意大利青霉菌絲細(xì)胞膜的完整性，這與蒔蘿子精油對擴(kuò)展青霉的細(xì)胞膜損傷[17]及過氧化氫對構(gòu)巢曲霉細(xì)胞膜損傷[22]的結(jié)論一致。紅色物質(zhì)對意大利青霉膜外電導(dǎo)率的測定結(jié)果表明，紅色物質(zhì)能造成細(xì)胞膜跨膜電勢紊亂，導(dǎo)致離子外流，增加了膜通透性；這表明紅色物質(zhì)可攻擊意大利青霉細(xì)胞膜，破壞膜通透性，造成細(xì)胞質(zhì)流失，最終抑制菌絲生長。一些活性抗菌成分也有相似的抑菌作用機(jī)制，如檸檬醛精油對柑橘意大利青霉的抗菌機(jī)制[15]和蒔蘿子精油對黃曲霉的抗菌機(jī)制[17]可能是攻擊細(xì)胞膜和破壞菌絲結(jié)構(gòu)；橙花醇能夠破壞葡萄黑曲霉細(xì)胞膜完整性和選擇透過性[23]；松油醇對指狀青霉也表現(xiàn)出了相似的抑菌機(jī)制[24]。

細(xì)胞膜脂質(zhì)含量的降低會(huì)導(dǎo)致脂溶性物質(zhì)運(yùn)輸受阻和水溶性物質(zhì)運(yùn)輸加劇，破壞細(xì)胞膜的選擇透過性[25]。本研究結(jié)果表明，紅色物質(zhì)降低了細(xì)胞膜總脂質(zhì)含量，且存在劑量-效應(yīng)關(guān)系。相似的結(jié)果在檸檬醛抑制柑橘意大利青霉的研究中[16]也得到驗(yàn)證。作為真菌細(xì)胞膜的特有成分，麥角固醇在確保細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整性與細(xì)胞膜結(jié)合酶的活性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞活力以及物質(zhì)運(yùn)輸方面起著重要作用，且是系列抑菌成分的重要作用靶點(diǎn)。紅色物質(zhì)能夠顯著降低麥角固醇含量，說明其對意大利青霉細(xì)胞膜的作用靶點(diǎn)可能是細(xì)胞膜上的麥角固醇，能夠抑制麥角固醇的生物合成。其他相關(guān)研究也有類似結(jié)果：香芹酚能夠抑制白色念珠菌麥角固醇的合成[25]；丁香油酚降低了紅色毛蘚菌細(xì)胞膜麥角固醇含量[26]；紫蘇醛能夠抑制黑曲霉麥角固醇的合成[27]；香豆素能夠與曲霉細(xì)胞膜上的麥角固醇形成聚合物，導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性增加，最終死亡[28]。這些結(jié)果表明，紅色物質(zhì)通過抑制總脂質(zhì)含量和麥角固醇含量抑制意大利青霉活性。

綜上所述，紅色物質(zhì)對意大利青霉的生長有強(qiáng)烈的抑制作用，可造成菌絲細(xì)胞壁成分缺失和結(jié)構(gòu)改變，破壞細(xì)胞膜完整性，增加其通透性，降低細(xì)胞膜脂質(zhì)含量和麥角固醇含量，具有很高的應(yīng)用開發(fā)價(jià)值。后續(xù)將進(jìn)一步鑒定紅色物質(zhì)的組成與結(jié)構(gòu)，并探索其更高效的誘導(dǎo)機(jī)制和相應(yīng)的生物學(xué)反應(yīng)機(jī)制，為柑橘新型殺菌劑的研發(fā)、產(chǎn)業(yè)化及病害防治的實(shí)踐應(yīng)用提供切實(shí)可行的途徑。