陳香紅

(鄭州市第一人民醫(yī)院，河南 鄭州 450004)

近年來，兒童急性白血病的發(fā)病率逐年升高，成為嚴重威脅兒童生命健康安全的一種惡性腫瘤，其治療非常棘手，大多數(shù)兒童因為對治療方案的不耐受而放棄治療或因嚴重的不良反應而終止治療[1]。尋找兒童急性白血病的早期診斷及判斷預后的指標是目前研究的難點和熱點[2]。基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)屬于目前研究較多且與腫瘤關系密切的一種MMP，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關系密切[3]。半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)是Caspase級聯(lián)反應中重要的效應酶，其高表達能夠促進細胞的凋亡，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中Caspase-3表達的降低是其關鍵因素[4]。本研究采用免疫組化S-P法檢測兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中MMP-9和Caspase-3蛋白的表達，并觀察兩者表達之間的關系以及兩者聯(lián)合檢測對兒童急性髓細胞性白血病的診斷及預后評估價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料入組鄭州大學第一附屬醫(yī)院、鄭州市第一人民醫(yī)院2016年1月至2018年6月收治的經(jīng)病理證實的兒童急性髓細胞性白血病100例，其中男74例，女26例；年齡1.5～13.3歲，中位年齡6.9歲；所有患兒均為初診未治患兒。并選擇同期住院的非惡性血液病患兒50例作為對照，其中男31例，女19例；年齡1.8～13.0歲，中位年齡7.2歲；免疫性血小板減少性紫癜21例，缺鐵性貧血18例，原發(fā)性血小板減少11例。2組患兒的性別、年齡等基線資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已經(jīng)獲得醫(yī)院倫理委員會的審核通過，入組患兒家屬也均已簽署知情同意書。

1.2 主要試劑MMP-9、Caspase-3單克隆抗體購自美國SAB公司；S-P免疫組化試劑盒購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。

1.3 免疫組化S-P法檢測兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中MMP-9和Caspase-3蛋白的表達[5-6]采用免疫組化S-P法檢測100例兒童急性髓細胞性白血病和50例非惡性血液病患兒骨髓細胞中MMP-9和Caspase-3的表達。具體方法：1)首先提取骨髓單個核細胞，并用質(zhì)量分數(shù)4%多聚甲醛固定；2)常規(guī)S-P免疫組化步驟檢測骨髓單個核細胞中MMP-9和Caspase-3蛋白的表達，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 免疫組化結果判讀[7-8]MMP-9和Caspase-3蛋白免疫組化結果均采用半定量法進行判讀。每張切片均隨機選取5個高倍鏡(×400)視野，分別按照染色強度和陽性細胞比例進行評分，然后兩者乘積作為結果，0～1分為(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～5分為中等陽性(++)，6～7分為強陽性(+++)，其中陰性(-)、弱陽性(+)為陰性結果，中等陽性(++)、強陽性(+++)為陽性結果。

1.5 統(tǒng)計學處理采用SPSS 19.0進行統(tǒng)計分析，MMP-9和Caspase-3蛋白的陽性表達率等計數(shù)資料用百分數(shù)表示，比較用χ2檢驗，MMP-9和Caspase-3蛋白的相關性采用Spearman相關分析法分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 不同患兒骨髓細胞中MMP-9和Caspase-3蛋白表達的比較100例兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中MMP-9和Caspase-3的陽性表達率分別為26.00%(26/100)和73.00%(73/100)，50例非惡性血液病患兒的陽性表達率分別為78.00%(39/50)和22.00%(11/50)，比較差異均有統(tǒng)計學意義(χ2=36.706、35.187，P均<0.001)。

2.2 兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中MMP-9和Caspase-3蛋白表達的相關性100例兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中MMP-9和Caspase-3的表達呈負相關關系(rs=-0.615，P<0.001)。見表1。

表1 兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中MMP-9和Caspase-3蛋白表達的相關性 n

注：rs=-0.615，P<0.001

3 討論

兒童急性白血病的主要臨床表現(xiàn)均是骨髓內(nèi)異常的原始造血細胞異常增殖造成的。臨床上兒童急性白血病診治的難點是早期診斷和預后判斷，尋找早診早治手段、改善預后是當前兒童急性白血病臨床研究的熱點問題。白血病細胞向周圍的擴散及遠處轉(zhuǎn)移均需要穿過基底膜，而MMP家族是基底膜主要成分的降解酶類，因此，MMP家族成員的異常表達是基底膜完整性與否的關鍵因素[9]。Caspase級聯(lián)反應在所有細胞的凋亡中發(fā)揮重要作用，其被抑制是惡性腫瘤細胞異常增殖的關鍵原因，而Caspase-3是這一過程中重要的效應酶[10]。Sam等[11]發(fā)現(xiàn)，急性白血病患者體內(nèi)存在MMP-9的異常表達。Montiel-Cervantes等[12]發(fā)現(xiàn)，Caspase-3的低表達與急性白血病的發(fā)生、發(fā)展關系密切。

本研究結果顯示，100例兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中MMP-9和Caspase-3的陽性表達率分別為26.00%(26/100)和73.00%(73/100)，50例非惡性血液病患兒的陽性表達率分別為78.00%(39/50)和22.00%(11/50)，比較差異均有統(tǒng)計學意義(χ2=36.706、35.187，P均<0.001)。100例兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中MMP-9和Caspase-3的表達呈負相關關系(rs=-0.615，P<0.001)。

總之，MMP-9和Caspase-3蛋白在兒童急性髓細胞性白血病的骨髓細胞中存在異常表達，且兩者的檢測對于兒童急性髓細胞性白血病的診斷和預后判斷具有重要價值。