張克華

江西省上饒市弋陽縣中醫(yī)院 (江西上饒 334400)

梅毒作為常見的性疾病，其傳染性強(qiáng)且危害較大，極易侵犯、損傷全身各器官功能，故強(qiáng)化對(duì)病原體的檢測(cè)及早診斷并治療梅毒顯得尤為重要[1]。梅毒螺旋體感染為誘發(fā)梅毒的常見原因，目前甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(toluidine red unheated serum test，TRUST)作為檢測(cè)梅毒螺旋體表達(dá)的常用方法，臨床應(yīng)用特異度不高，存在一定的假陽性、假陰性[2]。近年來，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)憑借操作簡便、自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)已在梅毒螺旋體檢查中逐漸應(yīng)用[3]。鑒于此，本研究旨在探討ELISA、TRUST在梅毒螺旋體感染診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年10月至2018年9月在我院就診的106例疑為梅毒螺旋體感染患者，男66例，女40例；年齡22～67歲，平均(40.52±5.36)歲。本研究已獲院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

入選者均接受TRUST、ELISA檢查，以及梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)(treponema pallidum gelatin particle agglutination test，TPPA)。(1)TRUST檢測(cè)：將50 μl血清樣本加入加樣卡片圈，整個(gè)卡片圈中均勻涂布，將抗原液搖勻(所用試劑盒由上海榮盛生物藥業(yè)有限公司提供)；采用針頭取抗原液1滴加入，然后向立體脫色搖床中放置卡片，以100 r/min速度震蕩8 min，然后于亮光下觀察結(jié)果，其中圓圈內(nèi)可見粉色或紅色絮狀物判定為陽性，圓圈內(nèi)甲苯胺紅顆粒于中央聚集成為一點(diǎn)或均勻分布判定為陰性。(2)ELISA檢測(cè)：將50 μl血清標(biāo)本加入預(yù)包被板條孔，設(shè)置空白對(duì)照、陰性、陽性，于37 ℃環(huán)境中溫育1 h；然后將板條孔取出，將酶標(biāo)記物50 μl加入對(duì)照、陰性、陽性孔內(nèi)，震蕩搖勻，于37 ℃環(huán)境中溫育0.5 h；然后取出并洗板，將底物緩沖液50 μl加入各個(gè)孔中，震蕩搖勻，于37 ℃環(huán)境中溫育0.5 h；將終止液50 μl加入各孔中，混勻，于ST360酶標(biāo)儀(上海天呈科技有限公司)讀出數(shù)值，其中樣品OD值S/CO<1則梅毒抗體陰性，樣品OD值S/CO≥1為梅毒抗體陽性。(3)TPPA檢查：將每份標(biāo)本做孔(9個(gè))，將標(biāo)本稀釋液加入U(xiǎn)形反應(yīng)板，加100 μl至第1孔，另外8孔各為25 μl；通過移液器取25 μl血清向第1孔加入，待混勻后取出25 μl并向第2孔加入，隨后取25 μl向第3孔加入，4～9孔同上，混勻最后1孔并棄去25 μl；將未致敏粒子D液25 μl加入第3孔，將致敏粒子C液25 μl加入4～9孔，向振蕩器內(nèi)置入微量反應(yīng)板，震蕩30 s，并置于有蓋濕盒內(nèi)；于37 ℃孵箱靜置2 h，觀察結(jié)果。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

觀察TRUST、ELISA檢查結(jié)果，以TPPA檢查結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估TRUST、ELISA檢查準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度。

2 結(jié)果

TPPA確診梅毒螺旋體感染85例(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期分別為25例、21例、39例)；TRUST檢出陽性、陰性各74例、32例；ELISA檢出陽性、陰性各82例、24例。以TPPA診斷結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，TRUST診斷特異度、靈敏度、準(zhǔn)確度分別為61.90%(13/21)、77.65%(66/85)、74.53%(79/106)；ELISA診斷特異度、靈敏度、準(zhǔn)確度分別為95.24%(20/21)、95.29%(81/85)、95.28%(101/106)。見表1。

表1 TRUST、ELISA診斷與TPPA診斷情況對(duì)照(例)

3 討論

梅毒屬于一種傳染性強(qiáng)的流行性疾病，多由于梅毒螺旋體感染所致。獲得性梅毒、胎傳梅毒為兩種常見類型梅毒，其中前者多由性接觸傳染，而后者則為經(jīng)臍帶血循環(huán)胎盤傳染所致，且可于胎兒內(nèi)臟、組織中繁殖，促使胎兒全身感染，導(dǎo)致產(chǎn)婦流產(chǎn)、死亡。經(jīng)臨床發(fā)現(xiàn)，梅毒診治不當(dāng)極易誘發(fā)梅毒性心血管病、脊髓膜炎等并發(fā)癥。梅毒分為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期，其中Ⅰ期、Ⅱ期為梅毒早期，傳染性小且對(duì)患者機(jī)體影響較小，Ⅲ期梅毒為晚期，感染性較大、病程長，極易損傷患者機(jī)體健康，因此及早發(fā)現(xiàn)梅毒并診治對(duì)減輕梅毒損傷具有重要影響。

近年來，TPPA已成為梅毒診斷中的金標(biāo)準(zhǔn)，臨床檢測(cè)準(zhǔn)確度較高，但由于其檢查價(jià)格昂貴，往往無法用于早期篩查中，故臨床多將TPPA檢查用于梅毒復(fù)查，以提升梅毒診斷效能。近年來臨床對(duì)梅毒的認(rèn)識(shí)逐漸加深且醫(yī)療水平日益發(fā)展，臨床上梅毒檢查方法逐漸增多，TRUST、ELISA為梅毒檢查的常用方法，其中TRUST作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，多被用于評(píng)估梅毒篩查及治療效果[4]。梅毒螺旋體感染后潛伏期較長，感染后1～2個(gè)月內(nèi)血清中僅可檢測(cè)到部分抗體，特異性抗體出現(xiàn)早于非特異性抗體，且在實(shí)施相關(guān)治療后非特異性抗體將逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮?。TRUST檢查梅毒Ⅰ期特異性較低，存在假陽性、假陰性現(xiàn)象，而對(duì)于梅毒潛伏期，TRUST檢查靈敏度不高。

ELISA作為酶免疫測(cè)定技術(shù)，應(yīng)用基因工程技術(shù)，利于吸附已知抗體或抗原于其固相載體表面，然后通過酶標(biāo)記抗原抗體反應(yīng)，利用洗滌法洗掉液相中游離成分，通過對(duì)底物鹽水進(jìn)行觀察而判定結(jié)果[5]。ELISA法檢測(cè)中緊密結(jié)合了酶化學(xué)敏感性與抗原抗體特異性，進(jìn)而可提升診斷結(jié)果。本研究結(jié)果得出，ELISA法檢測(cè)梅毒螺旋體感染特異度、靈敏度、準(zhǔn)確度較高，表明其利于提升梅毒檢出率，可為梅毒的防治提供確切參考。郭家權(quán)等[6]研究證實(shí)，ELISA法為梅毒篩查、檢測(cè)中較為有效的方法，臨床應(yīng)用靈敏度較高，本研究結(jié)果與其相似。

綜上所述，ELISA用于梅毒螺旋體感染診斷準(zhǔn)確度較高，利于提升梅毒診斷效能，可指導(dǎo)臨床制定治療方案。