孫雪峰 , 周婷婷 , 儲 君 , 宋志元 , 張新蕾 , 張要齊

(1. 河南惠通天下生物工程有限公司 ， 河南 新鄭 451162 ； 2. 鄭州市動物疫病預(yù)防控制中心 ， 河南 鄭州 450052)

健胃平口服液是在中獸藥經(jīng)典處方健胃散[1]的基礎(chǔ)上優(yōu)化而來，加強(qiáng)了驅(qū)蟲效果，并通過提取純化中藥有效成分制成口服液，提高了中藥材的利用率，使產(chǎn)品劑量準(zhǔn)確、吸收迅速、起效更快。健胃平口服液處方由山楂、萊菔子、六神曲、檳榔、使君子、榧子、貫眾等幾味中藥組成。其中山楂、萊菔子、六神曲主要起健胃消食作用；檳榔、使君子、榧子有驅(qū)蟲的功效。諸藥合用可加強(qiáng)消食化積之功，在健胃的基礎(chǔ)上強(qiáng)化驅(qū)蟲效果，消食下氣，開胃寬腸，驅(qū)蟲、健胃二效合一。

山楂中的有機(jī)酸是健胃消食的主要藥效成分[1]，檳榔堿等生物堿是驅(qū)蟲的主要有效成分[3]。檳榔、山楂采用醇提，殘渣加萊菔子、六神曲、使君子、榧子、貫眾采用水提。六神曲需要包煎。本試驗以有機(jī)酸含量、總生物堿含量以及干膏得率為考察指標(biāo)，優(yōu)選檳榔和山楂的最佳提取條件。

1 材料

1.1 中藥材 山楂、萊菔子、六神曲、檳榔、使君子、榧子、貫眾，均購自河南省禹州市中藥材批發(fā)市場。本試驗所用藥材經(jīng)鑒定，均符合《中國獸藥典》2015年版二部項下的有關(guān)規(guī)定。

1.2 主要試劑 枸櫞酸標(biāo)準(zhǔn)品和氫溴酸檳榔堿標(biāo)準(zhǔn)品購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。醋酸購自天津市市光復(fù)精細(xì)化工研究所；醋酸鈉、氫氧化鈉、溴甲酚綠、氫氧化鈉、氫氧化鉀和硫酸鈉等，均購自天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司。以上試劑均為分析純。

1.3 主要儀器 中藥粉碎機(jī)(型號為FE120型)，購自河北省黃驊市新興電器廠；電熱恒溫水浴鍋(型號為XMTD-4000)，購自北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司；超聲波清洗器(型號為KQ500DB)，購自昆山市超聲儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(型號為RE-52C)，購自鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；循環(huán)水式多用真空泵(型號為SHB-Ⅲ)，購自鞏義市英峪華科儀器廠；紫外可見光分光光度計(型號為UV-5300)，購自上海元析儀器有限公司；自動永停滴定儀(型號為ZYY-1)，購自上?？祪x儀器有限公司；分析天平(型號為AUW120D型)，購自日本島津。

2 方法

2.1 測定方法

2.1.1 有機(jī)酸含量測定方法[4]參照有關(guān)文獻(xiàn)，為了消除有機(jī)酸提取液背景顏色以及人為誤差對滴定終點的干擾，本試驗采用電位滴定法替代指示劑法測定有機(jī)酸含量。

對照品溶液的制備：精密稱取枸櫞酸適量，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1.17 mg/mL的對照品溶液。

供試品溶液的制備：取10 mL備用樣品溶液，稀釋至100 mL，濾過，即得。

測定方法：精密量取供試品溶液25 mL，置于150 mL燒杯中，加水50 mL，置滴定臺上，將復(fù)合玻璃電極、攪拌槳及滴定頭插入液面下，按照儀器操作程序，設(shè)置軟件，預(yù)先攪拌15 s，使溶解稀釋、混合均勻，用0.1 mol/L NaOH滴定液滴定。采用Tiamo軟件實時采集pH-V滴定曲線，軟件自動識別等當(dāng)點(終點)。每1 mL NaOH 滴定液(0.1 mol/L)相當(dāng)于6.404 mg的枸櫞酸。

2.1.2 總生物堿含量測定方法[5]本試驗采用酸性染料比色法測定總生物堿的含量。

對照品溶液的制備：精密稱取氫溴酸檳榔堿125 mg 置50 mL容量瓶中，加pH值5.0醋酸-醋酸鈉緩沖溶液溶解并稀釋至刻度，得對照品儲備液。精密吸取1 mL 對照品儲備液置50 mL容量瓶中，加上述緩沖溶液稀釋至刻度，作為對照品溶液。

供試品溶液的制備：取2 mL備用樣品溶液，置于50 mL容量瓶中，用1 mol/L 醋酸鈉調(diào)至pH值為5，搖勻，用pH值為5.0 醋酸-醋酸鈉緩沖液稀釋至刻度。精密吸取此溶液1 mL 置分液漏斗中，精密加入pH值為5.0 醋酸-醋酸鈉緩沖液4 mL 和溴甲酚綠溶液2 mL，輕輕搖勻，精密加入5、2、2、1 mL氯仿4 次萃取，每次振搖2 min，靜置30 min，分取氯仿層，置預(yù)先放有無水硫酸鈉0.2 g 的干燥容量瓶中，振搖，靜置，精密吸取上清液5 mL，精密加入0.01 mol/L 的氫氧化鉀無水乙醇液1 mL，搖勻，作為供試品溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：精密吸取對照品溶液0.4、0.7、l.0、1.5、2.0、2.5 mL，分別置分液漏斗中，按樣品測定項下操作，測定吸光度，以檳榔堿量對吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。

供試品的測定：供試品于波長618 nm處測定吸收度。

2.1.3 干膏得率的測定 提取藥液過濾，濾液濃縮至稠膏，放冷，轉(zhuǎn)移至500 mL容量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻，作為各樣品溶液，備用。

精密量取各樣品溶液50 mL，置于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105 ℃烘箱中干燥4 h，移至干燥器中，冷卻30 min，迅速精密稱定重量。計算干膏得率。

2.2 正交試驗設(shè)計 健胃平口服液中檳榔、山楂采用醇提，設(shè)計正交試驗優(yōu)選最佳提取工藝，根據(jù)預(yù)試驗，對工藝中的4因素各取 3個水平進(jìn)行考察，以有機(jī)酸含量、總生物堿含量以及浸膏得率為考察指標(biāo)。具體因素水平安排如表1。選用正交設(shè)計表L9(34)安排試驗，見表2。

表1 因素水平表

3 結(jié)果與分析

健胃平口服液中檳榔、山楂的提取工藝正交試驗結(jié)果見表2，根據(jù)試驗結(jié)果，作方差顯著性分析，結(jié)果見表3。

表2 正交試驗設(shè)計及結(jié)果

綜合評分=(有機(jī)酸含量/有機(jī)酸含量的最大值)×40+(總生物堿含量/總生物堿含量的最大值)×40+(浸膏得率/浸膏得率的最大值)×20

表3 方差與顯著性分析

通過比較各因素的極差值(R)進(jìn)行直觀分析可以看出，對試驗結(jié)果的影響C>A>D>B；方差分析結(jié)果表明，C和A因素對試驗結(jié)果的影響顯著，B和D對試驗結(jié)果的影響也達(dá)到了統(tǒng)計學(xué)意義上的顯著性水平。正交試驗結(jié)果可以看出，試驗7為最佳方案。綜合方差分析結(jié)果和實際生產(chǎn)成本，選擇A3B2C2D3為最合理的生產(chǎn)工藝技術(shù)參數(shù)，即加5倍量80%乙醇回流提取2次，每次2 h。

4 討論

健胃平口服液處方由山楂、萊菔子、六神曲、檳榔、使君子、榧子、貫眾等幾味中藥組成。其中山楂和檳榔是起健胃驅(qū)蟲作用的主藥材，但其主要活性成分在水中溶解度低，故采用乙醇作為提取溶劑。將山楂和檳榔藥材先用醇提，殘渣再和其余藥材一起水提，可以更充分的提取出有效成分，特別需要注意的是六神曲需要包煎。本試驗以有機(jī)酸含量、總生物堿含量以及干膏得率為考察指標(biāo)，設(shè)計正交試驗優(yōu)選出山楂和檳榔藥材的最佳醇提條件為5倍量80%乙醇回流提取2次，每次2 h，該提取方法可給后期工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。