陸毅興 , 邵思欣 , 許斯祺 , 王 一 , 梁詩欣 , 馬 驛 , 彭金菊

(廣東海洋大學(xué)農(nóng)學(xué)院動物醫(yī)學(xué)系 ， 廣東 湛江 524088)

雞多殺性巴氏桿菌病，又稱禽霍亂，是由多殺性巴氏桿菌引起禽類的一種急性敗血性傳染病，是對養(yǎng)禽業(yè)危害較大的疫病之一。中草藥用于畜牧生產(chǎn)在我國有悠久歷史，在現(xiàn)代畜牧業(yè)生產(chǎn)發(fā)展中仍發(fā)揮重要作用。在防治畜禽疾病方面，中草藥有著療效顯著、不易產(chǎn)生耐藥性、提高畜禽免疫力、低副作用等優(yōu)勢。長期的臨床實踐表明，合理的中西藥配伍應(yīng)用能提高療效，降低藥物毒副作用，但是中草藥化學(xué)成分與藥物作用機(jī)理十分復(fù)雜，中西藥聯(lián)合使用不當(dāng)會降低療效，增加副作用，嚴(yán)重的甚至危及動物生命[1]，需通過試驗觀察中西藥聯(lián)合對某些細(xì)菌性傳染病的防治是否有效。為尋找安全、高效、毒副作用小的防治雞多殺性巴氏桿菌病的藥物，本試驗在體外抑菌效果觀察的基礎(chǔ)上，選取具有體外抑菌效果的中藥復(fù)方水提物，通過給人工感染多殺性巴氏桿菌的雞灌服，觀察藥物對其防治效果，及其與抗生素聯(lián)用藥的防治效果，為采用中西藥聯(lián)合防治畜禽疾病提供理論依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 中藥藥材白頭翁、秦皮、黃柏、黃連、五味子、五倍子、訶子，均購自湛江市藥材市場。強力霉素，含量98%，批號：100252102，江蘇恒盛藥業(yè)有限公司。氟苯尼考，含量98%，批號：100252108，江蘇恒盛藥業(yè)有限公司。

1.1.2 禽巴氏桿菌(C48-3)標(biāo)準(zhǔn)菌株，由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供。

1.1. 試驗動物 40日齡三黃雞，公母各半，體重0.8～1.2 kg。

1.2 方法

1.2.1 試驗分組 試驗設(shè)陰性對照組、陽性感染對照組、灌服藥物試驗組，每組20羽雞。給藥劑量由體外抑菌試驗測得的最小抑菌濃度(MIC值)確定。I組為不感染細(xì)菌陰性對照組；II組為感染細(xì)菌陽性對照組；III組為白頭翁散組，預(yù)防組和治療組用藥量(灌服水提物，藥量以生藥含量計算)分別為2.083 g/kg·d、4.166 g/kg·d；IV組為加味白頭翁散組，預(yù)防組和治療組用藥量分別為0.781 g/kg·d、1.562 g/kg·d；V組為氟苯尼考組，預(yù)防組和治療組用藥量分別為4 mg/kg·d、8 mg/kg·d；VI組為強力霉素組，預(yù)防組和治療組用藥量分別為4 mg/kg·d、8 mg/kg·d；VII組為白頭翁散與氟苯尼考聯(lián)合組，預(yù)防組用藥量白頭翁散2.083 g/kg·d、氟苯尼考4 mg/kg·d，治療組用藥量為白頭翁散4.166 g/kg·d、氟苯尼考8 mg/kg·d；VIII組為加味白頭翁散與強力霉素聯(lián)合組，預(yù)防組用藥量為加味白頭翁散0.781 g/kg·d、強力霉素4 mg/kg·d，治療組用藥量為加味白頭翁散1.562 g/kg·d、強力霉素8 mg/kg·d。

1.2.2 藥物投喂方法 將白頭翁、秦皮、黃柏、黃連、五味子、五倍子、訶子等各味中藥分別加熱煮沸30 min，連續(xù)煎煮3次，冷卻，過濾，合并煎煮藥液，濃縮使藥液濃度含生藥達(dá)1 g/mL，試驗前配制成白頭翁散(白頭翁、黃連、黃柏、秦皮)與加味白頭翁散(白頭翁、黃連、黃柏、秦皮、五味子、五倍子、訶子)水提物，1 d的藥量給雞1次灌服。將氟苯尼考可溶性粉、強力霉素可溶性粉分別溶于蒸餾水后，1 d的藥量給雞1次灌服。

1.2.3 人工感染試驗 將多殺性巴氏桿菌接種于營養(yǎng)肉湯中，37 ℃恒溫培養(yǎng)12-16 h，采用平板計數(shù)法計數(shù)，用肉湯稀釋至所需濃度，通過預(yù)試驗篩選出可引起雞死亡的多殺性巴氏桿菌菌液的濃度，通過皮下注射不同濃度的菌液，以感染后能引起雞只72 h內(nèi)死亡率達(dá)100%的最小菌液濃度為攻毒濃度。預(yù)試驗確定每只雞皮下注射濃度為104CFU/mL的細(xì)菌混懸液0.1 mL，陰性對照組每只雞皮下注射生理鹽水0.1 mL。治療試驗：攻毒當(dāng)天灌服藥液，連續(xù)給藥3 d，停藥后觀察10 d；預(yù)防試驗：連續(xù)灌服藥物3 d后注射細(xì)菌，攻毒后仍連續(xù)灌服藥物3 d，自攻毒之日開始連續(xù)觀察10 d。統(tǒng)計各組死亡雞數(shù)量，按常規(guī)檢驗方法對病死雞進(jìn)行剖檢，分離體液及組織中細(xì)菌、鏡檢，確定死亡原因。

1.2.4 防治效果評價 用保護(hù)率進(jìn)行評價：保護(hù)率(%)=(陽性感染對照組的死亡數(shù)-藥物試驗組死亡數(shù))/陽性感染對照組的死亡數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1 不同藥物治療效果 各種藥物對多殺性巴氏桿菌的體外抑菌效果見表1。在供試的9種抗菌藥中，氟苯尼考和強力霉素對多殺性巴氏桿菌的體外抑菌效果最好，MIC均為4 μg/mL。白頭翁散對多殺性巴氏桿菌的抑菌效果較好(MIC=12.5 mg/mL、MBC=50 mg/mL)。加味白頭翁散的抑菌效果(MIC=0.781 mg/mL、MBC=12.5 mg/mL)比白頭翁散的抑菌效果更顯著。選取氟苯尼考和強力霉素與中藥方劑聯(lián)合進(jìn)行防治試驗。各種藥物對雞多殺性巴氏桿菌病的治療試驗結(jié)果見表2。攻毒后陽性對照組雞死亡20羽，存活率為0%。灌服藥物組的雞死亡率與陽性對照組比較有所降低；白頭翁散、氟苯尼考、白頭翁散與氟苯尼考聯(lián)合對雞的保護(hù)率分別為15%、75%、90%。加味白頭翁散、強力霉素、加味白頭翁散與強力霉素聯(lián)合對雞的保護(hù)率分別為20%、80%、75%。白頭翁散與氟苯尼考聯(lián)合組的保護(hù)率最高，對雞多殺性巴氏桿菌病有較好的治療效果。

表1 不同藥物對多殺性巴氏桿菌的體外抑菌效果 (μg/mL)

表2 不同藥物對雞多殺性巴氏桿菌病的治療效果

2.2 不同藥物對雞巴氏桿菌病的預(yù)防效果 預(yù)防試驗結(jié)果見表3，攻毒后陽性對照組雞死亡20羽，存活率為0%。灌服藥物組的雞死亡率與陽性對照組比較均降低。白頭翁散、氟苯尼考、白頭翁散與氟苯尼考聯(lián)合對雞的保護(hù)率分別為25%、80%、95%。加味白頭翁散、強力霉素、加味白頭翁散與強力霉素聯(lián)合對雞的保護(hù)率分別為25%、90%、85%。白頭翁散與氟苯尼考聯(lián)合組的保護(hù)率最高，對雞多殺性巴氏桿菌病的預(yù)防效果較好。

表3 不同藥物對雞多殺性巴氏桿菌病的預(yù)防效果

2.3 病死雞的剖檢結(jié)果及細(xì)菌形態(tài)特征 給雞感染巴氏桿菌后，體溫升高，精神沉郁，食欲減退，羽毛松亂，縮頸閉眼。雞冠、肉髯暗紅色或青紫色，排灰白或黃綠色稀糞。感染18 h后陽性對照組開始出現(xiàn)死亡，大多數(shù)雞在24-48 h死亡，第7天后未見死亡。感染24 h后藥物試驗組開始出現(xiàn)死亡，多數(shù)在感染后第3-5天死亡，第6天后未見死亡。感染后藥物試驗組雞死亡的數(shù)量較陽性對照組有所下降，且死亡速度有所減緩。

剖檢病死雞可見鼻腔內(nèi)有黏液，腹膜、皮下組織及腹腔脂肪有大小不等的出血點，胸腔、腹腔和氣囊有纖維素性灰白色滲出物，腸黏膜充血，有出血性病灶，十二指腸最為嚴(yán)重。心外膜上有多量出血點，心包內(nèi)積有多量淡黃色液體。肺充血、水腫，脾臟腫大柔軟，肝臟腫大、質(zhì)變脆，表面有布滿針尖大小的白色壞死點。分離體液及組織中細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)鑒定，在鮮血培養(yǎng)基上生長良好，長成淡灰白色、閃光的露珠狀小菌落，且無溶血現(xiàn)象。染色鏡檢為革蘭陰性、兩端鈍圓、兩極濃染，以單個和成雙排列為主的球桿狀或短桿狀細(xì)菌，與試驗前感染的多殺性巴氏桿菌的形態(tài)特征相同。

3 討論

3.1 不同藥物對雞多殺性巴氏桿菌病的防治效果 通過體外抑菌試驗表明，中藥白頭翁散、加味白頭翁散對多殺性巴氏桿菌的均有較好的抑菌效果，MIC分別為12.5 mg/mL、0.781 mg/mL，氟苯尼考、強力霉素對多殺性巴氏桿菌的MIC均為4 μg/mL。將白頭翁散分別按照4.166 g/kg·d、2.083 g/kg·d給雞灌服后，對雞巴氏桿菌病治療和預(yù)防的保護(hù)率分別為15%、25%；將加味白頭翁散分別按照1.562 g/kg·d、0.781 g/kg·d給雞灌服后，對雞巴氏桿菌病治療和預(yù)防的保護(hù)率分別為20%、25%。諸多文獻(xiàn)報道，應(yīng)用中草藥防治雞巴氏桿菌病有一定的效果[2-3]。本試驗中，加味白頭翁散比白頭翁散對雞巴氏桿菌病的治療效果稍好，但兩者對雞巴氏桿菌病的防治效果均不太理想?？赡芘c人工感染多殺性巴氏桿菌的雞發(fā)病過快，沒有充分發(fā)揮藥物的作用有一定關(guān)系[4]。在中藥散劑與抗生素聯(lián)合防治試驗中，白頭翁散與氟苯尼考聯(lián)合對雞多殺性巴氏桿菌病的防治效果明顯比單用白頭翁散或單用氟苯尼考更好，保護(hù)率分別為90%、95%；加味白頭翁散與強力霉素聯(lián)合對雞巴氏桿菌病的防治效果(保護(hù)率分別為75%、85%)明顯比加味白頭翁散的防治效果好，但不及單用強力霉素(保護(hù)率為80%、90%)的防治效果好，可能是加味白頭翁散與強力霉素聯(lián)合在雞體內(nèi)產(chǎn)生了某些反應(yīng)，使藥效降低。通過本試驗可知，合理的中西藥聯(lián)合對雞巴氏桿菌病的防治效果優(yōu)于單用中藥，也優(yōu)于單用抗生素。不合理的聯(lián)合用藥反而會使藥效降低。

3.2 中西藥聯(lián)合在畜禽疾病防治中的作用 細(xì)菌性疾病一直是我國養(yǎng)禽業(yè)的棘手難題之一。抗生素廣泛應(yīng)用于現(xiàn)代畜牧養(yǎng)殖的細(xì)菌性疾病，并且療效顯著，同時抗生素廣泛使用帶來的問題是細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生和動物性食品藥物殘留[5]。西藥注重祛除病邪，消除病因；中藥強調(diào)扶正，重在提高機(jī)體的免疫力，在養(yǎng)殖過程中可起到治療疾病和預(yù)防保健作用，應(yīng)用安全可靠[6]。中西藥聯(lián)合在獸醫(yī)臨床上非常普遍，合理的中西藥聯(lián)用可取長補短，提高臨床療效，其效果已得到普遍認(rèn)可[7]。李軍成[8]等用黃連、黃柏等中藥和鹽酸環(huán)丙沙星組成的中西藥復(fù)方制劑對肉鴿巴氏桿菌病的治愈率達(dá)到96.6%。周勇[9]用氯霉素與自擬清瘟散結(jié)合，對鵝巴氏桿菌病療效顯著。蔣大成[10]采用黃連、黃芩、黃柏、大黃、蒼術(shù)、厚樸、甘草等中藥與氟苯尼考聯(lián)合對鴨禽霍亂的防治效果明顯。

中西藥聯(lián)合使用是獸醫(yī)臨床常用的治療方案，堅持中西醫(yī)結(jié)合的方針，力爭形成具有中國特色的高效新獸醫(yī)學(xué)，是當(dāng)代獸醫(yī)工作者的長期任務(wù)。中西藥合理結(jié)合，不僅從實踐上大大提高臨床療效，而且從理論上豐富和發(fā)展了中獸醫(yī)學(xué)內(nèi)容[11]。但盲目或不合理的聯(lián)合使用可能導(dǎo)致藥效降低，甚至出現(xiàn)毒副作用。對于中西藥聯(lián)合防治畜禽疾病，既要積極推廣，又要注意配伍禁忌，尚未弄清楚機(jī)理情況下，不可濫用，要持科學(xué)謹(jǐn)慎態(tài)度。