馮雪，李野，劉沛衡，耿雪瑩，趙麗佳，劉華，柳春紅，楊紅育

（長春生物制品研究所有限責(zé)任公司，吉林長春 130012）

測量不確定度是與測量結(jié)果關(guān)聯(lián)的一個參數(shù)，用于表征合理賦予被測量值的分散性。評定檢驗結(jié)果可信度，可比性和可接受性的重要指標(biāo)。隨著國際貿(mào)易及科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，國內(nèi)外實驗室對測量不確定度的評定日益重視[1]。

水分是注射用重組人干擾素α2a的一項重要指標(biāo)，對藥品的質(zhì)量有很大影響。本實驗采用《中國藥典》2015版[2]水分測定法第一法中容量滴定法測定。結(jié)合實驗室實際情況，參照《測量不確定度評定與表示》（JJF1059.1-2012）規(guī)范[3]，對測量過程中的不確定度進行評定。

1 實驗部分

1.1 主要儀器

V30水分測定儀（METTLER TOLEDO）、Stromboli加熱爐樣品轉(zhuǎn)換器（METTLER TOLEDO）、XS205型電子天平（METTLER TOLEDO）。

1.2 試劑

無水甲醇（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）、1mg/mL費休氏試液（Merck）、固體標(biāo)準(zhǔn)水（Merck）。

1.3 實驗樣品

注射用重組人干擾素α2a，長春生物制品研究所有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

1.4 實驗方法

1.4.1 操作條件[4]

加熱爐樣品轉(zhuǎn)換器加熱溫度：150℃±2℃；加熱爐樣品轉(zhuǎn)換器加熱時間：10min；費休氏試液滴定度：1mg/mL。

1.4.2 費休氏試液滴定度的標(biāo)定

啟動儀器，將水分測定儀調(diào)至平衡狀態(tài)，用10μL微量進樣器量取經(jīng)稱量的10μL純化水（精確至0.01mg）加入到滴定杯中，將質(zhì)量輸入到水分儀中，標(biāo)定出費休氏試液的滴定度。

1.4.3 檢驗滴定度標(biāo)定的準(zhǔn)確性

將水分測定儀及卡氏干燥爐調(diào)至樣品測定狀態(tài)，用電子天平稱量固體標(biāo)準(zhǔn)水0.1g（精確至0.01mg），將樣品密封后置于卡氏干燥爐上，在水分儀中輸入樣品質(zhì)量，測定出固體標(biāo)準(zhǔn)水的水含量。將測定結(jié)果利用統(tǒng)計學(xué)方法與標(biāo)示量進行比較分析。

1.4.4 樣品測定

將水分測定儀及卡氏干燥爐調(diào)至樣品測定狀態(tài)，用電子天平稱量樣品適量（精確至0.01mg）將樣品密封后置于卡氏干燥爐上，在水分儀中輸入樣品質(zhì)量，測定出樣品的水含量。

2 不確定度來源分析[5-6]

從測定過程分析，測量不確定度來源主要有以下幾個方面：（1）標(biāo)定費休氏試劑滴定度引入的不確定度；（2）樣品稱量及測定重復(fù)性引入的不確定度；（3）示值修約引入的不確定度。依據(jù)JJF1059.1-2012規(guī)范[3]，分析不確定度性質(zhì)可知，重復(fù)性測量引起的不確定度采用A類不確定度評定，其余采用B類不確定度評定。具體來源見圖1。

圖1 不確定度來源

3 結(jié)果與討論

3.1 滴定度標(biāo)定準(zhǔn)確性的檢驗

在相同條件下，對費休氏試液的滴定度進行標(biāo)定，連續(xù)標(biāo)定3次，取3次標(biāo)定的平均值，即為本次費休氏試液的滴定度，結(jié)果見表1。

表1 滴定度標(biāo)定結(jié)果

表2 固體標(biāo)準(zhǔn)水的水含量測定結(jié)果

檢驗假設(shè)H0：μ=1%，H1：μ≠1%

由樣本觀測值算得 x（標(biāo)準(zhǔn)水）=0.996%，S2（標(biāo)準(zhǔn)水）=0.00000005，

由t分布表可得，t0.025（9）=2.262，|t|=0.57＜t0.025（9），故接受H0，即表明測定的固體標(biāo)準(zhǔn)水的水含量與標(biāo)示量無顯著差異，即滴定度的標(biāo)定結(jié)果可用于樣品的測定。

3.2 不確定度評定

3.2.1 標(biāo)定費休氏試劑滴定度引入的不確定度

本次實驗使用10μL純化水標(biāo)定滴定度，不確定度主要為重復(fù)性測定及純化水稱量引入的不確定度。實驗使用分度值d=0.01mg的電子天平稱量，稱量引入的不確定度主要來源天平校準(zhǔn)及稱量重復(fù)性。

（1）重復(fù)性測定引入的不確定度（A類）

滴定度共測定3次，其標(biāo)準(zhǔn)偏差S=0.0021875，則其不確定度為，相對不確定度

（2）天平校準(zhǔn)引入的不確定度（B類）

10μL微量進樣器及10μL純化水的總質(zhì)量在5～20g，根據(jù)天平有效校準(zhǔn)證書，在該范圍內(nèi)，天平的最大允許誤差為±0.10mg，服從均勻分布，則其不確定度為

（3）稱量重復(fù)性引入的不確定度（B類）

根據(jù)天平有效校準(zhǔn)證書，在50g以內(nèi)，重復(fù)性誤差的最大允許誤差為±0.15mg，服從均勻分布，則其不確定度在稱量時，采用減重法，即稱量需進行兩次，應(yīng)記兩次不確定度。10μL純化水的質(zhì)量均值為10.09mg，則天平稱量帶來的不確定度見公式（1），相對不確定度見公式（2）：

3.2.2 樣品重復(fù)性測定引入的不確定度（A類）

為獲得樣品重復(fù)性測定的不確定分量，對樣品進行了10次獨立測定，測定結(jié)果見表3。

表3 樣品水含量測定結(jié)果

3.2.3 樣品質(zhì)量稱量引入的不確定度（B類）

實驗使用分度值d=0.01mg的電子天平稱量，稱取的樣品質(zhì)量在50～100mg，稱量引入的不確定度來源于兩部分：（1）天平的校準(zhǔn)，樣品質(zhì)量及卡氏樣品瓶的總質(zhì)量在5～20g，根據(jù)天平有效校準(zhǔn)證書，在該范圍內(nèi)，天平的最大允許誤差為±0.10mg，服從均勻分布，則其不確定度0.0577mg；（2）稱量重復(fù)性，根據(jù)天平有效校準(zhǔn)證書，在50g以內(nèi)，重復(fù)性誤差的最大允許誤差為±0.15mg，服從均勻分布，則其不確定度0.0866mg。在稱量時，采用減重法，即稱量需進行兩次，應(yīng)記兩次不確定度。樣品質(zhì)量均值為73.12mg，則天平稱量帶來的不確定度見公式（5），相對不確定度見公式（6）：

3.2.4 示值俢約引入的不確定度（B類）

本實驗水分含量結(jié)果精確到0.01%，因此，示值修約誤差區(qū)間為0.01%，區(qū)間半寬為0.005%，按照均勻分布計算，示值修約引入的不確定度為相對不確定度為

3.3 合成相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

分別代入上述不確定度分量，按照數(shù)值修約只進不舍的原則，合成相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（合成）可按下式計算。

3.4 擴展不確定度

當(dāng)置信水平為95%時，包含因子k為2，擴展不確定度 u=k×urel（合成）×x（樣品）=2×0.0203×1.6%=0.065%。

3.5 分析結(jié)果的表示

費休氏容量滴定法測定注射用重組人干擾素α2a中水分含量，平行測定10次的算術(shù)平均值為1.6%，其結(jié)果可表示為1.6%±0.065%（k=2）。

4 結(jié)論

本文討論了測定注射用重組人干擾素α2a中水分含量過程中各影響因素引入的不確定度分量，通過重復(fù)測定，評定了費休氏法測定注射用重組人干擾素α2a中水分含量的標(biāo)準(zhǔn)不確定度及擴展不確定度。計算結(jié)果顯示，標(biāo)定滴定度及樣品重復(fù)測定引入的不確定度是造成水分含量測定結(jié)果不確定度的主要來源。因此，可通過選用靈敏度高的天平降低不確定度。