葉麗珍

（廣東省廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科 510260）

研究目的：本研究通過(guò)檢測(cè)子宮內(nèi)異癥的異位內(nèi)膜及對(duì)照組在位內(nèi)膜組織的E-cad啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀況與其蛋白表達(dá)關(guān)系，探索內(nèi)異癥可能的發(fā)病機(jī)制，以及在發(fā)生、發(fā)展中的作用，為子宮內(nèi)膜異位癥的治療找到新的突破點(diǎn)，并為進(jìn)一步可能的臨床治療建立理論基礎(chǔ)。

研究方法：

1.樣本資料：采用隨機(jī)對(duì)照法，收集廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦科2013年1月至2015年1月手術(shù)治療的并經(jīng)病理證實(shí)的標(biāo)本共65例，其中異位內(nèi)膜組織（巧克力囊腫囊腫）45例為研究組，對(duì)照組為20例同期因診刮、子宮切除而取到的正常子宮內(nèi)膜組織。

2.方法：通過(guò)免疫組化、Western Blotting檢測(cè)E-cad異位與在位內(nèi)膜表達(dá)情況；并采用甲基化特異性PCR檢測(cè)異位與在位內(nèi)膜E-cad啟動(dòng)子甲基化狀況。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。用X2和Spearman's等級(jí)相關(guān)性分析比較異位內(nèi)膜與正常子宮內(nèi)膜E-cad蛋白表達(dá)及甲基化情況。P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

對(duì)比結(jié)果：

1.內(nèi)異癥組E-cad蛋白陽(yáng)性率為40%，對(duì)照組中E-cad蛋白陽(yáng)性率為 100%。Χ2=20.526，P=0.000，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.內(nèi)異癥組13例I-II期樣本中，E-cad蛋白陽(yáng)性率為61%，17例III期樣本中，E-cad蛋白陽(yáng)性率為41%，15例IV期樣本中，E-cad陽(yáng)性表達(dá)率降低為2%，內(nèi)異癥組E-cad蛋白陽(yáng)性率在不同的臨床分期呈直線相關(guān)，Χ2=5.023,P=0.081，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.45 例內(nèi)異癥組中甲基化例數(shù)為26例，甲基化率為58%；20例對(duì)照組中甲基化例數(shù)為0，甲基化率為0%。X2=19.259,P=0.000，P＜0.05。有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4.內(nèi)異癥組I-II期E-cad啟動(dòng)子甲基化率為23%，III期甲基化率為 59%，IV 期甲基化率為 86%。Χ2=9.702，P=0.008，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

5.Spearman's等級(jí)相關(guān)分析顯示在內(nèi)異癥不同臨床分期中E-cad啟動(dòng)子甲基化與蛋白表達(dá)之間相關(guān)系數(shù)，分別是I-II期r=-0.850，III期 r=-0.842，IV 期 r=-0.961，P=0.000，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

（一）內(nèi)異癥組異位內(nèi)膜和對(duì)照組在位內(nèi)膜組織中E-cad蛋白表達(dá)情況分析

把收取的45例內(nèi)異癥異位內(nèi)膜和20例對(duì)照組正常子宮內(nèi)膜樣本為對(duì)照分別石蠟包埋切片，以E-cad為一抗，進(jìn)行免疫組化試驗(yàn)，得到每個(gè)樣本的免疫組化的組織切片，按照上面試驗(yàn)方法介紹的E-cad蛋白表達(dá)陽(yáng)性與陰性判定方法，判定E-cad蛋白是否表達(dá)。按照要求讀片，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道正常的子宮內(nèi)膜腺上皮有E-cad表達(dá)，而內(nèi)異癥中E-cad蛋白有低表達(dá)或者不表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1內(nèi)異癥組、對(duì)照組E-cad蛋白陽(yáng)性率表達(dá)比較。（n,%）

?

E-cadheri n基因啟動(dòng)子CpG島的異常甲基化可能是導(dǎo)致蛋白表達(dá)下調(diào)的原因之一。諸多惡性腫瘤中，E-cad基因啟動(dòng)子區(qū)域呈現(xiàn)高度甲基化引致的E-cad表達(dá)喪失是腫瘤侵襲性的可能機(jī)制，那么，在具有與惡性腫瘤相似遠(yuǎn)處種植行為的內(nèi)異癥發(fā)病中，E-cad啟動(dòng)子甲基化也可能是引起該基因表達(dá)下降或喪失的關(guān)鍵原因。

結(jié)論

E-cad在子宮內(nèi)膜異位癥中呈低表達(dá)，E—Cad啟動(dòng)子5端CpG島甲基化可能是內(nèi)異癥中該基因失活的機(jī)制之一。E-cad啟動(dòng)子區(qū)域5’CpG島在內(nèi)異癥中呈高甲基化狀態(tài)，而在正常內(nèi)膜組織則為非甲基化狀態(tài)，E-cad基因啟動(dòng)子異常甲基化可能與為內(nèi)異癥有密切相關(guān)性，可能參與內(nèi)異癥的發(fā)生、發(fā)展。E-cad基因啟動(dòng)子區(qū)域5’CpG島在III、IV期內(nèi)異癥者中的甲基化率顯著高于I、II期，而E-cad蛋白表達(dá)率則相反。E-cad啟動(dòng)子甲基化程度越高，其蛋白表達(dá)越低，內(nèi)異癥臨床分期越晚。