王海鴿，林志健，張 冰，李高璽，王 笑

(北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100029)

人類在進(jìn)化過(guò)程中發(fā)生了基因突變，缺乏尿酸氧化酶，以尿酸為嘌呤代謝終產(chǎn)物，使得人類血尿酸水平遠(yuǎn)高于其他哺乳動(dòng)物，從而易患高尿酸血癥及痛風(fēng)[1]。而禽類肝不含精氨酸酶和氨甲酰磷酸合成酶，攝入的蛋白質(zhì)最終也以尿酸的形式自腎排出，與人類尿酸代謝更加接近。禽痛風(fēng)是一種發(fā)病率較高的禽類常見(jiàn)疾病[2-3]，國(guó)內(nèi)外多有報(bào)道，高蛋白、高鈣的營(yíng)養(yǎng)性因素可引發(fā)禽類痛風(fēng)，導(dǎo)致禽類出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹、運(yùn)動(dòng)障礙、內(nèi)臟尿酸鹽沉積甚或大批量死亡等[4-6]。實(shí)驗(yàn)常用的嚙齒類動(dòng)物等具有尿酸酶，可將尿酸降解成尿囊素排出體外，尿酸酶缺失鼠造價(jià)昂貴。常用的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛢H能模擬關(guān)節(jié)痛風(fēng)癥狀[7]，與人類痛風(fēng)發(fā)病機(jī)理不相一致。以禽類作為痛風(fēng)模型動(dòng)物，建立模擬臨床飲食誘導(dǎo)的鵪鶉痛風(fēng)模型，從尿酸代謝途徑的相似性、操作的簡(jiǎn)便性、經(jīng)濟(jì)性等方面均具有優(yōu)勢(shì)。

本實(shí)驗(yàn)?zāi)M臨床發(fā)病病因，以酵母、骨粉作為高蛋白、高鈣日糧添加劑飼喂迪法克鵪鶉，并對(duì)比自由飲水和限制飲水，探討高蛋白高鈣日糧及飲水量對(duì)鵪鶉尿酸代謝及痛風(fēng)發(fā)生的影響，以期建立穩(wěn)定持久、操作簡(jiǎn)便、適合大批量實(shí)驗(yàn)的痛風(fēng)模型，為痛風(fēng)的基礎(chǔ)及藥物開(kāi)發(fā)研究提供參考。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

普通級(jí)雄性迪法克鵪鶉36只，30日齡，體重(150±10)g，均購(gòu)自北京市徳嶺鵪鶉養(yǎng)殖場(chǎng)[SCXK(京)110113600218082]。鵪鶉購(gòu)入后，飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)普通級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室[SYXF(京)2016-0038]。并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。倫理審查證號(hào)：1100000013479。飼養(yǎng)環(huán)境：室溫20℃～25℃，相對(duì)濕度40%～60%，光照12 h明，12 h暗。

1.2 主要試劑與儀器

造模添加劑：酵母浸膏粉(批號(hào)：1349145-02；500 g)，購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司；骨粉(批號(hào)：20180301；500 g)，購(gòu)自衡水愛(ài)寵商貿(mào)有限公司。

檢測(cè)試劑盒：尿酸測(cè)定試劑盒(批號(hào)：181361；100T；生產(chǎn)時(shí)間：20180109)，購(gòu)自中生北生物科技股份有限公司；尿素氮測(cè)定試劑盒(批號(hào)：20180408；96T；生產(chǎn)時(shí)間：20180408)、肌酐測(cè)定試劑盒(批號(hào)：20171124；96T；生產(chǎn)時(shí)間：20171124)，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；尿酸鹽染色試劑盒(批號(hào)：20180604；4×50 mL；生產(chǎn)時(shí)間：20180604)，購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。

SHZ88-1型臺(tái)式水浴恒溫震蕩器，北京醫(yī)療設(shè)備廠；3K1S低溫高速離心機(jī)，德國(guó)Sigma公司；sunrise酶標(biāo)儀，瑞士TECAN公司；DHG-9070A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，北京鴻達(dá)天矩試驗(yàn)設(shè)備有限公司；Reichert Histo STAT石蠟組織切片機(jī)，美國(guó)AO公司；Olympus BX53顯微鏡，日本奧林巴斯；Himadzu B1-220H電子天平，日本島津公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 造模方法

對(duì)實(shí)驗(yàn)鵪鶉按鵪鶉免疫程序進(jìn)行免疫，選取36只經(jīng)常規(guī)免疫接種的雄性30日齡、體重相近、血尿酸水平相近的迪法克鵪鶉開(kāi)展實(shí)驗(yàn)研究(購(gòu)自北京種禽公司德嶺鵪鶉場(chǎng))。隨機(jī)分為3組，每組12只，即對(duì)照組、模型Ⅰ組、模型Ⅱ組。

對(duì)照組鵪鶉飼喂基礎(chǔ)日糧(日糧粗蛋白含量21.7%，鈣含量1%)，模型Ⅰ組和模型Ⅱ組飼喂高蛋白高鈣日糧(日糧粗蛋白含量29.5%，鈣含量7.8%)，對(duì)照組和模型Ⅰ組鵪鶉自由飲水，模型Ⅱ組鵪鶉每日限制飲水4 h。日糧除嘌呤和鈣水平之外，其余營(yíng)養(yǎng)成分均符合美國(guó)NRC家禽營(yíng)養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)[8]。日糧組成和主要營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)鵪鶉籠養(yǎng)，每日定時(shí)喂飼料，并清潔鵪鶉舍。每10 d稱取一次鵪鶉體質(zhì)量，并于晚8點(diǎn)禁食，于次日早8點(diǎn)頸靜脈取血一次，檢測(cè)血清生化指標(biāo)。每20 d給鵪鶉放入代謝籠，收取24 h鵪鶉糞尿混合物，檢測(cè)糞尿上清液生化指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)第50天，鵪鶉頸靜脈取血1.5 mL后處死，取各組鵪鶉腎臟組織固定、石蠟包埋?？刂苿?dòng)物房室溫20℃～25℃，濕度40%～60%。光照12 h明，12 h暗。

表1 造模劑配比及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ)，%)

注：預(yù)混料為每千克飼糧提供：維生素A 200000 IU，維生素D3 60000 IU，維生素E 380 mg，維生素K3 56 mg，維生素B1 56 mg，維生素B2 200 mg，維生素B6 60 mg，維生素B12 300 μg，生物素 3 mg，煙酸 600 mg，泛酸鈣 240 mg，葉酸 30 mg，銅 0.2 g，鐵 1.8 g，錳 1.4 g，鋅 1.1 g，硒 6 mg，碘 8.5 g，磷 15～60 g，鈣 100～250 g，氯化鈉 50～150 g，氨基酸 28 g。

Note. The premix provides the following nutrients per kg diets: VA 200000 IU, VD3 60000 IU,VE 380 mg, VK3 56 mg，VB1 56 mg，VB2 200 mg, VB6 60 mg，VB12 300 μg，biotin 3 mg，niacin 600 mg，pantothenic acid 240 mg，folic acid 30 mg，Cu 0.2 g，F(xiàn)e 1.8 g，Mn 1.4 g，Zn 1.1 g，Se 6 mg，I 8.5 mg，P 15～60 g， Ca 100～250 g，NaCl 50～150 g， amino acids 28 g.

1.3.2 一般狀態(tài)觀察

實(shí)驗(yàn)期間每天定時(shí)稱量耗料量；每10 d稱重一次，每次稱重時(shí)間保持一致；每10 d測(cè)量一次動(dòng)物踝關(guān)節(jié)周徑，用軟線環(huán)繞鵪鶉踝關(guān)節(jié)三周，連續(xù)測(cè)量3次，保證每次測(cè)量時(shí)間及位置一致，以測(cè)量區(qū)軟線長(zhǎng)度平均值的1/3作為鵪鶉踝關(guān)節(jié)周徑。踝關(guān)節(jié)腫脹度(%)=(測(cè)量日踝關(guān)節(jié)周徑-實(shí)驗(yàn)前踝關(guān)節(jié)周徑)/實(shí)驗(yàn)前踝關(guān)節(jié)周徑×100%。計(jì)算各組鵪鶉平均采食量、體重和關(guān)節(jié)腫脹度。實(shí)驗(yàn)期間每日觀察鵪鶉的精神狀態(tài)、食欲、糞便情況、運(yùn)動(dòng)狀態(tài)等。

1.3.3 腎病理變化及尿酸鹽沉積

實(shí)驗(yàn)持續(xù)30 d結(jié)束，對(duì)動(dòng)物禁食不禁水12 h后，空腹采血2 mL，處死動(dòng)物，取動(dòng)物腎樣本，進(jìn)行固定、包埋、切片、HE染色、尿酸鹽染色。觀察動(dòng)物腎病理形態(tài)及尿酸鹽沉積狀況。

1.3.4 血清生化指標(biāo)

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前采集鵪鶉血液，檢測(cè)血清尿酸水平，記錄鵪鶉初始尿酸水平。實(shí)驗(yàn)期間，以10 d作為一個(gè)周期動(dòng)態(tài)觀測(cè)鵪鶉血清尿酸、肌酐、尿素氮水平。即每10 d對(duì)動(dòng)物禁食不進(jìn)水12 h后，空腹頸靜脈采血1.0 mL，靜置3 h后，4℃ 3500 r/min離心10 min，分離血清。在半自動(dòng)生化儀上，以酶比色法測(cè)定鵪鶉血清尿酸、尿素氮、肌酐水平。

1.3.5 糞尿生化指標(biāo)

實(shí)驗(yàn)第20天對(duì)鵪鶉進(jìn)行一次代謝收集，收集其糞尿混合物，充分震蕩，4℃ 3500 r/min離心10 min，分離上清液。在半自動(dòng)生化儀上，以酶比色法測(cè)定鵪鶉血清尿酸水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：

2 結(jié)果：

2.1 造模期間鵪鶉痛風(fēng)癥狀

由表2、表3、表4、圖1可知，實(shí)驗(yàn)期間對(duì)照組鵪鶉體重、日均采食量平穩(wěn)上漲；踝關(guān)節(jié)未見(jiàn)明顯腫脹；毛色鮮亮、有光澤；鳴叫聲嘹亮；活潑好動(dòng)，其精神狀態(tài)、行為狀態(tài)良好。模型Ⅰ組鵪鶉體重較對(duì)照組高，一般狀態(tài)良好，與對(duì)照組相較無(wú)顯著性差異。模型Ⅱ組鵪鶉鵪鶉體重、日均采食量平穩(wěn)上漲；可見(jiàn)踝關(guān)節(jié)明顯腫脹，實(shí)驗(yàn)第10天，顯著性高于對(duì)照組(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)第20～50天踝關(guān)節(jié)腫脹度極顯著性高于對(duì)照組(P<0.01)；毛色鮮亮、有光澤；鳴叫聲嘶??；部分鵪鶉出現(xiàn)懶動(dòng)喜臥、跛足、足趾變型等癥狀。

2.2 造模后鵪鶉腎病理變化及尿酸鹽沉積狀況：

鵪鶉腎臟病理切片HE染色400倍光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)對(duì)照組鵪鶉腎組織結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞核藍(lán)染，細(xì)胞漿均勻紅染，腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)正常。模型Ⅰ組鵪鶉腎組織結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯異常，組織結(jié)構(gòu)清晰，腎小管上皮細(xì)胞形態(tài)正常。模型Ⅱ組鵪鶉腎組織結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞漿疏松、不均勻紅染，部分腎小球萎縮，腎小管管腔擴(kuò)張。見(jiàn)圖2。

鵪鶉腎尿酸鹽染色400倍光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)，對(duì)照組鵪鶉腎組織未見(jiàn)黑色尿酸鹽結(jié)晶。模型Ⅰ組鵪鶉腎組織明顯可見(jiàn)黑色的尿酸鹽結(jié)晶沉積于腎小管周圍。模型Ⅱ組鵪鶉腎組織顯著可見(jiàn)大量黑色尿酸鹽結(jié)晶沉積于腎小管周圍。見(jiàn)圖3。

2.3 造模期間鵪鶉尿酸水平

由表5、表6可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)期間，與對(duì)照組相比，模型Ⅰ組鵪鶉于實(shí)驗(yàn)第20 d血清尿酸水平顯著性高于對(duì)照組(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)第30～50天血清尿酸水平均極顯著性高于對(duì)照組(P<0.01)；模型Ⅱ組鵪鶉于實(shí)驗(yàn)第10～50天血清尿酸水平均極顯著性高于對(duì)照組(P<0.01)。其余各組血清尿酸水平與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

實(shí)驗(yàn)期間，與對(duì)照組相比，模型Ⅰ組鵪鶉于實(shí)驗(yàn)第20天糞尿尿酸水平顯著性低于對(duì)照組(P<0.05)；模型Ⅱ組鵪鶉于實(shí)驗(yàn)第40天糞尿尿酸水平顯著性低于對(duì)照組(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)第20天糞尿尿酸水平極顯著性低于對(duì)照組(P<0.01)。

表2 高蛋白高鈣日糧對(duì)鵪鶉體重的影響

表3 高蛋白高鈣日糧對(duì)鵪鶉采食量的影響

注：與同期對(duì)照組比較，*P<0.05,**P<0.01。下表同。

Note: Compared with the control group at the same day,*P<0.05,**P<0.01.The same in the following tables.

表4 實(shí)驗(yàn)期間各組鵪鶉右足踝關(guān)節(jié)腫脹度(%，n=12)

表5 高蛋白高鈣日糧對(duì)鵪鶉血清尿酸水平的影響

組別Groups20天20 d 40天40 d對(duì)照組 Control group33281.32±6344.9318412.57±4528.81模型Ⅰ組 Model group I24443.98±11095.04?16726.30±4641.35模型Ⅱ組 Model group II16730.43±11415.54??14102.99±4388.33?

注：與同期對(duì)照組比較，*P<0.05,**P<0.01。

Note. Compared with the control group of the same at the same day,*P<0.05,**P<0.01.

圖2 鵪鶉腎HE染色病理切片(×400)Figure 2 Histological changes of the quail renal tissues(HE staining)

圖3 鵪鶉腎尿酸鹽染色病理切片(×400)Figure 3 Pathological changes of the quail renal tissues(Urate staining)

表7 高蛋白高鈣日糧對(duì)50 d鵪鶉血清炎性

2.4 鵪鶉血清炎性因子表達(dá)情況

由表7可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)第50天模型Ⅱ組鵪鶉血清炎性因子IL-1β和TNF-α水平顯著性高于對(duì)照組(P<0.05)，模型Ⅰ組鵪鶉血清IL-1β和TNF-α水平與對(duì)照組無(wú)顯著差異。

2.5 造模期間鵪鶉血清肌酐、尿素氮水平

由表8和表9可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，模型Ⅰ組血清尿素氮水平無(wú)顯著性差異(P>0.05)。模型Ⅱ組鵪鶉于實(shí)驗(yàn)第30天、40天，血清尿素氮水平顯著性高于對(duì)照組(P<0.05)。

表8 高蛋白高鈣日糧對(duì)鵪鶉血清尿素氮水平的影響

表9 高蛋白高鈣日糧對(duì)鵪鶉血清肌酐水平的影響

實(shí)驗(yàn)期間，與對(duì)照組相比，模型Ⅰ組血清肌酐水平無(wú)顯著性差異(P>0.05)；模型Ⅱ組鵪鶉于實(shí)驗(yàn)第40天、50天血清肌酐水平顯著性高于對(duì)照組(P<0.05)。

3 討論

3.1 高蛋白高鈣攝食合并限制飲水誘導(dǎo)鵪鶉痛風(fēng)的影響

實(shí)驗(yàn)研究表明實(shí)驗(yàn)期間對(duì)照組鵪鶉體重、日均采食量平穩(wěn)上漲，一般狀態(tài)良好。對(duì)鵪鶉腎組織切片進(jìn)行尿酸鹽染色(六胺銀法)，陽(yáng)性反應(yīng)時(shí)尿酸鹽結(jié)晶被染成黑色，底色為粉紅色。由圖3可見(jiàn)，對(duì)照組鵪鶉腎組織未見(jiàn)黑色尿酸鹽沉積。

模型Ⅰ組以高蛋白高鈣日糧結(jié)合自由飲水干預(yù)鵪鶉。該組鵪鶉一般狀態(tài)與對(duì)照組無(wú)明顯差異，未見(jiàn)明顯痛風(fēng)癥狀。血清尿酸水平顯著升高，同時(shí)糞尿尿酸水平顯著降低。該組鵪鶉腎組織可見(jiàn)少量尿酸鹽沉積于腎小管周圍。因?yàn)轾g鶉肝缺少精氨酸酶，蛋白質(zhì)只能通過(guò)嘌呤核苷酸循環(huán)生成嘌呤，而后在黃嘌呤氧化酶的作用下以尿酸作為代謝終產(chǎn)物排出體外[9]。以酵母浸膏作為高蛋白食餌飼喂鵪鶉，為尿酸的合成提供的更多的原料，引發(fā)鵪鶉高尿酸血癥。鵪鶉具有特殊的生理結(jié)構(gòu)，消化管、輸尿管和生殖管末端匯合于泄殖腔，故鵪鶉糞尿排泄物中尿酸含量可反映鵪鶉排泄尿酸的能力，由于在血尿酸水升高同時(shí)糞尿尿酸水平降低，認(rèn)為高蛋白高鈣日糧對(duì)尿酸的排泄有抑制作用。腎是鵪鶉排泄尿酸的唯一通道，腎臟結(jié)構(gòu)功能的改變直接影響尿酸排泄，長(zhǎng)期處在高鈣環(huán)境下會(huì)引起腎小球腫大、數(shù)量減少、腎小管急性細(xì)胞損傷等[10-11]，因此認(rèn)為高鈣日糧的添加可能通過(guò)造成鵪鶉腎損傷進(jìn)而抑制尿酸排泄。因此在實(shí)驗(yàn)期間內(nèi)，鵪鶉攝食蛋白質(zhì)含量為29.5%，鈣含量為7.8%的高蛋白高鈣日糧，可增加鵪鶉尿酸生成、減少排泄，導(dǎo)致鵪鶉高尿酸血癥并有少量尿酸鹽沉積于腎，未見(jiàn)明顯痛風(fēng)癥狀。

模型Ⅱ組鵪鶉攝食高蛋白高鈣日糧結(jié)合限制飲水。鵪鶉體重、日均采食量平穩(wěn)上漲，踝關(guān)節(jié)腫脹明顯，部分鵪鶉出現(xiàn)懶動(dòng)喜臥、跛足、足趾變型等痛風(fēng)癥狀。限制飲水后，其血清尿酸水平極顯著高于對(duì)照組，同時(shí)糞尿尿酸水平降低。炎性因子白介素-1β和腫瘤壞死因子α顯著升高。病理切片染色后可見(jiàn)腎小管周圍密布黑色尿酸鹽沉積，沉積現(xiàn)象較嚴(yán)重。結(jié)合血清肌酐、尿素氮結(jié)果推測(cè)高蛋白高鈣日糧結(jié)合限制飲水能導(dǎo)致鵪鶉腎損傷，這可能與腎小管大量尿酸鹽沉積相關(guān)。以上結(jié)果表明該方法可誘導(dǎo)鵪鶉痛風(fēng)。尿酸難溶于水而易于與血液中鈣、鈉離子結(jié)合形成尿酸鹽，尿酸鹽具有膠體性質(zhì)在血液中受大量血漿蛋白保護(hù)而保持穩(wěn)定性，但當(dāng)血液中尿酸水平和鈣離子水平過(guò)高時(shí)，產(chǎn)生大量尿酸鹽使尿酸鹽溶液的穩(wěn)定性遭到破壞而發(fā)生沉積[12]。飲水量多少與高尿酸血癥及痛風(fēng)的發(fā)生率成反比，飲水量增加、尿量增加，有利于尿酸的排泄從而維持血尿酸濃度穩(wěn)定。在機(jī)體相對(duì)缺水狀態(tài)下，血液濃縮，會(huì)加劇血尿酸濃度升高；尿液濃縮，糞尿排泄量減少，抑制尿酸排泄加劇鵪鶉血尿酸水平的升高；當(dāng)給鵪鶉攝入相同高蛋白高鈣日糧時(shí)，限制飲水后能使鵪鶉血尿酸、血鈣濃度更高，容易聚集在器官、關(guān)節(jié)等部位形成沉積，誘發(fā)痛風(fēng)發(fā)作[13-14]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與單純給予高蛋白高鈣日糧的鵪鶉相比，限制飲水之后能使鵪鶉血尿酸水平更高、糞尿尿酸水平更低、腎臟尿酸鹽沉積更顯著，證實(shí)限制飲水量之后對(duì)鵪鶉尿酸排泄抑制作用更明顯，促進(jìn)尿酸鹽沉積作用更顯著，可見(jiàn)足夠的飲水量有助于減緩尿酸鹽沉積，減少痛風(fēng)的發(fā)生?？锛t艷等[15]對(duì)雞飼喂高鈣日糧、高蛋白日糧、高蛋白高鈣日糧并限制飲水7周，而后改為正常自由飲水，通過(guò)對(duì)比同一組雞限制飲水前后病理改變也證實(shí)限制飲水能導(dǎo)致血尿酸水平升高更顯著，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。

作者前期通過(guò)給鵪鶉飼喂含有一定比例酵母浸膏粉和石粉的高蛋白高鈣日糧擬誘導(dǎo)鵪鶉痛風(fēng)[16]，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法對(duì)鵪鶉狀態(tài)影響較大，導(dǎo)致鵪鶉一般狀態(tài)差甚或死亡的現(xiàn)象，且造模不穩(wěn)定，僅有部分鵪鶉出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫大等癥狀。而本實(shí)驗(yàn)所造模型較穩(wěn)定，從踝關(guān)節(jié)周徑可知模型Ⅱ組鵪鶉踝關(guān)節(jié)腫大，從血尿酸水平及腎臟尿酸鹽沉積可知模型Ⅱ組血尿酸升高更顯著、尿酸鹽沉積程度更明顯。因此，當(dāng)給予鵪鶉高蛋白高鈣日糧并同時(shí)限制飲水時(shí)可誘發(fā)鵪鶉痛風(fēng)。

3.2 鵪鶉痛風(fēng)模型研究的思考

痛風(fēng)是長(zhǎng)期嘌呤代謝障礙、血尿酸增高引起組織損傷的一組異質(zhì)性疾病。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的提高，國(guó)民飲食中蛋白質(zhì)、嘌呤含量的增加，高尿酸血癥和痛風(fēng)的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，且呈年輕化趨勢(shì)，與多種疾病相關(guān)，其發(fā)病機(jī)理及治療方法的研究成為人們的關(guān)注點(diǎn)。建立理想的痛風(fēng)動(dòng)物模型是痛風(fēng)病的病理機(jī)制與藥物篩選研究的基礎(chǔ)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)此進(jìn)行了長(zhǎng)期的研究，目前已有多種用于研究痛風(fēng)的動(dòng)物模型，但至今尚無(wú)符合人類痛風(fēng)發(fā)病特點(diǎn)、能反應(yīng)其病理過(guò)程的動(dòng)物模型，雖然有些靈長(zhǎng)類與人類代謝過(guò)程十分接近，但在實(shí)際情況下，由于條件限制，很難在大規(guī)模實(shí)驗(yàn)研究中使用。禽類動(dòng)物痛風(fēng)與人類痛風(fēng)具有高度的相似性，若以禽類作為模型動(dòng)物研究建立禽痛風(fēng)模型，對(duì)人類尿酸鹽沉積造成的病理?yè)p傷、痛風(fēng)的發(fā)病機(jī)制及治療藥物篩選研究具有重要意義。

以高蛋白高鈣日糧塑造的鵪鶉痛風(fēng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c人類痛風(fēng)具有較高的相似性：① 發(fā)病原因的相似性。禽類動(dòng)物痛風(fēng)與人類痛風(fēng)均由尿酸生成增多或尿酸排泄減少導(dǎo)致尿酸鹽沉積而引起[17]。均受遺傳、飲食、環(huán)境等因素影響，當(dāng)富含蛋白質(zhì)、嘌呤等食物攝入過(guò)多可引起尿酸生成增多進(jìn)而易以鈉鹽、鈣鹽等形式沉積，形成痛風(fēng)。② 臨床表現(xiàn)上的相似性。在臨床表現(xiàn)上，尤其是禽類關(guān)節(jié)型痛風(fēng)與人類痛風(fēng)極為相似，均表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫脹，且疼痛腫脹多發(fā)生于末梢關(guān)節(jié)，如足趾關(guān)節(jié)、趾前關(guān)節(jié)，也可侵害腕關(guān)節(jié)、腕前關(guān)節(jié)等處。③ 病理基礎(chǔ)的相似性。禽類與人類均缺少尿酸酶，無(wú)法像大多數(shù)哺乳動(dòng)物那樣將嘌呤代謝為可溶性尿素排出體外，均以尿酸為代謝終產(chǎn)物，尿酸難溶于水而易于以尿酸鹽的形式沉積形成痛風(fēng)。并且禽痛風(fēng)是一種常見(jiàn)禽病，有較高的發(fā)病率和死亡率，因此本實(shí)驗(yàn)欲參照禽痛風(fēng)的發(fā)病規(guī)律建立有效、簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)的禽痛風(fēng)模型。

鵪鶉具有體型較小、易于操作，節(jié)省空間、適合大規(guī)模飼養(yǎng)，價(jià)格低廉等優(yōu)勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)模擬臨床高蛋白高鈣飲食，合并限制飲水，成功誘導(dǎo)出鵪鶉痛風(fēng)，證明該方法塑造鵪鶉痛風(fēng)動(dòng)物模型。但目前實(shí)驗(yàn)塑造的鵪鶉痛風(fēng)模型尚不穩(wěn)定，仍需要在操作方法、造模劑種類及劑量的篩選上進(jìn)一步研究。其次鵪鶉尚未建立微生物控制標(biāo)準(zhǔn)及分級(jí)，這在一定程度上阻礙了禽類模型的應(yīng)用[16]。因此對(duì)鵪鶉痛風(fēng)模型的塑造還需要進(jìn)一步研究。

致謝衷心感謝導(dǎo)師張冰教授和指導(dǎo)組林志健老師對(duì)我的研究思路、實(shí)驗(yàn)操作以及論文撰寫(xiě)給予的指導(dǎo)和幫助！衷心感謝本課題組李高璽、王雨、白云飛、李凡等同門(mén)們?cè)趯?shí)驗(yàn)方面給予我的幫助！感謝父母家人對(duì)我的關(guān)心、支持和理解！