馬子涵，賈西云，徐 倩，陳發(fā)帥，彭方慧，巴 楠，張自森

(1.鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南 鄭州 450052；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院普通外科，河南 衛(wèi)輝 453100)

胃癌是我國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤，發(fā)病率居第2位[1]，是一種多基因參與的異質(zhì)性疾病。蛋白激酶B(AKT)呈癌基因特性，本課題組前期研究[2-3]中發(fā)現(xiàn)，AKT參與了胃癌細(xì)胞增殖和化療敏感性調(diào)節(jié)。微管不穩(wěn)定蛋白STMN1也呈癌基因特性，其高表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲，與胃癌化療耐藥和不良預(yù)后相關(guān)[4]。AKT和STMN1在腫瘤細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制中密切相關(guān)，AKT1/STMN1信號(hào)通路的異常激活促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖與耐藥[5-6]，STMN1基因沉默也可通過(guò)AKT1信號(hào)通路抑制胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[7]。然而，AKT1和STMN1在胃癌發(fā)生中的關(guān)系及其臨床意義并不明確。本文通過(guò)檢測(cè)42例胃癌及其對(duì)應(yīng)癌旁組織中AKT1與STMN1表達(dá)，分析兩者之間的相關(guān)性及與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系，為進(jìn)一步探討兩者在胃癌診斷和治療中的應(yīng)用價(jià)值提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2015年6月至2018年5月于鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院行胃癌根治術(shù)的42例胃癌患者的石蠟包埋胃癌組織及其對(duì)應(yīng)癌旁組織標(biāo)本，癌旁組織距離腫瘤組織邊緣均>5 cm，所有患者均經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí)為腺癌，術(shù)前未進(jìn)行放、化療。42例患者中，男34例，女8例，年齡42～81歲，中位年齡65歲。本研究經(jīng)鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查同意。

1.2 免疫組化染色方法組織標(biāo)本經(jīng)常規(guī)甲醛固定、脫水、石蠟包埋等處理，切片、脫蠟后用檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)，以已知陽(yáng)性標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)步驟按照S-P免疫組化試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，最后用羅氏全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色儀檢測(cè)AKT1和STMN1表達(dá)。其中AKT1(75692)抗體購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司，STMN1(11157-1-AP)抗體購(gòu)自武漢三鷹生物技術(shù)公司。

1.3 免疫組化染色判斷標(biāo)準(zhǔn)AKT1以細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，STMN1以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕色至棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)。觀察陽(yáng)性細(xì)胞百分比及染色強(qiáng)度，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比(陰性為0分，1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分)，評(píng)判陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度(無(wú)陽(yáng)性染色為0分，淺黃色為1分，深黃色為2分，棕黃色為3分)。最終結(jié)果以陽(yáng)性細(xì)胞百分比及染色強(qiáng)度評(píng)分相乘進(jìn)行評(píng)估，>6分為陽(yáng)性表達(dá)，≤6分為陰性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示，組間比較用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，AKT1、STMN1相關(guān)性分析用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 AKT1、STMN1在胃癌組織及其對(duì)應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)胃癌組織中AKT1陽(yáng)性表達(dá)率61.90%(26/42)，高于癌旁組織的23.81%(10/42)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。胃癌組織中STMN1陽(yáng)性表達(dá)率35.71%(15/42)，高于癌旁組織的7.14%(3/42)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1、2。

表1 AKT1在胃癌及其對(duì)應(yīng)癌旁組織中的表達(dá) n(%)

表2 STMN1在胃癌及其對(duì)應(yīng)癌旁組織中的表達(dá) n(%)

2.2 胃癌組織中AKT1、STMN1陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系胃癌組織中AKT1陽(yáng)性表達(dá)與TNM分期、T期有關(guān)(P均<0.05)，而與性別、年齡、腫瘤部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P均>0.05)。胃癌組織STMN1陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤部位有關(guān)(P<0.05)，而與性別、年齡、TNM分期、T期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P均>0.05)。見(jiàn)表4。

2.3 胃癌組織中AKT1與STMN1表達(dá)的相關(guān)性胃癌組織中AKT1與STMN1的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.380，P<0.05)。見(jiàn)表3。

3 討論

胃癌發(fā)病率高，早期診斷難度大，多數(shù)患者確診時(shí)已是中晚期，喪失了根治機(jī)會(huì)。充分了解胃癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制對(duì)實(shí)現(xiàn)胃癌的精準(zhǔn)診斷、精準(zhǔn)治療及改善預(yù)后具有重要意義[8]。

表3 胃癌組織中AKT1、STMN1陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系

表4 AKT1和STMN1在胃癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 n

AKT信號(hào)通路在調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、代謝等生物學(xué)功能中發(fā)揮重要作用，已成為備受關(guān)注的抗腫瘤治療靶點(diǎn)[9]。我們前期的研究[2-3]也發(fā)現(xiàn)AKT信號(hào)通路參與了胃癌細(xì)胞增殖和藥物敏感性調(diào)節(jié)。AKT有3個(gè)同源異構(gòu)體，即AKT1、AKT2和AKT3，分別具有不同的生物學(xué)作用，而腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡調(diào)節(jié)主要與AKT1有關(guān)[10-11]。抑制AKT1表達(dá)能逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞的多藥耐藥[12]。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中AKT1陽(yáng)性表達(dá)率61.9%，顯著高于癌旁組織，AKT1陽(yáng)性表達(dá)與TNM分期及T分期有關(guān)，提示AKT1可能主要參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

STMN1是一種微管不穩(wěn)定蛋白，在有絲分裂的調(diào)控中起著重要作用，在多種腫瘤中存在高表達(dá)。STMN1高表達(dá)與多種惡性實(shí)體腫瘤密切相關(guān)，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞惡性行為，不僅是一種腫瘤預(yù)后標(biāo)志物，也是一個(gè)有價(jià)值的治療靶點(diǎn)[13]，并已嘗試用于復(fù)發(fā)腫瘤的治療[14]。STMN1高表達(dá)與胃癌的發(fā)生、發(fā)展、化療耐藥和不良預(yù)后相關(guān)，其高表達(dá)可促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖[4,15]。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中STMN1陽(yáng)性表達(dá)率35.7%，顯著高于癌旁組織；STMN1陽(yáng)性表達(dá)僅與腫瘤部位有關(guān)，這提示STMN1與胃癌原發(fā)部位相關(guān)，可能有助于原發(fā)腫瘤起源部位確定；STMN1陽(yáng)性表達(dá)與TNM分期、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無(wú)關(guān)，這提示STMN1僅參與胃癌的發(fā)生，可能是一個(gè)早期分子事件。值得說(shuō)明的是，本研究中STMN1陽(yáng)性表達(dá)率低于文獻(xiàn)[15]報(bào)道，這可能主要是所采用免疫組化陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)的不同所致，也可能存在病例的區(qū)域性和個(gè)體性差異影響。

有研究[16]顯示，AKT1可能是一個(gè)區(qū)分胃癌和胃炎的生物標(biāo)志物。STMN1在早期結(jié)腸癌中高表達(dá)，可能是區(qū)分結(jié)腸良惡性病變的鑒別診斷標(biāo)志物[17]。本研究結(jié)果表明，胃癌組織中AKT1與STMN1呈高表達(dá)且存在正相關(guān)關(guān)系，提示兩者共同參與胃癌的發(fā)生，在胃癌組織良惡性鑒別中兩者聯(lián)合使用可能具有輔助鑒別診斷價(jià)值。研究[5-7]發(fā)現(xiàn)，AKT1和STMN1在腫瘤細(xì)胞增殖調(diào)控中存在共同機(jī)制，STMN1可通過(guò)AKT1信號(hào)通路調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，AKT1信號(hào)通路的激活也可調(diào)節(jié)STMN1促使肺癌細(xì)胞產(chǎn)生耐藥，而兩者的相互調(diào)控機(jī)制尚未闡明。進(jìn)一步揭示胃癌中AKT1和STMN1之間相互作用的分子機(jī)制，可能為胃癌精準(zhǔn)診療提供新的靶點(diǎn)。

綜上所述，AKT1和STMN1蛋白在胃癌組織中高表達(dá)并呈正相關(guān)性，提示兩者共同參與了胃癌的發(fā)生，聯(lián)合檢測(cè)對(duì)胃癌的診斷和鑒別診斷有一定輔助價(jià)值，其共同的分子機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。