劉玉華，吳桂銀，陳光明，陳志國(guó)，陳佳欣

(江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇 泰州 225300)

鴨大腸桿菌病又稱鴨大腸桿菌敗血癥，是由大腸埃希菌的某些致病血清型菌株或條件致病性菌株引起鴨全身或局部感染的一種細(xì)菌性傳染病[1]，嚴(yán)重危害養(yǎng)鴨業(yè)的發(fā)展[2]。隨著泰州養(yǎng)鴨業(yè)的發(fā)展，大腸桿菌病趨于增多，給養(yǎng)鴨業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失[3]。本研究對(duì)泰州鴨場(chǎng)大腸埃希菌感染情況進(jìn)行調(diào)查，可補(bǔ)充泰州地區(qū)鴨大腸桿菌病流行病學(xué)資料，為鴨大腸桿菌病的防治提供流行病學(xué)依據(jù)。對(duì)鴨場(chǎng)大腸埃希菌耐藥性情況調(diào)查，可指導(dǎo)臨床合理用藥，提高治療效果，減少藥物殘留，減緩耐藥性，提高養(yǎng)殖效益，在社會(huì)公共衛(wèi)生等方面具有重要意義。

1 材料和方法

1.1 材料

疑似病鴨采自泰州地區(qū)鴨場(chǎng)。

1.2 方法

1.2.1 發(fā)病情況調(diào)查

在泰州地區(qū)鴨場(chǎng)發(fā)放調(diào)查問(wèn)卷，并進(jìn)行實(shí)地走訪、查閱病歷檔案，了解當(dāng)?shù)伉唸?chǎng)大腸桿菌病的發(fā)生情況。

1.2.2 病料采集

通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)觀察，對(duì)流行病學(xué)、臨床癥狀疑似大腸桿菌病的發(fā)病鴨、瀕死鴨進(jìn)行病理剖檢，無(wú)菌采集病變明顯病鴨的肝臟、心臟、血液等組織病料，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)

將采集病料劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)18 h，選取中等大小、表面光滑濕潤(rùn)的紅色菌落，用麥康凱瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行純化，觀察平板上菌落特征，并挑取紅色菌落進(jìn)行涂片、革蘭氏染色、鏡檢。

1.2.4 生化試驗(yàn)

將麥康凱瓊脂純化后的可疑菌落進(jìn)行甲基紅、V-P、吲哚、枸櫞酸鹽、葡萄糖、甘露糖、乳糖、麥芽糖、硫化氫、尿素酶等生化試驗(yàn)。

1.2.5 血清型鑒定

取高壓抗原分別與大腸埃希菌單因子血清進(jìn)行玻板凝集試驗(yàn)。分別取高壓抗原和血清10 μL在玻板上混勻，0.5 min內(nèi)出現(xiàn)明顯凝集者判為陽(yáng)性。同時(shí)用高壓抗原與0.5%石炭酸生理鹽水混合物作對(duì)照，觀察有無(wú)自凝現(xiàn)象。

1.2.6 藥敏試驗(yàn)

采用紙片擴(kuò)散法檢測(cè)大腸埃希菌分離株對(duì)氨卞西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢噻趺、頭孢他啶、慶大霉素、大觀霉素、四環(huán)素、多西環(huán)素、氟苯尼考、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、阿米卡星等12種抗菌藥物的敏感程度，大腸埃希氏菌(ATCC25922)為標(biāo)準(zhǔn)菌株。用接種環(huán)取大腸埃希菌單菌落4～5個(gè)置于盛有滅菌生理鹽水的試管中，調(diào)整菌懸液的濃度為0.5麥?zhǔn)媳葷釂挝?相當(dāng)于1.5×108mL-1)。試驗(yàn)方法參考文獻(xiàn)[4]，測(cè)量抑菌圈直徑，判斷大腸埃希菌對(duì)藥物的敏感情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)病情況

泰州鴨場(chǎng)有規(guī)?；唸?chǎng)、專業(yè)合作社和養(yǎng)鴨專業(yè)戶，飼養(yǎng)品種有櫻桃谷鴨、番鴨、高郵鴨、麻鴨，飼養(yǎng)類型有肉鴨、蛋鴨、種鴨，飼養(yǎng)方式有散養(yǎng)、籠養(yǎng)及稻田養(yǎng)鴨。鴨大腸桿菌發(fā)病率在不同鴨場(chǎng)為2%～20%，不同鴨場(chǎng)大腸桿菌病發(fā)病率不同，專業(yè)合作社最高，其次為農(nóng)村散養(yǎng)戶，規(guī)模鴨場(chǎng)最低，原因可能與專業(yè)合作社飼養(yǎng)密度大、衛(wèi)生條件差、防疫跟不上等有關(guān)。不同品種的鴨如麻鴨、番鴨、櫻桃谷鴨等均有大腸桿菌病發(fā)生，品種間差異不顯著。鴨大腸桿菌病一年四季均可發(fā)生，在秋、春季節(jié)發(fā)病率最高。不同日齡鴨均可發(fā)病，以10～30日齡多發(fā)。發(fā)病鴨排綠色稀糞、羽毛松亂、走路不穩(wěn)；剖檢典型病變?yōu)闅饽?、肝臟、心包膜表面有纖維素性滲出物覆蓋，嚴(yán)重者與粘膜粘連，肝臟腫大，成年病死鴨出現(xiàn)腹水較多。

2.2 細(xì)菌分離

對(duì)采集的36份病料進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)、染色鏡檢、生化試驗(yàn)，分離鑒定大腸埃希菌23株。

2.3 血清型

通過(guò)玻板凝集試驗(yàn)進(jìn)行鴨大腸埃希菌分離株血清型的鑒定，結(jié)果顯示(表1)，23株中有22株定型菌株。其中優(yōu)勢(shì)血清型為O78、O2、O76。

表1 鴨大腸埃希菌血清型鑒定結(jié)果

2.4 耐藥性

對(duì)鴨大腸埃希菌的耐藥性檢測(cè)結(jié)果(表2)表明，23株鴨大腸埃希菌對(duì)頭孢噻呋、頭孢他啶、阿米卡星的耐藥率較低，分別為4.3%、8.7%、21.7%，對(duì)慶大霉素、氨芐西林的耐藥率較高，分別為73.9%、95.7%。

表2 大腸埃希菌分離株耐藥性檢測(cè)結(jié)果

3 討論

本研究系統(tǒng)調(diào)查了泰州地區(qū)鴨場(chǎng)大腸埃希菌感染情況及耐藥性情況，為泰州地區(qū)防治鴨大腸桿菌病提供了流行病學(xué)依據(jù)。根據(jù)耐藥性情況指導(dǎo)臨床合理用藥，對(duì)于提高治療效果，提高養(yǎng)殖效益具有重要意義。泰州地區(qū)鴨場(chǎng)大腸桿菌病發(fā)病率2%～20%，一年四季均有發(fā)生，不同品種的鴨均會(huì)發(fā)生，表明大腸桿菌病是泰州地區(qū)鴨場(chǎng)的一種常見(jiàn)病、多發(fā)病。為避免該病的發(fā)生，減少該病帶來(lái)的損失，應(yīng)采取以下綜合防治措施：一是改善衛(wèi)生條件，做好鴨場(chǎng)和水源的消毒工作。要按時(shí)清潔、消毒禽舍、用具，嚴(yán)格對(duì)鴨場(chǎng)和水源進(jìn)行消毒，病鴨糞便要及時(shí)消毒并清除。二是加強(qiáng)幼齡鴨的飼養(yǎng)管理，如注意育雛期的保溫及飼養(yǎng)密度，改善通風(fēng)，降低灰塵，勤于除糞，合理搭配日糧等。三是加強(qiáng)免疫接種，最好選用本地流行血清型菌株制成的疫苗進(jìn)行預(yù)防接種。四是選用敏感藥物進(jìn)行治療，以提高治療效果，降低大腸桿菌病病鴨的病死率。

從發(fā)病鴨或?yàn)l死鴨的組織病料中分離鑒定大腸埃希菌23株，血清型鑒定結(jié)果表明，優(yōu)勢(shì)血清型為O78、O2、O76，為選用優(yōu)勢(shì)血清型菌株制備疫苗提供參考。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，23株鴨大腸埃希菌對(duì)頭孢噻呋、頭孢他啶、阿米卡星的耐藥率較低，對(duì)慶大霉素、氨芐西林的耐藥率較高。當(dāng)?shù)孬F醫(yī)人員或養(yǎng)殖戶在治療鴨大腸桿菌病時(shí)，應(yīng)盡量選用頭孢噻呋、頭孢他啶、阿米卡星等耐藥率低的藥物，避免選用耐藥率高的藥物如慶大霉素、氨芐西林等。本研究中23株鴨大腸埃希菌對(duì)氟苯尼考的耐藥率為34.8%，而劉玉華等[3]對(duì)泰州地區(qū)分離的13株大腸埃希菌進(jìn)行耐藥性試驗(yàn)中，氟苯尼考的耐藥率為15.4%。在治療鴨大腸桿菌病之前，有條件的地方，盡量做藥敏試驗(yàn)，篩選敏感藥物進(jìn)行治療，提高治療效果。