張城，鄭建峰，李孝輝

(1.杭州正興牧業(yè)有限公司，浙江 杭州 311301； 2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)與微生物研究所，浙江 杭州 310021)

仔豬斷奶后生產(chǎn)效率下降、腹瀉率高等問題嚴(yán)重影響生豬生產(chǎn)效益，飼用高劑量抗生素及氧化鋅能提高仔豬生產(chǎn)性能，降低腹瀉率，但是長期使用會(huì)造成耐藥性及環(huán)境污染等負(fù)面影響，“無抗、低鋅”飼糧是畜牧業(yè)發(fā)展的趨勢(shì)。益生菌是一種可通過改變宿主腸道菌群而對(duì)動(dòng)物施加有利影響的活性微生物[1]，可改善宿主腸道功能，提高免疫[2-3]。酵母是益生菌的一種，被我國農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)為允許在飼料中添加的益生菌。大量研究表明，活性酵母能促進(jìn)動(dòng)物生產(chǎn)、提高胃腸道消化率、改善腸道菌群、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、提高抗應(yīng)激能力等，具有廣闊的研究和發(fā)展前景[4-5]。本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加活性酵母對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能，血液免疫、抗氧化力、炎癥等指標(biāo)的影響，為其在斷奶仔豬飼糧中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

活性酵母由浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)與微生物研究所提供的釀酒酵母，菌數(shù)為2×109個(gè)·g-1。斷奶仔豬由杭州正興牧業(yè)有限公司提供。

血清中免疫球蛋白A(immunoglobulin A，IgA)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G，IgG)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M，IgM)、炎癥因子白介素6(interleukin 6，IL-6)、白介素1β(interleukin 11β，IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factorα，TNF-α)ELISA試劑盒購自北京華英生物技術(shù)有限公司；過氧化氫酶(catalase, CAT)、總抗氧化力(total antioxidant capacity，T-AOC)、二胺氧化酶(diamine oxidase，DAO)、內(nèi)毒素(lipopolysaccharide，LPS)試劑盒購自南京建成生物科技有限公司。

1.2 處理設(shè)計(jì)及飼糧

選取48頭健康狀況良好的體質(zhì)量(7.42±0.85)kg仔豬(公母各半)，同一性別的仔豬按體質(zhì)量排序，從大到小分成4個(gè)區(qū)組，每個(gè)區(qū)組2欄共12頭仔豬(公母各半)。每個(gè)區(qū)組內(nèi)的2個(gè)欄將隨機(jī)分配到對(duì)照組和酵母組中。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，酵母組在基礎(chǔ)飼糧中添加0.3%活性酵母，試驗(yàn)期28 d。參考NRC(2012)7～11、11～25 kg仔豬營養(yǎng)需要配置基礎(chǔ)飼糧，其組成及營養(yǎng)水平見表1，按試驗(yàn)設(shè)計(jì)要求配制試驗(yàn)飼糧。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

注：1)預(yù)混料為每1 kg飼糧提供Cu 25 mg(以硫酸銅形式)，Zn 100 mg(以硫酸鋅形式)，ZnO 1 600 mg·kg-1(以氧化鋅形式)，F(xiàn)e 100 mg(以硫酸亞鐵形式)，Mn 30 mg(以硫酸錳形式)，Se 0.3 mg(以亞硒酸鈉形式)，10.4 mg(以碘酸鈣形式)，VA7 500 IU，VD3750 IU，VE 25 IU，VK32.0mg，VB11.875mg，VB23.75 mg，VB62.19 mg，VB12，0.025 mg，煙酸25 mg，泛酸15.6 mg，葉酸2.0 mg，生物素0.1 875 mg，金霉素75 mg，吉他霉素20 mg。營養(yǎng)水平含量為計(jì)算值。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)仔豬以重復(fù)為單位進(jìn)行圈養(yǎng)，采用群飼，自由采食和飲水。免疫消毒程序按豬場(chǎng)常規(guī)方法進(jìn)行。試驗(yàn)期觀察和記錄豬只健康狀況，發(fā)現(xiàn)死淘豬只后及時(shí)進(jìn)行結(jié)料并稱重。

1.4 樣品采集及測(cè)定

1.4.1 生長性能測(cè)定

以重復(fù)為單位記錄耗料量。分別于試驗(yàn)第0、14、28天仔豬空腹稱重，統(tǒng)計(jì)階段耗料量及總耗料量。以重復(fù)為單位分別計(jì)算1～14 d、15～28 d及全期(1～28 d)平均日增重、平均日采食量(ADFI)及料重比(F/G)。

1.4.2 腹瀉率測(cè)定

試驗(yàn)開始后，每天早晚2次記錄試驗(yàn)豬腹瀉頻數(shù)，每欄全期頻次數(shù)與每欄總頭次數(shù)之比即為該欄仔豬腹瀉率。

1.4.3 血清生化指標(biāo)測(cè)定

試驗(yàn)第28天稱重后，每重復(fù)隨機(jī)選擇2頭仔豬(公母各1頭)前腔靜脈采血。靜置血樣至析出血清，3 000 r·min-1離心10 min，分裝上清于Eppendorf管中，-20 ℃冰箱中保存，待測(cè)。ELISA法測(cè)定血清中IgA、IgG、IgM含量。鉬酸銨法、FRAP法、硫代巴比妥酸法分別測(cè)定血清中CAT、T-AOC、MDA含量。紫外比色法、鱟試劑法、酶比色法分別測(cè)定血清中DAO、LPS、MPO含量。ELISA法測(cè)定血清中炎癥因子IL-6、IL-1β、TNF-α含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2007進(jìn)行初步處理，用SPSS 17.0軟件進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。其中生長性能指標(biāo)采用以處理為固定因子、區(qū)組為隨機(jī)因子進(jìn)行一般線性模型分析，血液生化指標(biāo)進(jìn)行LSD單因素分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 活性酵母對(duì)仔豬生產(chǎn)性能及腹瀉率的影響

試驗(yàn)全期仔豬均較為活躍，精神狀態(tài)良好，采食及飲水情況均正常。生產(chǎn)性能指標(biāo)如表2所示，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)1～14 d、1～28 d，飼喂酵母能顯著提高仔豬體質(zhì)量、平均日增重(ADG)、平均日采食量，14～28 d平均日采食量顯著提高。對(duì)照組和酵母組對(duì)仔豬料重比及腹瀉率的影響未見顯著差異。

表2 活性酵母對(duì)仔豬生產(chǎn)性能及腹瀉率的影響

注：同行數(shù)據(jù)中肩標(biāo)字母表示差異顯著(P<0.05)，相同字母或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。表3～4同。

2.2 活性酵母對(duì)仔豬血清免疫及抗氧化指標(biāo)的影響

如表3所示，在免疫指標(biāo)方面，飼喂活性酵母較對(duì)照組顯著提高了血清IgA含量，但是IgM、IgG含量各組間差異不顯著。抗氧化指標(biāo)上，與對(duì)照組相比，飼喂活性酵母能顯著提高血清總抗氧化力，顯著降低血清MDA含量，血清中過氧化氫酶活性雖未見顯著差異，但有增加趨勢(shì)，增幅達(dá)27.8%(P=0.11)。

2.3 活性酵母對(duì)仔豬血清粘膜屏障及炎癥相關(guān)指標(biāo)的影響

如表4所示，與對(duì)照組相比，飼喂活性酵母能顯著降低血清MPO活性，但DAO及LPS含量未見顯著差異。在炎癥相關(guān)指標(biāo)上，飼喂活性酵母較對(duì)照組顯著降低了血清IL-1β含量，TNF-α含量也有降低趨勢(shì)(P=0.054)，降幅為12.5%，但活性酵母對(duì)IL-6含量未見顯著影響。

表3 活性酵母對(duì)仔豬血清免疫、抗氧化指標(biāo)的影響

表4 活性酵母對(duì)仔豬血清粘膜屏障及炎癥相關(guān)指標(biāo)的影響

3 討論

仔豬斷奶后幾周的生產(chǎn)性能對(duì)其全期生產(chǎn)表現(xiàn)有著至關(guān)重要的作用，活性酵母能夠在宿主腸道內(nèi)調(diào)節(jié)腸道菌群，其自身的酵母細(xì)胞壁、甘露寡糖等物質(zhì)還能吸附毒素，激活免疫，降低炎癥，對(duì)宿主生長起到積極作用[6-8]。羅世乾[9]研究表明，添加釀酒酵母或布拉迪酵母均能顯著提高仔豬末重、ADG、ADFI。陳生龍等[10]也發(fā)現(xiàn)，飼喂中等劑量(1×107、2×107g-1)酵母能顯著提高仔豬ADG和ADFI，但低劑量(0.5×107g-1)或高劑量(4×107g-1)酵母對(duì)生產(chǎn)性能的影響并不顯著。在新生仔豬中也發(fā)現(xiàn)，飼喂活酵母直至斷奶后，仔豬體質(zhì)量、ADFI及ADG較對(duì)照組均顯著提高[11]。本試驗(yàn)條件下，飼喂活性干酵母后仔豬ADG、ADFI均顯著提高，與之前研究結(jié)果一致，但F/G無顯著差異，這提示本試驗(yàn)中酵母是通過提高仔豬采食量來達(dá)到促生長作用，對(duì)飼料利用率影響并不明顯，與陳生龍等[10]、劉化偉等[12]的研究結(jié)果一致。

活性酵母被認(rèn)為可以吸附腸道毒素，減少有害菌吸附，對(duì)降低腹瀉率具有較好的效果[13-14]。本研究中對(duì)照組和酵母組腹瀉率均處于較低水平，未見顯著差異，這可能是因?yàn)樵囼?yàn)實(shí)施階段為6～7月份，氣溫在30 ℃左右且未出現(xiàn)明顯波動(dòng)，較適宜仔豬生長，所以所有仔豬腹瀉率均未見差異。

IgA、IgG、IgM是動(dòng)物機(jī)體重要的免疫球蛋白。IgM多見于免疫初期，持續(xù)時(shí)間較短；IgA為局部免疫主要抗體，主要由漿細(xì)胞分泌；IgG為體液免疫主要抗體。羅士乾[9]研究表明，酵母能顯著提高了IgM的含量，但對(duì)IgA、IgG無顯著影響。Trckova等[5]對(duì)仔豬進(jìn)行大腸桿菌攻毒后，飼喂活性酵母(5×107g-1)能顯著提高IgA含量。本研究中，飼喂酵母后血清IgA含量顯著增加，與之前研究一致，但I(xiàn)gM和IgG未見顯著差異，不同結(jié)果中的略微差異可能是由仔豬生理階段及所處的免疫階段不同造成的。

MDA間接反映機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度，過氧化氫酶和總抗氧化能力則是機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶，參與自由基的清除。本研究中飼喂酵母顯著降低了血清MDA含量，增加了血清總抗氧化能力，結(jié)果表明酵母具有一定的抗氧化功效。肖旭等[15]研究也發(fā)現(xiàn)的活性干酵母能顯著提高仔豬血清中SOD含量，降低MDA含量，與本研究基本一致。

仔豬斷奶應(yīng)激常會(huì)引起腸道功能紊亂，粘膜屏障破壞，炎癥加劇。MPO是中性粒細(xì)胞的功能標(biāo)志和激活標(biāo)志，常被作為監(jiān)測(cè)腸道炎癥及粘膜完整性的生物標(biāo)記物。TNF-α及IL-1β是炎癥反應(yīng)過程中重要的炎性介質(zhì)，其濃度升高提示體內(nèi)炎癥的增加。徐琴[16]研究表明，在致病性大腸桿菌攻毒仔豬中發(fā)現(xiàn)灌服100 mL活性酵母(1×109g-1)能顯著降低IL-6及豬MAP濃度，先天免疫Toll樣受體信號(hào)通路的關(guān)鍵基因表達(dá)顯著降低。在正常仔豬中，也發(fā)現(xiàn)類似結(jié)果，仔豬血清中抑炎因子IL-4、IL-10隨著酵母添加量的增加出現(xiàn)增長趨勢(shì)[10]。本試驗(yàn)中，飼喂0.3%酵母顯著降低了MPO及IL-1β含量，TNF-α也有降低趨勢(shì)，這提示雖然仔豬生活環(huán)境溫度較高，腹瀉未大量出現(xiàn)，但斷奶后仍因?yàn)轱暭Z等因素仔豬腸道造成應(yīng)激損傷，而0.3%添加量的酵母能降低仔豬體內(nèi)炎癥，提高粘膜功能。

綜上所述，在斷奶仔豬日糧中添加0.3%活性酵母能通過提高采食量來促進(jìn)仔豬生長，提高仔豬免疫功能及抗氧化力，降低體內(nèi)炎癥，在斷奶仔豬飼糧中有良好的應(yīng)用前景。