許艷茹,石 菊,展 月,李 敏,王雅儷,徐 建*

(1.吉林修正藥業(yè)新藥開發(fā)有限公司 吉林省中藥標準化關(guān)鍵工程技術(shù)重點實驗室,吉林 長春130012；2.修正藥業(yè)集團股份有限公司,吉林 通化134000)

麝香壯骨膏藥方源于《黃帝內(nèi)經(jīng)》,已經(jīng)有兩千多年的應(yīng)用歷史[1]。處方由麝香、薄荷腦、冰片等十七味藥材組成,具有鎮(zhèn)痛、消炎的功效,臨床用于風濕痛、關(guān)節(jié)痛等病癥的治療。皮膚外用藥的種類較多,主要包括硬膏劑、軟膏劑、貼劑、氣霧劑等劑型,但近年來外用中藥致敏的臨床事件時有發(fā)生。因此,在新藥臨床前安全性評價中,中藥刺激性、致敏性的研究備受關(guān)注[2-4]。本研究對麝香壯骨膏的皮膚刺激性及致敏性進行研究,為其臨床安全用藥提供實驗依據(jù)。

1 動物與試劑

1.1 動物

新西蘭種白兔,雌雄各半,體重(2.5±0.5)kg；豚鼠,雌雄兼有,體重(250±20)g,均由長春市億斯實驗動物技術(shù)有限責任公司提供。

1.2 藥物與試劑

麝香壯骨膏、陰性基質(zhì)貼均由修正藥業(yè)集團股份有限公司提供,批號：20170905、20170912。致敏對照藥：2,4-二硝基氯苯(批號：W5656,山東西亞化學股份有限公司)。

2 方法

2.1 皮膚刺激性實驗

2.1.1 單次給藥皮膚刺激性 取健康大白兔10只,雌雄各半,單籠飼養(yǎng),隨機分成兩組,即完整皮膚組和破損皮膚組,每組5只,應(yīng)用同體左右側(cè)自身對比法。各組大白兔于給藥前24 h將其背部脊柱兩側(cè)毛剪掉(避免使用化學脫毛,減少化學刺激),去毛面積約3 cm×3 cm。破損皮膚組給藥前將各兔背部去毛區(qū)用0#砂紙擦至皮膚表面出現(xiàn)小滲血點為度。兔背部脊柱左側(cè)為受試藥組,右側(cè)為陰性對照組,分別給予麝香壯骨膏和基質(zhì)對照物(2.5cm×2.5cm),貼敷后隨即用醫(yī)用膠帶纏繞固定,24h后去除藥物并用溫水清潔皮膚,分別于1、24、48、72 h用肉眼觀察并記錄用藥部位有無水腫和紅斑等刺激性現(xiàn)象。并按照表1標準進行評分,評價單次給藥皮膚刺激性強度。

2.1.2 多次給藥皮膚刺激性 分組及皮膚處理方法同單次給藥皮膚刺激性實驗。每日給藥1次,用醫(yī)用膠帶纏繞固定,保持6 h,連續(xù)給藥14 d。每日給藥前用肉眼觀察并記錄用藥部位有無水腫和紅斑等刺激性現(xiàn)象,并進行評分。停藥后分別于1、24、48、72h觀察皮膚的刺激反應(yīng)。評分及評價標準見表1、表2。

表1 皮膚刺激反應(yīng)評分標準

表2 皮膚刺激強度評價標準

2.2 過敏性實驗

取豚鼠30只,雌雄各半,隨機分為3組：受試藥組、陰性對照(基質(zhì))組、陽性對照組(1%DNCB),每組10只。實驗前先將豚鼠背部左側(cè)部位脫毛,面積約為3 cm×3 cm,用于致敏涂敷。Buehler試驗在第0、7和14天局部給藥以誘導,受試藥組給予麝香壯骨膏2.5 cm×2.5 cm,陰性對照組給予等面積基質(zhì)貼,陽性藥對照組給予1%2,4二硝基氯苯0.2 m L,貼敷于豚鼠左側(cè)脫毛區(qū)后用醫(yī)用膠帶纏繞固定,給藥6 h后去除藥物。在第27天將豚鼠背部右側(cè)部位脫毛,面積約為3 cm×3 cm,在第28天采用誘導給藥方法貼敷藥物6 h以局部激發(fā)。去除藥物觀察,并于24、48、72 h再次觀察皮膚過敏反應(yīng)情況。皮膚過敏反應(yīng)程度按表3、表4標準評分,并評價致敏程度,計算過敏反應(yīng)發(fā)生率。除皮膚局部過敏反應(yīng)外,還應(yīng)觀察豚鼠是否出現(xiàn)哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴重全身性過敏反應(yīng)。

表3 皮膚過敏反應(yīng)評分標準

表4 皮膚過敏性評價標準

2.3 數(shù)據(jù)處理

按照皮膚刺激反應(yīng)評分標準進行評分,反應(yīng)平均分值=(紅斑形成總分+水腫形成總分)/動物總數(shù),判斷皮膚刺激強度。按照皮膚過敏反應(yīng)評分標準進行評分,致敏率(%)=發(fā)生過敏動物數(shù)/合計動物數(shù)×100%。

3 結(jié)果

3.1 單次皮膚刺激性

家兔單次給藥對完整皮膚無明顯刺激性,破損皮膚在給藥后24 h有輕度刺激性,但在48h和72h后刺激性消失。結(jié)果見表5。

表5 家兔單次給藥皮膚刺激性評分

3.2 多次皮膚刺激性

多次連續(xù)給藥對家兔完整皮膚無明顯刺激性,對破損皮膚有輕度刺激性,個別出現(xiàn)勉強可見的輕度紅斑,但均在72 h內(nèi)消失,均未見色素沉著、出血點、皮膚粗糙或皮膚菲薄、水腫現(xiàn)象發(fā)生,按照評價標準判定為輕度刺激性。結(jié)果見表6、圖1。

表6 家兔多次給藥皮膚刺激性評分

3.3 過敏性實驗

在激發(fā)給藥后6～72 h內(nèi),受試藥組、陰性對照組豚鼠皮膚未見過敏現(xiàn)象,也未出現(xiàn)哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴重全身性過敏反應(yīng)。結(jié)果見表7、圖2。

表7 豚鼠皮膚過敏反應(yīng)評分

圖1 不同時間皮膚刺激性

圖2 過敏性實驗結(jié)果

4 討論

麝香壯骨膏作為復方外用制劑,其是否會引起皮膚的刺激和過敏反應(yīng)尚未見報道。為確保其安全性,根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的技術(shù)指導原則及文獻方法[5-8],本實驗研究了麝香壯骨膏對家兔的皮膚刺激性和豚鼠的皮膚過敏反應(yīng)。本品在給藥初期家兔破損皮膚肉眼可見輕度刺激性,藥物去除后癥狀逐漸消失,實驗中可見基質(zhì)制劑對兔破損皮膚的輕度刺激。豚鼠Buehler法致敏實驗[9-10]結(jié)果為陰性,表明本品不會引起豚鼠的皮膚過敏反應(yīng)。楊超等[11]進行了與本實驗相似的制劑對破損家兔皮膚的刺激性和過敏性研究,取得了相似的結(jié)果,分析原因可能與基質(zhì)輔料中殘留的水溶性蛋白質(zhì)、松香中的樹脂酸等因素有關(guān)。此外,該種外用制劑多會添加保濕劑、防腐劑等,亦會造成潛在的危害[12-13]。

本研究結(jié)果提示,麝香壯骨膏未見完整皮膚刺激性和過敏性反應(yīng),但破損皮膚應(yīng)避免使用橡膠膏劑,為其臨床安全使用提供了參考依據(jù)。