朱立娜 任苗 田磊 薄曉菲 周峻凱

北京生物制品研究所有限責任公司 北京 100176

1 資料與方法

白喉桿菌培養(yǎng)基，氨氮含量是制備的關鍵質(zhì)量標準，也是進行白喉桿菌培養(yǎng)過程中所涉及的主要氮源。本研究則以此為主要內(nèi)容，探究其培養(yǎng)基制備過程中的質(zhì)量控制標準，做出具體分析工作如下。

1.1 研究材料

磷酸氫二鈉來自北京益利精細化學品有限公司，無水氯化鈣和乳酸的選擇則為國藥集團化學股份有限公司所生產(chǎn)的，其中所應用的酵母浸液，胰酶牛肉消化液和麥芽糖稀等選擇北京生物制品研究所培養(yǎng)基室所提供，酵母浸出粉英國進口。而白喉的絮狀反應抗毒素標準品，由中國食品藥品檢定研究院所提供[1]。

1.2 研究方法

白喉桿菌培養(yǎng)基制備：稱取酸氫二鈉適量，保證稱取劑量準確性，將其酵母浸液和胰酶牛肉消化液進行混勻，并將15%氯化鈣溶液和乳酸進行應用，并將含量為20%的氫氧化鈉溶液進行調(diào)堿，實現(xiàn)對PH 值進行調(diào)節(jié)，將其調(diào)節(jié)到8．3 左右，加熱煮沸，加入酵母進出粉，然后將其制作成白喉桿菌培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基氨氮含量對白喉桿菌產(chǎn)毒的影響效果：在實際的操作過程中，分別制備氨氮含量≥1．8g/L 和＜1．8g/L 的白喉桿菌培養(yǎng)基，分別制備6 批，并將其應用在白喉桿菌大罐中進行培養(yǎng)，并將《中華人民共和國藥典》進行借鑒，主要選擇2015 年版，將其中的三部，類毒素絮狀單位，實現(xiàn)測定工作，主要是測定2 種配方培養(yǎng)基所培養(yǎng)收獲的白喉毒素絮狀單位，將其培養(yǎng)基的最適氨氮含量進行確定。

培養(yǎng)基氨氮含量和白喉桿菌產(chǎn)毒之間的相關性：根據(jù)最適培養(yǎng)基配方所確定的配比方案，制備10 批白喉桿菌培養(yǎng)基，根據(jù)公司的吸附白喉疫苗生產(chǎn)工藝，對白喉桿菌進行大罐培養(yǎng)，并注意對所收獲的白喉毒素絮狀單位進行監(jiān)測，對其系數(shù)進行計算，并注意對培養(yǎng)基氨氮含量和白喉桿菌的產(chǎn)毒相關關系進行分析[2]。

麥芽糖溶液配制：江米煮熟，并將麥芽攪碎，然后放置其中，進行攪勻處理，放置在溫度為55 攝氏度的環(huán)境條件下，實現(xiàn)糖化處理5 小時，然后在其中加入氯化鈣溶液和磷酸氫二鈉，在給予其過濾處理后，將其配制成麥芽糖稀。并將質(zhì)量檢測的操作細則進行應用，根據(jù)堿性酒石銅滴定法相關內(nèi)容，實現(xiàn)對麥芽糖稀濃度的檢測配制。

麥芽糖稀濃度和白喉桿菌產(chǎn)毒間的相關性分析：配制10 批濃度為15%-20%的麥芽糖溶液，在此基礎上，在白喉桿菌進行培養(yǎng)的過程中，加入大罐，完成大罐酸堿平衡，有效控制。更能夠保證，麥芽糖稀所提供的碳源和能量穩(wěn)定性。注意對所收獲的白喉素絮狀單位進行檢測和計算。和白喉桿菌產(chǎn)毒間的相關關系分析[3]。

2 結(jié)果

在以氨氮質(zhì)量濃度范圍為準的基礎上，對培養(yǎng)基進行大罐培養(yǎng)制備，其所收獲的白喉毒素，得出其所對應的平均絮狀單位為，氨氮含量≥1．8g/L． 291．83 Lf/ml 其中的白喉毒素絮狀單位均符合規(guī)定要求，其所對應的下罐率達到100%。其統(tǒng)計學下，白喉桿菌培養(yǎng)基的氨氮含量會對白喉桿菌產(chǎn)毒造成的影響，均存在統(tǒng)計學意義（P ＜0．05）。氨氮含量＜1．8g/L 平均氨氮濃度1．675 平均白喉絮狀單位169．17Lf/ml。氨氮含量≥1．8g/L 平均氨氮濃度2 平均白喉絮狀單位291．83Lf/ml P ＜0．05

3 討論

白喉桿菌培養(yǎng)基，從目前發(fā)展情況來看，白喉疫苗生產(chǎn)工藝中所對應的氨基酸，通常來自于胰酶牛肉消化液和酵母浸液中。在將其進行培養(yǎng)時，通常需要對初始培養(yǎng)基的氨氮進行監(jiān)控，從而保證自由氨基酸被保持在一個相對穩(wěn)定的范圍內(nèi)。氨氮含量是進行白喉桿菌培養(yǎng)基制備的關鍵質(zhì)量標準，也是進行白喉桿菌培養(yǎng)過程中所涉及的主要氮源。因此，需要加強制備中的注意事項，本研究結(jié)果顯示：在以氨氮質(zhì)量濃度范圍為準的基礎上，對培養(yǎng)基進行大罐培養(yǎng)制備，其所收獲的白喉毒素基本不變，得出其所對應的平均絮狀單位為291．83Lf/ml，其中的白喉毒素絮狀單位均符合規(guī)定要求，其所對應的下罐率達到100%。其統(tǒng)計學下，白喉桿菌培養(yǎng)基的氨氮含量會對白喉桿菌產(chǎn)毒造成的影響，均存在統(tǒng)計學意義（P ＜0．05）。

綜上所述，就白喉桿菌培養(yǎng)基來說，將其對應的氨氮控制在1．8-2．0g/L 時，收獲較高，將麥芽糖的溶液濃度進行有效控制，使其被維持在15%-20%，能夠有效控制大罐酸堿度平衡，更有效的控制氮源。