劉渝松 ，郭 亮 ，劉才英 ，李 蘭 ，馬善治 ，李 卿 ，葉承莉 ，文 巧 ，郭劍華 △

（1.重慶市中醫(yī)骨科醫(yī)院，重慶 400012； 2.重慶市中藥研究院，重慶 400065）

筋舒膠囊是全國名中醫(yī)郭劍華主任中醫(yī)師治療慢性軟組織損傷的經(jīng)驗(yàn)方筋舒湯改良劑型而成，具有舒筋活血、養(yǎng)血通絡(luò)、補(bǔ)肝益腎的作用，經(jīng)前期臨床應(yīng)用，對緩解軟組織腫脹、疼痛療效顯著。本研究中將湯劑改良為膠囊劑，在優(yōu)選制備工藝參數(shù)的基礎(chǔ)上，驗(yàn)證其對慢性軟組織損傷的抗炎作用，以期為筋舒膠囊的臨床應(yīng)用提供參考。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動物、試藥與儀器

動物：KM小鼠，SPF級，50只，雌雄各半，動物生產(chǎn)許可證號為 SCXK（渝）2017－0003，動物合格證號為0005271；SD 大鼠，SPF級，140只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號為SCXK（渝）2017－0003，動物合格證號分別為 0005274，0005286，0005300。均由重慶市中藥研究院實(shí)驗(yàn)動物研究所提供，分籠飼養(yǎng)，自由攝取自來水，定期更換墊料，室溫 20.4～24.5℃，相對濕度 41% ～58%；壓力37～43 Pa。本研究方案符合動物實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)原則。

試藥：筋舒膠囊提取物(重慶市中醫(yī)骨科醫(yī)院，批號為20171001）；醋酸地塞米松片（安徽金太陽生化藥業(yè)有限公司，批號為1603142）；云南白藥（云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號為ZKA1643）；二甲苯（重慶川東化工＜集團(tuán)＞有限公司，批號為20170301）；戊巴比妥鈉（Sigma公司，批號為908M031）。大小鼠維持飼料（北京科澳協(xié)力飼料有限公司，生產(chǎn)許可證為SCXK＜京＞2014－0010，批號為 17103213）。

儀器：R2000－3型電子計(jì)重計(jì)數(shù)秤（奧帝斯儀器＜常州＞有限公司）；BS224S型電子天平，BSA3202S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)公司)；YXQ－LS－50G型立式高溫高壓滅菌器（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；CLW－1020型純水機(jī)（重慶乾崍儀器有限公司）；DGF型電熱鼓風(fēng)干燥箱（重慶銀河試驗(yàn)儀器有限公司）；S.VS－1300U型凈化工作臺（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）；FASCO－5010BX型血流變快測儀（重慶大學(xué)維多生物工程研究所）；RM2235型輪轉(zhuǎn)切片機(jī)（德國徠卡儀器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響[1－2]

KM小鼠50只，雌雄各半，按體質(zhì)量分為5組，各10支，即空白對照組，醋酸地塞米松片組（4 mg／kg)，筋舒膠囊高、中、低劑量組（每 1 kg 體質(zhì)量 20.8，10.4，5.2 g生藥），每組10只。按組別給予相應(yīng)藥物，給藥體積均為每 1 kg體質(zhì)量20 mL，每日 1次，連續(xù)給藥5 d，空白對照組給予同體積的純化水。末次給藥后1 h，于小鼠右耳涂抹二甲苯每只0.02 mL，20 min后脫頸處死動物，打孔器打下動物左右耳，精密稱取耳片質(zhì)量，計(jì)算，耳腫脹度(g)＝右耳質(zhì)量－左耳質(zhì)量，耳腫脹抑制率(%)＝(對照組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度)／對照組平均腫脹度×100%。

1.2.2 對大鼠棉球肉芽腫的影響[3]

SD大鼠70只，雌雄各半，戊巴比妥鈉麻醉，在前肢腋窩部皮下植入2個滅菌棉球(每個20 mg)，按體質(zhì)量分為5組，各14只，即空白對照組，醋酸地塞米松片組（2 mg／kg），筋舒膠囊高、中、低劑量組（每 1 kg 體質(zhì)量10.4，5.2，2.6 g 生藥）。于植入棉球次日起按組別給予相應(yīng)藥物，給藥體積均為每1 kg體質(zhì)量10 mL，每日1次，連續(xù)給藥7 d，空白對照組給予同體積的純化水。末次給藥后1 h，處死動物，打開原切口，將棉球連同結(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，隨后置于70℃烘箱內(nèi)烘干并稱棉球干重，棉球干重減去棉球本身質(zhì)量即為肉芽腫質(zhì)量，計(jì)算，抑制率(%)＝(空白對照組平均肉芽腫質(zhì)量－給藥組平均肉芽腫質(zhì)量)／溶劑對照組平均肉芽腫質(zhì)量×100%。

1.2.3 對大鼠慢性軟組織損傷模型的影響[4－8]

SD大鼠70只，雌雄各半，選取10只動物（雌雄各5只）為空白對照組不造模，其余動物右側(cè)大腿部去毛，0.9%戊巴比妥鈉（約 45 mg／kg）腹腔注射麻醉，自制打擊器（將200 g砝碼置于PVC水管中，固定高度80 cm）自由落體在大腿中部外側(cè)擊打7次，造成大鼠大腿急性軟組織損傷，不作任何處理正常飼養(yǎng)，經(jīng)過15 d形成慢性軟組織損傷動物模型。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為5組，每組不少于10只，按組別給予相應(yīng)藥物，每日1次，連續(xù)7 d，空白對照組和模型組給予同體積的純化水。動物末次給藥后禁食，次日45 mg／kg麻醉后腹主動脈取血，腹主動脈采血約5 mL，分別加入肝素鈉抗凝管（3 mL）和EDTA抗凝管（2 mL），進(jìn)行血液流變學(xué)測定（HCT采用XT－2000i型全自動動物血液分析儀進(jìn)行測定）。組織病理學(xué)檢查，以打擊部位為中心，剪取創(chuàng)傷局部肌肉，放入10%中性福爾馬林溶液中，經(jīng)充分固定后，按常規(guī)取材，石蠟制片HE染色，樹膠封固，光鏡下觀察創(chuàng)傷局部組織和創(chuàng)傷性無菌性炎性反應(yīng)等病理表現(xiàn)。

2 結(jié)果

2.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

與空白對照組比較，醋酸地塞米松組耳腫度顯著降低（P ＜ 0.01），耳腫脹抑制率為 47.76% 。筋舒膠囊高、中劑量組對二甲苯致小鼠耳腫脹有明顯抑制作用（P ＜0.01），其耳腫脹抑制率分別為 54.51%和 32.87%。提示筋舒膠囊對二甲苯致小鼠耳腫脹急性炎癥模型有明顯抑制作用。結(jié)果見表1。

表1 各組二甲苯致小鼠耳腫脹度的比較（s，n＝10）

表1 各組二甲苯致小鼠耳腫脹度的比較（s，n＝10）

注：與空白對照組比較，*P ＜0.01。

組別空白對照組醋酸地塞米松片組筋舒膠囊 高劑量組中劑量組低劑量組劑量(每kg體質(zhì)量g生藥)抑制率（%）4 mg／kg 20.8 10.4 5.2腫脹度（ X ± s，g）0.028 ± 0.006 0.014 ± 0.002*0.012 ± 0.005*0.019 ± 0.006*0.023 ± 0.008 47.76 54.51 32.87 16.33

2.2 對大鼠棉球肉芽腫的影響

與空白對照組比較，醋酸地塞米松片組腫脹度顯著降低（P ＜ 0.01），抑制率為 77.39%；筋舒膠囊高、中劑量組明顯抑制大鼠棉球肉芽腫（P＜0.05），抑制率分別為18.61%和14.54%。提示筋舒膠囊對大鼠棉球肉芽增生有明顯抑制作用。結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠棉球肉芽腫質(zhì)量的比較（s，n＝14）

表2 各組大鼠棉球肉芽腫質(zhì)量的比較（s，n＝14）

注：與空白對照組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01。

組別空白對照組醋酸地塞米松片組筋舒膠囊 高劑量組中劑量組低劑量組劑量(每kg體質(zhì)量g生藥)抑制率（%）2 mg／kg 10.4 5.2 2.6肉芽腫（X ± s，mg）223.5 ± 30.0 50.5 ± 11.7**181.9 ± 36.8**191.0 ± 25.3*206.6 ± 48.4 77.39 18.61 14.54 7.58

2.3 對大鼠慢性軟組織損傷模型的影響

與模型組比較，云南白藥0.4 g／kg能明顯降低高切還原黏度和紅細(xì)胞剛性指數(shù)（P＜0.01）；筋舒膠囊高、中劑量組有降低高切全血黏度和高切還原黏度的作用趨勢，但未見顯著性差異。結(jié)果見表3。與空白對照組比較，筋舒膠囊高、中、低劑量組造模處肌肉病理表現(xiàn)與模型組比較有顯著性差異（P＜0.05），肌細(xì)胞和結(jié)締組織出血壞死伴顯微組織增生和炎性細(xì)胞浸潤。大鼠造模處組織病理學(xué)檢查見表4和圖1。

3 討論

慢性軟組織損傷是因疲勞性損傷、積累性損傷、隱蔽性損傷及急性軟組織損傷久治不愈所產(chǎn)生的一系列癥狀，也稱為陳傷或勞損。臨床急性軟組織損傷后超過2周以上未愈者即為慢性軟組織損傷，屬于中醫(yī)學(xué)“筋傷”范疇，是由于人體筋、骨、肌肉、脈絡(luò)受損，氣血瘀阻，損傷失治、遷延日久，“血虛”“血瘀”并存，從而導(dǎo)致“筋脈瘀滯而失于精血之濡養(yǎng)”，出現(xiàn)腫脹、疼痛、功能受限等癥狀，加之肝腎、氣血虛弱，感受風(fēng)寒濕邪，致絡(luò)脈痹阻，作腫作痛，甚則關(guān)節(jié)屈伸不利。全國名中醫(yī)郭劍華主任中醫(yī)師緊緊圍繞“血虛”“血瘀”，以及正虛邪實(shí)而擬定經(jīng)驗(yàn)方“筋舒湯”，治以舒筋活血、養(yǎng)血通絡(luò)、補(bǔ)肝益腎。

表3 各組慢性軟組織損傷模型大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的比較（s）

表3 各組慢性軟組織損傷模型大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的比較（s）

注：與模型組比較，*P ＜0.01。

組別空白對照組（n＝10）模型組（n＝12）云南白藥組（n＝12）筋舒膠囊 高劑量組（n＝12）中劑量組（n＝12）低劑量組（n＝11）劑量(每kg體質(zhì)量g生藥)全血黏度（s－1）1 0.4 10.4 5.2 2.6 200 4.38 ±0.35 4.75 ±0.37 4.32 ±0.45 4.43 ±0.29 4.57 ±0.34 4.77 ±0.97 11.12 ±0.69 11.06 ±0.35 11.00 ±0.41 11.23 ±0.43 11.04 ±0.46 11.29 ±1.17血漿黏度（mPas·s）1.33 ±0.10 1.35 ± 0.13 1.35 ±0.22 1.33 ±0.06 1.34 ± 0.09 1.27 ±0.40紅細(xì)胞壓積（L ／L）0.399 ±0.012 0.393 ± 0.039 0.390 ±0.015 0.391 ±0.024 0.399 ± 0.036 0.374 ±0.020高切還原黏度（s－1）8.53 ±0.57*9.51 ±0.63 8.49 ±0.69*9.14 ±0.69 9.15 ±0.71 9.56 ±1.88低切還原黏度（s－1）25.5±0.7 26.1 ± 1.8 25.5±2.5 27.3±1.6 25.8 ± 1.2 26.3±2.3聚集指數(shù)0.96 ±0.05 1.00 ± 0.05 1.00 ±0.28 1.02 ±0.06 0.99 ± 0.04 1.05 ±0.22紅細(xì)胞變形指數(shù)8.37 ±0.62 8.27 ± 0.66 8.03 ±0.63 8.45 ±0.43 8.24 ± 0.28 8.07 ±0.78剛性指數(shù)5.83 ±0.62 6.41 ±0.74 5.49 ±0.70*6.22 ±0.61 6.17 ± 0.38 5.99 ± 0.93

表4 各組慢性軟組織損傷模型大鼠造模處肌肉病理表現(xiàn)程度比較

圖1 各組慢性軟組織損傷模型大鼠造模處肌肉組織病理切片（×100）

現(xiàn)代藥理研究表明，方中君藥當(dāng)歸的有效成分可明顯抑制微炎癥[9]；臣藥骨碎補(bǔ)具有顯著抗炎止痛作用，其有效成分骨碎補(bǔ)總黃酮對組織胺、5－羥色胺引起的炎癥水腫也有抑制作用，能明顯改善炎癥的紅、腫、熱、痛癥狀，改善關(guān)節(jié)活動能力[10]；《神農(nóng)本草經(jīng)》《本草綱目》均將杜仲列為上品，其具有顯著的抗炎作用，其有效成分桃葉珊瑚苷是主要抗炎活性成分[11]；乳香提取物及三萜類成分對多種急慢性炎癥模型均有抗炎作用，且乳香炮制后抗炎作用顯著增強(qiáng)[12－13]；川牛膝、丹參有活血和改善微循環(huán)及促進(jìn)組織的修復(fù)與再生的作用[14－16]。故采用二甲苯致小鼠耳腫脹、大鼠棉球肉芽腫及慢性軟組織損傷大鼠模型等試驗(yàn)方法，考察筋舒膠囊的抗炎作用，并觀察創(chuàng)傷局部肌肉組織形態(tài)學(xué)。

本研究結(jié)果表明，筋舒膠囊高、中劑量組對二甲苯致小鼠耳腫脹、棉球肉芽腫均有明顯抑制作用，耳腫脹抑制率分別為54.51%和32.87%，肉芽腫抑制率分別為18.61%和14.54%；筋舒膠囊高、中劑量組有降低大鼠高切全血黏度和高切還原黏度的作用趨勢，造模顯著性的引起大鼠軟組織損傷部位肌細(xì)胞和結(jié)締組織出血壞死伴纖維組織增生和炎性細(xì)胞浸潤，筋舒膠囊各劑量組均能對模型引起的軟組織損傷有明顯改善和修復(fù)作用。

綜上所述，筋舒膠囊具有明顯的抗炎作用，可用于治療慢性軟組織損傷，質(zhì)量穩(wěn)定、可控，值得推廣。