姜思奇，蔡廣知，赫一鳴，貢濟(jì)宇

（長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長春 130117）

北細(xì)辛是馬兜鈴科植物北細(xì)辛的干燥根和根莖，習(xí)稱“遼細(xì)辛”。夏季果熟期或初秋采挖，除凈地上部分和泥沙，陰干[1]。細(xì)辛首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》：“味辛溫，主咳逆、頭痛、腦動、百節(jié)拘攣、風(fēng)濕、痹痛、死肌，久服明目、利九竅、輕身長年。”[2]?！睹t(yī)別錄》記載：“二月、八月采根，陰干?！爆F(xiàn)代藥理研究表明，細(xì)辛揮發(fā)油中的-細(xì)辛醚能松弛組胺、乙酰膽堿所致豚鼠離體氣管平滑肌的痙攣，呈量效關(guān)系[3]；同時，細(xì)辛具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、強(qiáng)心、調(diào)壓、抗菌、抗病毒、抗過敏、抗衰老等作用，臨床可用于慢性支氣管炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、脈管炎、椎間盤突出、肩周炎、鼓膜炎、過敏性鼻炎、耳聾、牙痛、口腔潰瘍、淚囊炎、弱視、痛經(jīng)、陽痿等疾病的治療[4-7]。關(guān)于細(xì)辛炮制工藝，2015年版《中國藥典》中將細(xì)辛藥材除去雜質(zhì)，噴淋清水，稍潤，切段，陰干，制成飲片，但未有具體的數(shù)據(jù)描述。本試驗(yàn)通過對北細(xì)辛藥材進(jìn)行炮制，結(jié)合藥材本身的性質(zhì)，將藥材潤洗和干燥的時間作為考察因素，以揮發(fā)油、浸出物、含水量、馬兜鈴酸I及細(xì)辛脂素的含量為指標(biāo)，在考察炮制工藝對飲片質(zhì)量影響的同時，選擇合理的工藝流程及參數(shù)，在保證飲片質(zhì)量的同時，考察及優(yōu)選工藝及參數(shù)，以減少馬兜鈴酸I 的含量，為規(guī)范飲片生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2030 高效液相色譜儀（株式會社島津制作所）；XS105 分析天平、AL204 電子天平（梅特勒－托利多儀器有限公司）；KQ-3200DB數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；水浴鍋（鞏義市英峪予華儀器廠）；色譜填充柱：TC-C1（84.6 mm×250 mm，5m）（大連依利特有限公司）。

1.2 試藥

北細(xì)辛藥材產(chǎn)地為吉林省靖宇縣，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室蔡廣知副教授鑒定為馬兜鈴科植物北細(xì)辛〔Asarum heterotropoides Fr.Schmidt var.mandshuricum（Maxim.）Kitag.〕的干燥根和根莖。

馬兜鈴酸I 對照品（批號：110746-201611，含量：98.9%）、細(xì)辛脂素對照品（批號：111889-201203，含量：99.1%）（中國食品藥品檢定研究院），乙腈、磷酸均為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 飲片的炮制工藝

2.1.1 潤制 將藥材倒至揀選臺上，手工去除泥塊、非藥用部位及霉變藥材，凈選藥材稱量，飲用流動水水潤，潤藥時間為0 min、5 min、10 min、15 min、20 min。潤藥結(jié)束后，將藥材制成1 cm 的段，稱量，備用。

2.1.2 干燥方式及時間 陰干：在室溫24.6 ℃的環(huán)境下，將待干燥的藥材鋪在烘盤中，厚度為1～2 cm，分別干燥4 h、6 h、12 h、24 h、36 h，1 h 翻動和上、下竄盤1次，測定藥材含水量變化，將含水量小于10.0%的藥材備用。

烘干：將待干燥的藥材鋪在烘盤中，厚度為1～2cm；烘干溫度為25 ℃，分別干燥1 h、3 h、5 h、8 h 和10 h，1 h翻動和上、下竄盤1 次，測定藥材含水量變化，將含水量小于10.0%的藥材備用。

2.1.3 干燥溫度 將待干燥的藥材鋪在烘盤中，厚度為1～2 cm；設(shè)定烘干溫度分別為25 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃和45 ℃，干燥8 h，測定藥材中揮發(fā)油含量變化。

2.2 飲片的減毒工藝

2.2.1 潤制 取凈選合格的藥材，用水浸泡，浸泡時間為0 h、12 h、24 h、36 h、48 h，不能傷水。

2.2.2 陰干 在室溫24.6 ℃條件下，設(shè)定干燥時間為12 h、24 h、36 h、48 h 和60 h。測定藥材含水量變化，將含水量小于10.0%的藥材備用。

2.3 細(xì)辛脂素與馬兜鈴酸I 含量測定

參考宋雙紅等[8]報道的方法，同時測定藥材中馬兜鈴酸I 與細(xì)辛脂素含量。

2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱定馬兜鈴酸I對照品10.30 mg 和細(xì)辛脂素對照品15.35 mg，分別置于50 mL 和5 mL 量瓶中，甲醇溶解并定容，得對照品儲備液。分別量取適量儲備液于5 mL 量瓶中，制備成細(xì)辛脂素51.75g/mL、馬兜鈴酸I15.30g/mL的混合對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備 精密稱定北細(xì)辛樣品粉末0.5 g（過80 目篩），置于50 mL 具塞錐形瓶中，精確加入70%甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理（500 W，40 kHz）45 min，取出并冷卻，再稱定并補(bǔ)足損失的重量。0.22m 濾膜過濾后，即得供試品溶液。

2.3.3 色譜條件 色譜柱：C1（8250 mm×4.6 mm，5m）；柱溫：35 ℃；檢測波長：260 nm；流動相：乙腈（A）-0.05%磷酸水（B），梯度洗脫（0～20 min 30%→45%A，20～30 min 45%A，30～35 min 45%→55%A，35～45 min 55%→75%A）。對照品及樣品色譜圖見圖1、圖2。

圖1 對照品色譜圖Fig.1 The reference chromatogram of geniposide

圖2 供試品色譜圖Fig.2 The sample chromatogram

2.3.4 線性關(guān)系考察 取馬兜鈴酸I 儲備液，精確稀釋至0.1g/mL、0.5g/mL、1.0g/mL、3.0g/mL、6.0g/mL、9.0g/mL、15.0g/mL，分別進(jìn)樣10L，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=51 205X 2 069.8（r=0.999 8）。結(jié)果顯示，馬兜鈴酸I 在0.1～15.0g/mL 之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

取細(xì)辛脂素儲備液，精確稀釋至0.1mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL、2.5mg/mL、3.0mg/mL。分別進(jìn)樣10L，以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=15 281X 12 905（r=0.999 7）。結(jié)果顯示，細(xì)辛脂素在0.1～3.0 mg/mL 之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.6 重復(fù)性考察 按照“2.3.2”項(xiàng)下方法，制備5 份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣，測定細(xì)辛脂素與馬兜鈴酸I的RSD 值分別為1.23%、2.19%，表明重復(fù)性良好。

2.3.7 穩(wěn)定性考察 分別取放置0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h 的同一供試品溶液，按照“2.3.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣，計(jì)算峰面積。結(jié)果顯示，RSD 值為2.53%，表明樣品穩(wěn)定性良好。

2.3.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱定已知含量的北細(xì)辛樣品6 份，分別精密加入馬兜鈴酸I、細(xì)辛脂素標(biāo)品（馬兜鈴酸I0.206 mg/mL、細(xì)辛脂素3.07 mg/mL）24L 和650L，按照“2.3.2”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，“2.3.3”項(xiàng)色譜條件下測定峰面積，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1、表2。

表1 馬兜鈴酸I加樣回收率結(jié)果Table 1 Results of recovery tests for aristolochic acidⅠ

表2 細(xì)辛脂素加樣回收率結(jié)果Table 2 Results of recovery tests for asarinin

2.3.9 含量測定 將各實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下的樣品按照“2.3.2”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，在“2.3.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，以原藥材的含量為100%，計(jì)算各樣品中馬兜鈴酸I 與細(xì)辛脂素的減少率。結(jié)果見表3、表4、圖3、圖4。

表3 馬兜鈴酸I的含量Table 3 Aristolochic acid I content

圖3 潤洗、浸泡時間與馬兜鈴酸I 減少率關(guān)系Fig.3 Relationship between rinse,soaking time and aristolochic acid I reduction rate

圖4 潤洗、浸泡時間對細(xì)辛脂素的增加/減少率Fig.4 Increase/decrease rate of ascorbate during rinsing and soaking time

表4 細(xì)辛脂素的含量Table 4 Ascorbate content

2.4 水分測定

分別取各干燥時間項(xiàng)下北細(xì)辛樣品，按照2015年版《中國藥典》水分測定法測定，計(jì)算含水率，結(jié)果見表5、圖5。

表5 干燥時間與含水率Table 5 Drying time and moisture content

圖5 干燥時間與含水率關(guān)系Fig.5 Drying time and water content diagram

2.5 揮發(fā)油測定

分別取各溫度項(xiàng)下北細(xì)辛樣品，按照2015年版《中國藥典》揮發(fā)油測定法測定，計(jì)算揮發(fā)油含量，結(jié)果見表6、圖6。

表6 干燥溫度與揮發(fā)油含量Table 6 Drying temperature and volatile oil content

圖6 溫度與揮發(fā)油含量關(guān)系Fig.6 Relationship between drying temperature and volatile oil content

2.6 浸出物測定

分別取各實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下北細(xì)辛樣品，熱浸法測定，用乙醇作溶劑，以原藥材浸出物含量為100%，計(jì)算各樣品浸出物的減少率，結(jié)果見表7，圖7。

表7 浸出物的含量Table 7 Leachate content

圖7 潤洗、浸泡時間對浸出物的減少率Fig.7 Relationship between washing,soaking time and rate of change of extract

3 結(jié)論與討論

經(jīng)研究可得，將北細(xì)辛藥材經(jīng)過5min 潤洗、24.6℃陰干24 h 或5 min 潤洗、25.0～35.0 ℃8 h 烘干，即可得到符合要求的北細(xì)辛飲片；將北細(xì)辛藥材的潤洗時間增加至48 h，24.6 ℃陰干48 h，可將有毒物質(zhì)馬兜鈴酸I由9.87g/g 降到7.99g/g，也將醇溶性浸出物的含量減少14.60%～31.23%。比較陰干和烘干兩種干燥方式數(shù)據(jù)顯示，烘干更具實(shí)用性，溫度越高時間越短，且在不影響北細(xì)辛揮發(fā)油含量的情況下，溫度最高可設(shè)為35 ℃；但在實(shí)際生產(chǎn)中，烘干的方式并不能適應(yīng)于大批量干燥，因此，可根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際恰當(dāng)選擇。另外，北細(xì)辛原藥材經(jīng)0～20 min 的潤洗過程中，馬兜鈴酸I 及醇溶性浸出物的含量并沒有顯著性變化，在整個過程中各實(shí)驗(yàn)因素對細(xì)辛脂素的含量沒有顯著性影響。

對于北細(xì)辛飲片的炮制操作，嚴(yán)建業(yè)等[9]對細(xì)辛進(jìn)行了鹽制、炒焦、米泔水制、堿制、甘草制、醋制、姜制、酒制、堿醋制及蜜制等手段對北細(xì)辛進(jìn)行減毒炮制，但這些炮制品并不常用。本試驗(yàn)研究的炮制工藝在實(shí)際生產(chǎn)中更具實(shí)用性，通過調(diào)整炮制參數(shù)也可對減毒工藝進(jìn)行改良；但此過程對于藥材中其他未知的水溶性成分有無影響，還有待下一步研究。