宮慶友，陳燕紅，龔衍熙，陳川雁

（珠海市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展中心，廣東 珠海 519075）

【研究意義】甜玉米（Zea maysL.saccharata sturt）是一種果菜兼用型玉米，在乳熟期采收后可直接食用鮮苞籽粒，長期食用有助于預(yù)防心血管壁硬化［1-3］。隨著我國居民飲食習(xí)慣的改變，甜玉米市場需求量逐年增加，極大地推動了甜玉米育種的發(fā)展［4］。根據(jù)基因型的差異，甜玉米可分為多基因突變的甜玉米與單基因突變的普甜玉米。甜玉米主要由sh1、sh2、bt1、bt2及部分雙隱性基因控制。SH是凹陷胚乳基因，該基因突變后（sh1、sh2）可大大減少胚乳中淀粉的含量，以至于成熟時子粒表現(xiàn)為凹陷胚乳［5-7］；BT是甜脆基因，其作用與SH基因基本相同，減少胚乳淀粉的含量而不積累水溶性多糖（water soluble polysaccharide, WSP），只增加還原糖和蔗糖的含量［8-9］。雖然甜玉米的可溶性糖約為15%～30%［10］，是普通玉米的7～8倍，但甜玉米的水溶性多糖含量較低且果皮較厚，口感方面甜脆特性明顯但不糯多渣，因此提高品質(zhì)特性是甜玉米遺傳改良工作的重要目標(biāo)［11］。

【前人研究進(jìn)展】我國甜玉米育種起步晚，但發(fā)展較快，所育成的品種基本能滿足國內(nèi)生產(chǎn)需要。但是與國外相比，國內(nèi)甜玉米品種果皮偏厚、糖分下降快、品種類型單一等問題較為突出，主要原因是我國育種工作起步晚，育種資源匱乏［12-14］。因此，現(xiàn)階段的甜玉米育種工作重心首先是選育品質(zhì)優(yōu)良的自交系，改善甜玉米品種的品質(zhì)；其次是豐富育種資源，積極引進(jìn)和創(chuàng)制綜合性狀優(yōu)良的育種材料［15］。甜玉米自交系選育的主要參考標(biāo)準(zhǔn)是高配合力、強雜種優(yōu)勢，尤其是甜玉米的品質(zhì)性狀配合力［16］。大部分?jǐn)?shù)量性狀的加性和顯性基因效應(yīng)共同決定著甜玉米品質(zhì)性狀的配合力表現(xiàn)，可根據(jù)親本間數(shù)量性狀的綜合遺傳差異預(yù)測甜玉米雜交種一般配合力的表現(xiàn)，進(jìn)而估算出目標(biāo)性狀特殊配合力。相關(guān)的甜度配合力研究表明甜型玉米可溶性總糖性狀同時受加性基因和非加性基因以及細(xì)胞質(zhì)基因的共同調(diào)控；可溶性總糖性狀的一般配合力在各親本間存在顯著差異，可有效反映不同組合間雜種優(yōu)勢的強弱，為選擇親本提供參考依據(jù)［17-18］。

【本研究切入點】 當(dāng)前我國甜玉米育種基礎(chǔ)研究較為薄弱，特別是雜種優(yōu)勢模式和品質(zhì)性狀的配合力研究仍有待提高。本研究以此為突破點，利用珠海市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展中心玉米育種課題組新選育的13個甜玉米自交系做試驗材料，按照Griffing方法Ⅳ組配雙列雜交，共得到78個雜交組合。分析了11個經(jīng)濟(jì)、品質(zhì)、農(nóng)藝性狀的配合力、遺傳力及性狀之間的相關(guān)關(guān)系，并初步探索根據(jù)特殊配合力對甜玉米自交系進(jìn)行雜種優(yōu)勢群的劃分?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究通過對參試自交系的配合力情況的分析，為后續(xù)科學(xué)合理的使用甜玉米自交系提供理論依據(jù)；初步探索甜玉米自交系雜種優(yōu)勢模式的劃分，為甜玉米育種提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

本研究2018年春季以珠海市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展中心玉米育種課題組選育的13個甜玉米自交系（B1～B13）為親本材料，13個自交系之間在親本來源、農(nóng)藝性狀和品質(zhì)特性等方面均存在較大差異。

1.2 試驗方法

根據(jù)Griffing方法Ⅳ［19］組配雜交組合，得到78個甜玉米雜交組合（表1）。2018年秋季在珠海市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展中心梅溪基地種植，按照雙列雜交組合完全隨機區(qū)組播種，分2行種植，每行13株，3次重復(fù)，小區(qū)面積4 m× 0.65 m。小區(qū)內(nèi)選一行進(jìn)行人工授粉后用于取樣作品質(zhì)分析，分別于授粉后16、18、20、22、24 d取果穗測定果皮厚度和可溶性總糖；另一行作為測產(chǎn)對照。每個小區(qū)選取連續(xù)5株進(jìn)行株高、穗位高、莖粗等農(nóng)藝性狀調(diào)查，果穗采收后測量穗長、穗粗、行粒數(shù)、穗行數(shù)、禿尖和百粒重等穗部性狀。

表1 Griffing方法Ⅳ雙列雜交組合Table 1 Method Ⅳ for Griffing diallel cross

1.3 測定項目及方法

1.3.1 甜玉米單株青穗產(chǎn)量與籽粒果皮厚度測定

每個小區(qū)測產(chǎn)行內(nèi)選取中間連續(xù)10株采收青苞，去穗柄及外部2層苞葉后稱重，取平均值作為單株鮮苞產(chǎn)量進(jìn)行分析。取單株果穗中部10粒籽粒測定果皮厚度，鑷子和刀片剖取籽粒頂端果皮，于體積比為3∶1的甘油-水混合溶液中浸泡24 h，取出晾干24 h。手術(shù)刀片將果皮切成薄片，顯微鏡下測量果皮厚度。每個籽粒的果皮測3次，取所有籽粒測量平均值作為單株果皮厚度觀察值［20］。

1.3.2 甜玉米籽?？扇苄钥偺堑臏y定 從上述測

定完果皮厚度的果穗，取剩余籽粒進(jìn)行可溶性總糖的測定。新鮮籽粒置于干燥箱內(nèi)105 ℃殺青，80 ℃烘干至恒重，然后用磨粉機粉碎，秤取0.1 g粉末，采用蒽酮比色測定法測定玉米籽粒的可溶性總糖，每個果穗測3次重復(fù)，取平均值作為該樣品的觀察值［21-22］。

1.3.3 雜種優(yōu)勢群的劃分原理和方法 根據(jù)群間雜種優(yōu)勢高于群內(nèi)雜種優(yōu)勢的原則，即不同優(yōu)勢群的親本間特殊配合力高，而同一優(yōu)勢群的親本間特殊配合力要低。本試驗以此為原理，依據(jù)單株產(chǎn)量、果皮厚度以及可溶性總糖的特殊配合力表現(xiàn)值，對13個甜玉米自交系進(jìn)行雜種優(yōu)勢群的初步劃分。

2 結(jié)果與分析

2.1 甜玉米品質(zhì)測定最佳時期的確定

圖1 甜玉米自交系籽粒發(fā)育中果皮厚度、百粒重、可溶性總糖、含水率變化Fig. 1 Changes of pericarp thickness,100-grain weight, soluble sugar and water content in sweet corn in bred lines

甜玉米籽粒可溶性總糖含量最高時為最佳采收期。首先對13個自交系授粉后16～24 d測定果皮厚度、可溶性糖與百粒重，每隔2 d測1次，以平均值繪制動態(tài)變化曲線，見圖1。該結(jié)果表明隨著籽粒灌漿發(fā)育，授粉后16 d果皮厚度與可溶性總糖均逐漸上升；授粉后20 d可溶性總糖達(dá)到最大值，隨后逐漸降低直至籽粒發(fā)育成熟；果皮厚度在授粉后20～24 d仍繼續(xù)增加；百粒重在授粉后18～22 d增長速度最快，授粉后22～24 d增長速度逐漸降低；籽粒授粉后16～24 d灌漿發(fā)育期間，干物質(zhì)不斷積累增多，相應(yīng)的水分含量逐漸降低。總體來看，甜玉米在授粉后20～22 d可溶性總糖含量達(dá)到最高，果皮厚度仍在增加但生長速率放緩，百粒重基本趨于穩(wěn)定，而可溶性總糖達(dá)到最高時是測定籽粒品質(zhì)的最佳時期，因此該時期是果穗采收的最佳時期。

2.2 雜交組合間各性狀及配合力方差分析

根據(jù)試驗設(shè)計，對雜交組合各農(nóng)藝性狀進(jìn)行方差分析。結(jié)果（圖2）顯示，除莖粗外，雜交組合其余各性狀間差異均達(dá)到極顯著水平，表明莖粗在不同基因型的親本雜交組合間差異不顯著，而其他性狀可進(jìn)行后續(xù)配合力分析。

圖2 各農(nóng)藝性狀方差分析結(jié)果Fig. 2 Variance analysis result of the main agronomic characters

表2 配合力方差分析Table 2 Variance analysis of combining ability

采用Griffing方法Ⅳ對親本間的雜交組合進(jìn)行配合力方差分析，結(jié)果（表2）顯示，所測定的各農(nóng)藝性狀一般配合力效應(yīng)和特殊配合力效應(yīng)均達(dá)1%顯著水平，表明本試驗自交系間各個性狀都存在加性遺傳和非加性遺傳。一般配合力均方與特殊配合力均方的比值表明，性狀間的差異較大，導(dǎo)致各性狀的加性遺傳均方都大于非加性遺傳均方，其中株高、穗位高、穗長、禿尖、單株產(chǎn)量等性狀的加性遺傳均方為非加性遺傳均方的10倍以上，而果皮厚度、可溶性總糖的加性及非加性遺傳均方之間差異較小。

2.3 一般配合力與特殊配合力效應(yīng)分析

2.3.1 一般配合力效應(yīng)分析 不同自交系同一性狀之間的一般配合力效應(yīng)值有很大差異，如表3所示，單株產(chǎn)量的GCA效應(yīng)值以B2最高（38.14）、顯著高于其他自交系，其次為B11（33.36）、B10（30.33）、B6（14.12），這4個自交系可用作高產(chǎn)型甜玉米的親本。另外，果皮厚度的GCA效應(yīng)值呈負(fù)向極顯著的自交系由低到高依次為B12（-4.94）、B13（-2.80）、B4（-1.71）、B3（-1.32）、B6（-1.27）、B8（-0.61），可溶性總糖的GCA效應(yīng)值呈正向極顯著的自交系由高到低依次為B6（6.84）、B5（4.28）、B11（1.97）、B10（1.67）、B13（0.50）、B1（0.39），雜交配組需兼顧果皮厚度和甜度兩個性狀，因此B6、B13屬于高甜、薄皮的優(yōu)質(zhì)型甜玉米自交系。根據(jù)經(jīng)濟(jì)性狀表現(xiàn)，B10的穗粗、穗行數(shù)、穗長、行粒數(shù)和百粒重均達(dá)到正向極顯著水平，禿尖達(dá)到負(fù)向極顯著水平，用作親本有助于增加產(chǎn)量，雜種后代無禿尖、果穗外形美觀，具有較高經(jīng)濟(jì)價值；B1、B4、B5、B6、B7在株高和穗位高兩個性狀上均呈負(fù)向極顯著水平，與其他親本雜交后可使F1株高和穗位高下降。綜合以上各性狀的GCA效應(yīng)值可知，B6優(yōu)于其他自交系，其單株產(chǎn)量達(dá)到極顯著差異水平，可溶性總糖效應(yīng)值最高，果皮厚度達(dá)到負(fù)向極顯著差異，株型優(yōu)，屬于高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)型甜玉米自交系。

2.3.2 特殊配合力效應(yīng)分析 對各個性狀的特殊配合力（SCA）效應(yīng)值進(jìn)行分析，由表4可知，本試驗78個組合中，單株產(chǎn)量SCA效應(yīng)值變異范圍為-51.96～33.57，達(dá)到正向顯著或極顯著的雜交組合有35個、占44.9 %，其中SCA效應(yīng)值最高的組合為B2×B10（33.573），其次從高到低依次為B3×B6（26.83）、B4×B11（25.32）、B2×B8（24.33）、B1×B4（24.48）；單株產(chǎn)量居前5名的組合依次為B2×B10、B10×B11、B2×B6、B7×B10、B4×B11，特殊配合力較高的雜交組合B2×B8、B3×B6的單株產(chǎn)量分別居第6位和第9位?？梢奡CA效應(yīng)值與單株產(chǎn)量排名不太一致，但SCA效應(yīng)值高的單株產(chǎn)量一般也較高，如B2、B10、B11、B6對應(yīng)的雜交組合的SCA效應(yīng)值均較高。

表3 各自交系農(nóng)藝性狀一般配合力效應(yīng)值Table 3 General combining ability of agronomic characters in each inbred line

果皮厚度SCA效應(yīng)值變異范圍為-10.08～13.17，在78個組合中達(dá)到負(fù)向顯著或極顯著的有32個、占41%，其中SCA效應(yīng)值最低的5個組合由低到高依次為B7×B10（-10.08）、B9×B11（-9.73）、B3×B9（-8.59）、B1×B2（-8.12）、 B1×B9（-8.04）；果皮厚度實測值最低的5個組合依次為B6×B12、B4×B6、B7×B10、B5×B12、B2×B12?？梢姽ず穸鹊奶厥馀浜狭εc果厚度的實測值不太一致，但特殊配合力低的組合果皮均較薄。

可溶性總糖SCA效應(yīng)值變異范圍為-13.11～12.85，在78個組合中達(dá)到正向顯著或極顯著的有42個、占53.8 %，其中SCA效應(yīng)值最高的5個組合從高到低依次為B7×B9（12.85）、B7×B13（11.18）、B3×B10（10.94）、B1×B6（8.03）、B3×B12（8.02）。可見，特殊配合力較高的組合，其可溶性糖的實測值也較高。

綜上可知，經(jīng)濟(jì)性狀特殊配合力綜合表現(xiàn)較好的組合有 B3×B6、B2×B3、B5×B11、B9×B4，該類組合的單株產(chǎn)量SCA值均達(dá)到極顯著水平，可見經(jīng)濟(jì)性狀與產(chǎn)量相關(guān)性較大；從株高和穗位高的SCA效應(yīng)值來看，特殊配合力較高的組合B10×B13、B3×B6、B9×B12、B4×B11、B3×B7中， 僅 B10×B13的 株 高和穗位高偏高，其他組合高度適宜，適合大田栽培。

表4 雜交組合特殊配合力效應(yīng)值表4 Special combining ability of hybrid combinantion

（續(xù)表4）

2.4 性狀遺傳力分析

遺傳力對雜交育種方案制定及提高子代選擇效果有重要的指導(dǎo)作用，本試驗根據(jù)Griffing方法Ⅳ（模型Ⅱ）對親本間各農(nóng)藝性狀的遺傳力進(jìn)行估算。各性狀廣義遺傳力的大小依次為株高＞穗位高＞可溶性總糖＞百粒重＞果皮厚度 ＞單株產(chǎn)量＞禿尖＞穗長＞行粒數(shù)＞穗粗＞穗行數(shù)。由表5可知，株高、穗位高、單株產(chǎn)量和穗長的廣義遺傳力和狹義遺傳力均較高，其廣義遺傳力分別為95.04%、84.45%、75.14%和65.59%，表明這些性狀受加性基因控制，且遺傳率高，能穩(wěn)定地遺傳給子代，可以在早代進(jìn)行選擇；可溶性總糖、百粒重、果皮厚度、禿尖和行粒數(shù)等性狀的廣義遺傳力均較高，分別為80.42%、79.45%、76.12%、70.92%、59.47%，但狹義遺傳力均較低，分別為16.50%、29.40%、24.21%、48.77%、23.81%，說明這些性狀主要受非加性基因的控制，在中早期選擇是有效的；穗粗、穗行數(shù)的廣義遺傳力和狹義遺傳力均較低，表明這些性狀受環(huán)境的影響很大，選擇的效率低。

表5 各性狀遺傳力參數(shù)估計值Table 4 Heretability estimate value of each character

2.5 雜種優(yōu)勢群的劃分

根據(jù)群間產(chǎn)量高于群內(nèi)產(chǎn)量的雜種優(yōu)勢，對13個甜玉米自交系進(jìn)行雜種優(yōu)勢群劃分，78個組合中，以B2×B10產(chǎn)量最高，其特殊配合力值最高為33.57，將B2和B10設(shè)定為不同的雜種優(yōu)勢群，在此基礎(chǔ)上劃分優(yōu)勢群：B2與B11、B12、B1雜交的SCA效應(yīng)值均很低，分別為-51.96、-30.21、-15.59，因此劃分為雜種優(yōu)勢群A；B10與 B5、B13、B8、B6雜交的SCA效應(yīng)值分別為-5.82、-23.7、-17.3、-25.74，因而被歸為雜種優(yōu)勢群B；由于B7×B2的SCA效應(yīng)值為1.38，B7×B10的SCA效應(yīng)值為15.01，B7×B3的SCA效應(yīng)值為-15.75，B7×B4的SCA效應(yīng)值為-18.02，B3、B4和B7歸為群C；B9與B2、B10雜交的SCA效應(yīng)值均較高，分別為12.66和4.63，且B9與A群、B群、C群其他自交系的SCA效應(yīng)值有高有低，故將其歸為優(yōu)勢群D。

根據(jù)果皮厚度的測量值進(jìn)行劃分，自交系B1、B5、B10被歸為雜種優(yōu)勢群P1；B7、B6、B11、B13歸為群 P2；B4、B2、B3、B9歸為群P3；B8、B12與雜種優(yōu)勢群P1、P2、P3中各自交系雜交的SCA效應(yīng)值有高有低，故將兩者單獨歸為群P4。

此外，根據(jù)可溶性總糖含量進(jìn)行劃分，B7×B2、B7×B3、B7×B6的SCA效應(yīng)值較低，分別為-4.80、-5.01、-13.11，因此將B7、B2、B3、B6歸為雜種優(yōu)勢群T1；B9×B5（-10.71）、B9×B11（-7.83）的SCA效應(yīng)值較低，歸為群T2群；B13×B7（11.18）、B13×B9（3.98） 的 SCA 效應(yīng)值均較高，且B13×B12（-12.14）、B13×B4（-5.45）、B12×B8（-10.54）的SCA效應(yīng)值較低，將其歸為群 T3；B10×B7、B10×B9、B1×B10的SCA效應(yīng)值均很低，分別為-7.79、-9.36、-10.481，因此B10、B1歸為群T4。

綜上可知，根據(jù)單株產(chǎn)量、果皮厚度、可溶性總糖含量3個性狀的測定值劃分雜種優(yōu)勢群，13個自交系的劃分結(jié)果（表6）完全不同，表明這3個性狀的遺傳相互獨立。

表6 雜種優(yōu)勢群劃分Table 6 Heterotic grouping

3 討論

本研究中各雜交組合的特殊配合力效應(yīng)值和雙親的一般配合力效應(yīng)值具有相一致的趨勢，但又不完全相同。部分組合高產(chǎn)但品質(zhì)較差，有的組合品質(zhì)很好但產(chǎn)量較低，很難達(dá)到高產(chǎn)與優(yōu)質(zhì)的完美結(jié)合［23］。甜玉米育種在提高產(chǎn)量的同時，應(yīng)該把品質(zhì)放在首位，選擇糖分高、果皮薄且外觀品質(zhì)好的組合是提高產(chǎn)品附加值的有利途徑。親本的利用價值可以分為四類：一般配合力效應(yīng)值高，特殊配合力方差大，此類為優(yōu)良親本；一般配合力效應(yīng)值高，特殊配合力方差小，此類親本亦具有較高的應(yīng)用價值；一般配合力效應(yīng)值低、特殊配合力方差大以及一般配合力的效應(yīng)值低、特殊配合力的方差小，此兩類親本無利用價值［24］。

本研究中甜玉米自交系的11個農(nóng)藝性狀均受加性和顯性基因的共同控制，其中，株高、穗位高、穗長和禿尖受加性基因的影響較大，且狹義遺傳力和廣義遺傳力均較高，該類性狀受環(huán)境條件影響較小，傾向于穩(wěn)定遺傳給雜交后代，可進(jìn)行早世代選擇；穗長與產(chǎn)量相關(guān)性極顯著，早代可以通過定向選擇提高自交系的產(chǎn)量；果皮厚度與可溶性總糖含量的廣義遺傳力較高，早代直接進(jìn)行定向選擇能夠有效提高育種效率。甜玉米各性狀的遺傳規(guī)律目前尚不清晰，基因疊加效應(yīng)對甜玉米各農(nóng)藝性狀影響較大［25］。穗行數(shù)與穗長分別受加性與非加性基因控制，其余農(nóng)藝性狀及含糖量亦受加性基因和非加性基因共同控制。

根據(jù)13個自交系雜交組合的單株產(chǎn)量、果皮厚度和可溶性總糖含量的特殊配合力劃分雜種優(yōu)勢群，得到3種不同的結(jié)果。目前雜種優(yōu)勢的劃分和雜種優(yōu)勢模式的建立有3種方法：一是根據(jù)育種試驗，即進(jìn)行大量親本材料的雜交，通過配合力和雜種優(yōu)勢的實際表現(xiàn)來確定；二是根據(jù)育種家的經(jīng)驗，即通過分析材料的地理來源和親緣關(guān)系來確定；三是利用RFLP和SSR等分子水平上的分析技術(shù)劃分雜種優(yōu)勢群［26］，使雜種優(yōu)勢群的劃分和雜種優(yōu)勢模式的建立更加具有預(yù)見性。采用哪種分類方法更合理需根據(jù)不同的育種目標(biāo)而定，而后續(xù)依賴分子標(biāo)記驗證的補充結(jié)果可能為評判不同劃分模式提供有力佐證［27］。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，以單株產(chǎn)量為基礎(chǔ)，一般配合力較高且特殊配合力方差較大的親本為B2、B10、B11、B6，此類親本可用作高產(chǎn)育種；以可溶性總糖含量進(jìn)行劃分，B10、B11、B13的一般配合力高，特殊配合力方差較大，此類親本可作為培育甜玉米的首選材料；而果皮厚度一般配合力呈負(fù)向顯著的親本有B3、B4、B6、B8、B12、B13等，且此類親本特殊配合力方差較小，是較好的培育薄皮品種的親本材料。總體而言，B6屬于綜合性狀優(yōu)良的高產(chǎn)型自交系，作為親本容易獲得高產(chǎn)、含糖量高、果皮較薄的雜交種；B10、B11為高產(chǎn)型自交系，產(chǎn)量和可溶性總糖含量的配合力較高，但果皮較厚，在后續(xù)育種實踐中需繼續(xù)改良為薄皮高產(chǎn)型自交系；B13是一個優(yōu)質(zhì)型自交系，其品質(zhì)性狀配合力高，但產(chǎn)量配合力較低，在今后的育種工作中可有選擇性地利用并加以改良。通常一般配合力高的親本，容易產(chǎn)生特殊配合力高的組合。

經(jīng)濟(jì)性狀中，穗長、穗粗、穗行數(shù)、行粒數(shù)與單株產(chǎn)量的相關(guān)性極顯著，而果皮厚度、可溶性總糖含量與產(chǎn)量的相關(guān)性不顯著；果皮厚度與穗行數(shù)、行粒數(shù)、產(chǎn)量之間的相關(guān)系數(shù)相對較高，但未達(dá)到顯著水平，而可溶性總糖含量與產(chǎn)量構(gòu)成各因素之間的相關(guān)系數(shù)較小［28-30］。該結(jié)果可能是由于13個自交系基因型以及遺傳背景不同造成的，果皮厚度和可溶性總糖這兩個性狀的遺傳相對獨立，一般很難通過其他性狀進(jìn)行間接選擇。

根據(jù)單株產(chǎn)量的特殊配合力，13個甜玉米自交系劃被分為4個雜種優(yōu)勢群，并初步得出A×B雜種模式雜種優(yōu)勢最強；根據(jù)果皮厚度的特殊配合力鑒定出P3×P4和P3×P2模式為最優(yōu)薄皮品種配組；依據(jù)可溶性總糖含量的特殊配合力，鑒定出T3×T1模式的雜種優(yōu)勢最強。但是同一種方法不同指標(biāo)對13個自交系的劃分結(jié)果截然不同，其原因可能是由于產(chǎn)量、果皮厚度和可溶性總糖在遺傳上相互比較獨立造成的差異。