于少濱

摘 要：林可霉素一般系抑菌劑，但在高濃度下，對(duì)高度敏感細(xì)菌也具有殺菌作用。發(fā)酵效價(jià)測(cè)定：卡賽帕克C18MGⅡ液相色譜柱（4.6×250mm 5？m），0.02 mol/L磷酸氫二銨-乙腈（75∶25，V/V），檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm，流速為1.0ml/min，柱溫為25℃。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)不同碳源、十二烷基硫酸鈉使用量等以發(fā)酵效價(jià)為指標(biāo)對(duì)林可霉素發(fā)酵工藝進(jìn)行研究。

關(guān)鍵詞：林可霉素；工藝；研究

林可霉素，中文別名潔霉素、林肯霉素等，一般系抑菌劑，但在高濃度下，對(duì)高度敏感細(xì)菌也具有殺菌作用。林可霉素用于敏感葡萄球菌屬、鏈球菌屬、肺炎鏈球菌及厭氧菌所致的呼吸道感染、皮膚軟組織感染、女性生殖道感染等。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)不同碳源、十二烷基硫酸鈉使用量等以發(fā)酵效價(jià)為指標(biāo)對(duì)林可霉素發(fā)酵工藝進(jìn)行研究。

1 材料和方法

1.1 菌種

林可霉素。

1.2 材料與試劑

淀粉（西安智誠(chéng)生物科技有限公司）、葡萄糖（西安晉湘藥用輔料有限公司）、黃豆餅粉（西安智誠(chéng)生物科技有限公司）、玉米漿（西安智誠(chéng)生物科技有限公司）、硫酸二氫鉀（合肥博美生物科技有限責(zé)任公司）、硫酸銨（合肥博美生物科技有限責(zé)任公司）、硝酸銨（合肥博美生物科技有限責(zé)任公司）、碳酸鈣（合肥博美生物科技有限責(zé)任公司）、氯化鈉（合肥博美生物科技有限責(zé)任公司）、硝酸鈉（合肥博美生物科技有限責(zé)任公司）。甲醇（東營(yíng)市鑫旺化工有限責(zé)任公司）、磷酸氫二銨（東營(yíng)市鑫旺化工有限責(zé)任公司）、乙腈（東營(yíng)市鑫旺化工有限責(zé)任公司）、乙醇（南通潤(rùn)豐石油化工有限公司）。

1.3 儀器

KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋-DU-30（杭州匯爾儀器設(shè)備有限公司）；PHS-25C 臺(tái)式酸度計(jì)（常州金壇精達(dá)儀器制造有限公司）雙光束紫外可見分光光度計(jì)-UV1900（杭州匯爾儀器設(shè)備有限公司）；KYX-800YS 色譜配套超聲波清洗機(jī)（沈陽(yáng)科晶自動(dòng)化設(shè)備有限公司）；實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)箱（北京博勱行儀器有限公司）；恒溫振蕩器搖床（常州萬(wàn)科儀器科技有限公司）；恒溫恒濕試驗(yàn)箱（東莞市正臺(tái)測(cè)試儀器有限公司）；DW-9型自動(dòng)培養(yǎng)基分裝器（杭州大微生物技術(shù)有限公司）；Plus-E3超純水機(jī)實(shí)驗(yàn)室級(jí)超純水機(jī)（南京易普易達(dá)科技發(fā)展有限公司）；；LAB-UPH-10T高端型實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)（臺(tái)上式）（四川蘭博環(huán)保設(shè)備有限公司）；分析天平（常州市幸運(yùn)電子設(shè)備有限公司）；PC-220色譜柱恒溫箱（天津艾維歐科技發(fā)展有限公司）；卡賽帕克C18MGⅡ液相色譜柱（4.6×250mm 5？滋m）。

1.4培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

1.4.1 種子培養(yǎng)基：淀粉：葡萄糖：黃豆餅粉：玉米漿：硫酸二氫鉀：硫酸銨：硝酸銨：碳酸鈣：氯化鈉：硝酸鈉（1.9：2.5：2.5：2.6：0.005：0.2：0.15：0.7：0.06：0.085），濕熱滅菌二十分鐘。

1.4.2 種子罐培養(yǎng)基：淀粉：葡萄糖：黃豆餅粉：玉米漿：硫酸二氫鉀：硫酸銨：硝酸銨：碳酸鈣：氯化鈉：硝酸鈉（1.9：2.5：2.4：2.6：0.005：0.2：0.15：0.7：0.06：0.085）。

1.4.3 發(fā)酵培養(yǎng)基：淀粉：葡萄糖：黃豆餅粉：玉米漿：硫酸二氫鉀：硫酸銨：硝酸銨：碳酸鈣：氯化鈉：硝酸鈉（3.9：2.7：3.8：0.6：0.05：0.2：0.15：0.7：0.6：0.5），濕熱滅菌二十分鐘。

1.4.4 發(fā)酵罐培養(yǎng)基：淀粉：葡萄糖：黃豆餅粉：玉米漿：硫酸二氫鉀：硫酸銨：硝酸銨：碳酸鈣：氯化鈉：硝酸鈉（3.9：2.7：3.8：0.6：0.03：0.2：0.15：0.8：0.6：0.5）。

1.5 分析方法

pH測(cè)定：酸度計(jì)測(cè)定。

發(fā)酵效價(jià)測(cè)定：高效液色譜法，卡賽帕克C18MGⅡ液相色譜柱（4.6×250mm 5？滋m），0.02 mol/L磷酸氫二銨-乙腈（75∶25，V/V），檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm，流速為1.0ml/min，柱溫為25℃。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同碳源對(duì)生物合成的影響

本實(shí)驗(yàn)分別采用果糖、麥芽糖、葡萄糖、糊精、蔗糖、淀粉、乳糖、甘露醇等作為唯一碳源進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明使用葡萄糖和淀粉時(shí)效價(jià)較高。

2.2 十二烷基硫酸鈉使用量對(duì)生物合成的影響

本實(shí)驗(yàn)分別采用不同含量的十二烷基硫酸鈉進(jìn)行試驗(yàn)，研究其對(duì)生物合成的影響。十二烷基硫酸鈉使用量配比為0.1%時(shí)，三次實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)量分別為2420μg/mL、2450μg/mL、2460μg/mL，平均為22443μg/mL。十二烷基硫酸鈉配比為0.15%時(shí)，三次實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)量分別為2420μg/mL、2390μg/mL、2490μg/mL，平均為2433μg/mL。十二烷基硫酸鈉配比為0.2%時(shí)，三次實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)量分別為2400μg/mL、2410μg/mL、2440μg/mL，平均為2417μg/mL。十二烷基硫酸鈉配比為0.25%時(shí)，三次實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)量分別為2500μg/mL、2510μg/mL、2530μg/mL，平均為2513μg/mL。十二烷基硫酸鈉配比為0.3%時(shí)，三次實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)量分別為2460μg/mL、2450μg/mL、2400μg/mL，平均為2437μg/mL。試驗(yàn)結(jié)果表明蛋白胨含量為0.25%產(chǎn)量最高。

2.3 不同攪拌槳對(duì)生物合成的影響

本實(shí)驗(yàn)分別采用六箭葉攪拌槳和六平葉攪拌槳進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明使用六平葉攪拌槳時(shí)效價(jià)較高。

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