趙國(guó)清 （山東省威海市畜牧獸醫(yī)局 264200） 尹斐斐 （山東省青島市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）諸葛文娟 張華杰 （山東省威海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

種禽場(chǎng)作為整個(gè)畜牧業(yè)生產(chǎn)的源頭環(huán)節(jié)，其疫病控制對(duì)全市動(dòng)物疫病防控工作具有基礎(chǔ)性作用[1]。為了摸清全市種禽場(chǎng)主要疫病免疫抗體水平和病毒感染情況，威海市2015到2017年每年3月連續(xù)對(duì)全市25個(gè)種禽場(chǎng)(包括雞、鴨)進(jìn)行了新城疫、禽白血病和雞白痢的檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了分析匯總，以期為種禽場(chǎng)的持續(xù)健康發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑

雞新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原、雞白痢平板凝集試驗(yàn)抗原生產(chǎn)廠家為哈爾濱國(guó)生生物科技公司。新城疫病毒RTPCR檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)廠家為凱杰生物工程公司。荷蘭BioChek禽白血病抗原ELISA試劑盒購(gòu)自北京天之泰生物。

1.2 抽樣方法

1.2.1 血清學(xué)檢測(cè)抽樣策略 根據(jù)預(yù)估流行率的抽樣策略，全市所有種禽場(chǎng)內(nèi)隨機(jī)抽取個(gè)體，每個(gè)場(chǎng)點(diǎn)按照群內(nèi)抗體陽(yáng)性率90%，可接受誤差5%，置信水平95%，隨機(jī)抽樣35份。

1.2.2 病原學(xué)檢測(cè)抽樣策略 根據(jù)發(fā)現(xiàn)疫病的抽樣方法，全市所有種禽場(chǎng)內(nèi)隨機(jī)抽取個(gè)體，其中新城疫和禽白血病每個(gè)場(chǎng)點(diǎn)按照群內(nèi)預(yù)定流行率10%，置信水平95%，試驗(yàn)敏感性100%，每場(chǎng)隨機(jī)抽樣30份，雞白痢的檢測(cè)抽樣按照群內(nèi)預(yù)定流行率2%，置信水平95%，試驗(yàn)敏感性100%，每場(chǎng)隨機(jī)抽樣150份。

1.2.3 樣品采集量 2015年采集了25個(gè)種禽場(chǎng)的3750份血清樣品、750份咽-泄雙腔拭子樣品和630枚種蛋樣品，2016年采集24個(gè)種禽場(chǎng)的3600份血清樣品、720份咽-泄雙腔拭子樣品和600枚種蛋樣品，2017年采集24個(gè)種禽場(chǎng)的3600份血清樣品、720份咽-泄雙腔拭子樣品和600枚種蛋樣品。血清和咽-泄雙腔拭子樣品采集后置-20℃保存，種蛋采集后置4℃保存。

1.3 檢測(cè)方法

新城疫免疫抗體檢測(cè)主要采用血凝血抑試驗(yàn)，新城疫抗體效價(jià)≥5log2判為陽(yáng)性[2]；雞白痢感染抗體檢測(cè)采用平板凝集試驗(yàn)；禽白血病P27抗原檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。檢測(cè)主要病種、檢測(cè)項(xiàng)目、樣品要求及檢測(cè)依據(jù)見附表。

附表 檢測(cè)病種、項(xiàng)目、樣品類型及檢測(cè)方法

1.4 數(shù)據(jù)分析

個(gè)體免疫合格率=(接種疫苗后免疫合格動(dòng)物數(shù)/實(shí)際接種疫苗動(dòng)物數(shù))×100%，群體免疫合格率=(個(gè)體免疫合格率＞70%的場(chǎng)戶數(shù)/實(shí)際接種場(chǎng)戶數(shù))×100%，個(gè)體陽(yáng)性率=(陽(yáng)性個(gè)體數(shù)/檢測(cè)動(dòng)物數(shù))×100%，群體陽(yáng)性率=(陽(yáng)性場(chǎng)戶數(shù)/所有檢測(cè)場(chǎng)戶數(shù))×100%。

2 結(jié)果

2.1 新城疫抗體及病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果

2015年共檢測(cè)新城疫免疫抗體5000份，合格5000份，個(gè)體合格率100%；新城疫病原學(xué)檢測(cè)750份，5份陽(yáng)性，來自同一個(gè)場(chǎng)點(diǎn)，個(gè)體陽(yáng)性率為0.67%，群體陽(yáng)性率4%。2016年共檢測(cè)新城疫免疫抗體4800份，合格4800份，個(gè)體合格率100%；新城疫病原學(xué)檢測(cè)720份，其中來自一個(gè)場(chǎng)點(diǎn)的4份樣品為陽(yáng)性，個(gè)體陽(yáng)性率為0.56%，群體陽(yáng)性率4.17%。2017年共檢測(cè)新城疫免疫抗體4800份，合格4800份，個(gè)體合格率100%；新城疫病原學(xué)檢測(cè)720份，其中來自一個(gè)場(chǎng)點(diǎn)的2份樣品為陽(yáng)性，個(gè)體陽(yáng)性率為0.28%，群體陽(yáng)性率4.17%。

2.2 雞白痢感染抗體檢測(cè)結(jié)果

2015年共檢測(cè)雞白痢感染抗體5000份，來自3個(gè)場(chǎng)點(diǎn)的33份樣品為陽(yáng)性，個(gè)體陽(yáng)性率為0.66%，群體陽(yáng)性率12%；2016年共檢測(cè)雞白痢感染抗體4800份，其中有28份陽(yáng)性，分別來自兩個(gè)不同場(chǎng)點(diǎn)，個(gè)體陽(yáng)性率為0.58%，群體陽(yáng)性率8.33%。2017年共檢測(cè)雞白痢感染抗體4800份，其中有25份陽(yáng)性，分別來自兩個(gè)不同場(chǎng)點(diǎn)，個(gè)體陽(yáng)性率為0.52%，群體陽(yáng)性率8.33%。

2.3 禽白血病病原檢測(cè)結(jié)果

2015年共檢測(cè)禽白血病病原1030份，陽(yáng)性14份，來自兩個(gè)不同場(chǎng)點(diǎn)，個(gè)體陽(yáng)性率為1.36%，群體陽(yáng)性率8%；2016年共檢測(cè)980份，12份陽(yáng)性，來自同一個(gè)場(chǎng)點(diǎn)，個(gè)體陽(yáng)性率為1.22%，群體陽(yáng)性率4.17%。2017年共檢測(cè)980份，10份陽(yáng)性，來自同一個(gè)場(chǎng)點(diǎn)，個(gè)體陽(yáng)性率為1.02%，群體陽(yáng)性率4.17%。

附圖 種禽3種疫病的病原學(xué)檢測(cè)情況

2.4 不同日齡結(jié)果分析

100日齡雞新城疫免疫抗體滴度平均約7log2左右，且離散度較大，雞白痢和禽白血病陽(yáng)性個(gè)體較少；200日齡雞新城疫免疫抗體滴度平均約9log2，離散度較大，雞白痢陽(yáng)性個(gè)體有所增多，禽白血病陽(yáng)性率仍處于較低水平；400日齡雞新城疫免疫抗體滴度平均約8log2，離散度較小，雞白痢和禽白血病陽(yáng)性率較高。

3 討論

3.1 免疫抗體維持較高水平

免疫抗體的監(jiān)測(cè)工作在動(dòng)物群體免疫評(píng)估工作中發(fā)揮了重要的作用，在指導(dǎo)科學(xué)制定免疫程序中也發(fā)揮了重要作用[3]。通過2015-2017年對(duì)種禽場(chǎng)的新城疫免疫抗體進(jìn)行檢測(cè)，可以看出威海地區(qū)種禽場(chǎng)的新城疫免疫抗體一直保持較高水平，說明免疫工作落實(shí)較好，其中在100日齡時(shí)免疫抗體水平較低，且離散度較大，雞群對(duì)病毒的抵抗力較弱，而到400日齡時(shí)免疫抗體水平趨于平穩(wěn)，離散度小，雞群達(dá)到較穩(wěn)定狀態(tài)。

3.2 病原凈化工作仍需繼續(xù)努力

病原學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，個(gè)別雞場(chǎng)存在雞白痢、禽白血病陽(yáng)性情況，雞白痢和禽白血病在400日齡時(shí)陽(yáng)性率最高，相關(guān)雞場(chǎng)應(yīng)立即淘汰陽(yáng)性雞，對(duì)全場(chǎng)環(huán)境進(jìn)行消毒[4]，并及時(shí)調(diào)整免疫程序，必要時(shí)全群免疫，加大監(jiān)測(cè)和淘汰力度，實(shí)行全進(jìn)全出，嚴(yán)格生物安全操作。雞白痢的凈化是一項(xiàng)長(zhǎng)期持久的工作，需要耗費(fèi)大量的人力、物力、財(cái)力。美國(guó)建立了國(guó)家家禽改良計(jì)劃(NPIP)，經(jīng)過32年的時(shí)間才基本根除了種禽雞白痢，所有加入計(jì)劃的雞孵化場(chǎng)獲得了“無雞白痢認(rèn)證”[5]，因此，我國(guó)要根除雞白痢也不會(huì)是一蹴而就的。

3.3 疫苗選擇問題不容忽視

（1）針對(duì)新城疫病毒檢測(cè)出陽(yáng)性的個(gè)例，懷疑與2016年以前雞場(chǎng)普遍免疫新城疫I系疫苗有關(guān)，I系疫苗屬中等毒力疫苗，該類型疫苗對(duì)產(chǎn)蛋雞、雛雞等都會(huì)出現(xiàn)致病力，因此在疫苗使用中要充分注意[6]。（2）疫苗在使用過程中，應(yīng)根據(jù)不同地區(qū)、不同時(shí)間的機(jī)體特點(diǎn)來確立科學(xué)合理的免疫程序，并適當(dāng)添加免疫增強(qiáng)劑。

4 結(jié)論

威海地區(qū)種禽場(chǎng)的新城疫免疫抗體水平較高且較穩(wěn)定，雞白痢和禽白血病的陽(yáng)性率均呈下降趨勢(shì)，雞白痢感染個(gè)體陽(yáng)性率從2015年的0.66%下降到2017年0.52%，禽白血病病原有散在陽(yáng)性個(gè)體，越來越接近達(dá)到國(guó)家凈化標(biāo)準(zhǔn)(雞白痢陽(yáng)性率＜0.5%，禽白血病陽(yáng)性率＜1%)。