崔麗偉，舒友琴，胡平

(河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，河南 鄭州 450046)

近年來，隨著人們飲食結(jié)構(gòu)的改變，肥胖癥的發(fā)病也在逐漸增加，肥胖引起的疾病也隨之增多。對(duì)于大多數(shù)肥胖癥患者來說，飲食療法效果并不明顯，通過外科手術(shù)治療肥胖風(fēng)險(xiǎn)較大?；颊卟辉敢馔ㄟ^體育鍛煉來減輕體重，還希望看到立竿見影的效果，因此，對(duì)一些減肥保健類食品十分青睞。目前市面上較為流行的減肥藥物根據(jù)其作用機(jī)理主要可分為三類：控制食欲類、加快能量消耗類和抑制腸道消化吸收類，這三類作用機(jī)制的代表藥物分別是鹽酸西布曲明，麻黃堿和奧利司他，其中，鹽酸西布曲明作用最為明顯，被許多生產(chǎn)減肥保健藥品的廠家作為主要添加成分[1]。若患者盲目大量、長期的服用含有西布曲明的減肥保健類藥品，將會(huì)對(duì)患者的身體健康以及生命安全造成嚴(yán)重危害[2]。

1 西布曲明的結(jié)構(gòu)特征及代謝機(jī)理

鹽酸西布曲明(STH)，化學(xué)名為：N-l-(l-對(duì)氯苯基環(huán)丁基)-3-甲基丁基-N，N-二甲基胺鹽酸鹽—水合物，分子式為C17H26ClN·HCl·H2O，在常溫下呈白色結(jié)晶粉末，易溶于甲醇，熔點(diǎn)為193.0 ℃～195.0 ℃。

STH是一種新型的通過控制神經(jīng)中樞來抑制食欲的減肥藥物，可以抑制多巴胺、去甲腎上腺素和5-羥色胺的再攝取，通過釋放5-羥色胺和抑制羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，提高突觸間隙的濃度，從而使下丘腦飽和中樞興奮，食欲下降，使腸道對(duì)碳水化合物的吸收減少，體重減輕[3]。STH口服后被人體迅速吸收，可廣泛分布在全身各個(gè)組織中，患者可以很快控制住體重并可保持較長時(shí)間不回彈的特點(diǎn)。西布曲明還可通過刺激腎上腺素受體，使四周組織對(duì)胰島素敏感性增強(qiáng)，加快對(duì)葡萄糖的吸收，增加脂肪組織的消耗，降低血清中甘油三酯及總膽固醇的含量，加快能量的消耗，達(dá)到減肥的目的[4]。

2 西布曲明的使用規(guī)范

鹽酸西布曲明適用于通過控制飲食和加強(qiáng)運(yùn)動(dòng)未能減輕體重的肥胖癥人群，適用于體重指數(shù)為BMI≥30 kg/m2或≤27 kg/m2的患者[5]。醫(yī)學(xué)上建議，患者在開始使用西布曲明時(shí)為每天服藥一次，每次不超過10 mg，若藥物療效不夠明顯，體重降低較少，服用一個(gè)月后劑量可調(diào)成每天15mg。若服用了10 mg劑量出現(xiàn)了異常反應(yīng)，應(yīng)減少至每天不多于5 mg的劑量。在患者服藥過程中可根據(jù)患者的心率和血壓情況實(shí)時(shí)調(diào)整藥物劑量。醫(yī)學(xué)臨床上禁止使用15 mg/日或者更大的劑量。因此，西布曲明只是治療肥胖癥的一種輔助藥物，不易長期使用[6]。

3 西布曲明的國內(nèi)外發(fā)展現(xiàn)狀

2009年開始，我國國家藥品不良反應(yīng)檢測(cè)中心開始對(duì)西布曲明進(jìn)行全面性的檢測(cè)，相關(guān)專家建議，醫(yī)生應(yīng)當(dāng)關(guān)注其長期使用的安全性。2010年1月，歐洲藥品局發(fā)表聲明禁止使用西布曲明，并將其撤出市場(chǎng)。2010年10月，我國國家藥監(jiān)局也暫停了西布曲明在我國的生產(chǎn)和使用。

盡管西布曲明退出了市場(chǎng)，但產(chǎn)品仍然可以通過非法渠道購買，比如互聯(lián)網(wǎng)和黑市，這些都可以通過假冒藥品或摻假的膳食補(bǔ)充劑的形式購買，這類藥物琳瑯滿目，種類繁多，為了打擊摻假和避免買到摻假的藥品，我們需要一種簡(jiǎn)便快捷的檢測(cè)方法去甄別這些產(chǎn)品是否合格，這對(duì)西布曲明含量的檢測(cè)意義重大。

4 西布曲明的定性分析

4.1 薄層色譜法(TLC)

為了更加簡(jiǎn)便快捷地檢測(cè)保健食品中的西布曲明，國內(nèi)外相關(guān)食品檢測(cè)工作者進(jìn)行了許多研究實(shí)驗(yàn)，探索了許多對(duì)西布曲明含量進(jìn)行定性定量的檢測(cè)分析方法，現(xiàn)分別從定性分析和定量分析兩個(gè)方面進(jìn)行闡述。

溶劑在固定相的流動(dòng)過程中在吸附與解吸附之間連續(xù)進(jìn)行循環(huán)，由于每種物質(zhì)的性質(zhì)不同，同一種吸附劑對(duì)不同組分的吸附能力也有差異，進(jìn)而對(duì)各個(gè)物質(zhì)進(jìn)行分離。

石保龍[7]采用TLC法對(duì)37批樣品中的STH進(jìn)行快速鑒別，西布曲明的檢出率可達(dá)24.3%，并且用液質(zhì)聯(lián)用法驗(yàn)證了該方法的準(zhǔn)確性。此法可在較短時(shí)間內(nèi)快速鑒別大批量的樣品，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。余蘭等[8]采用TLC法對(duì)15種減肥食品中的STH做出了初步的判斷，用3：2的甲醇水作展開劑，測(cè)得8種樣品均出現(xiàn)了斑點(diǎn)，并且與對(duì)照品中斑點(diǎn)位置相同，初步鑒定供試品中含有STH。

由于保健食品的成分復(fù)雜，若單一使用薄層色譜法對(duì)保健食品進(jìn)行成分檢測(cè)，準(zhǔn)確性和精密度會(huì)受到比較大的影響，可能會(huì)有偽陽性結(jié)果的出現(xiàn)，因此薄層色譜法只用作初步的定性篩選，為液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用等方法的定量分析做鋪墊。

4.2 直接實(shí)時(shí)分析離子源結(jié)合三重四極桿質(zhì)譜法(DART-MS)

直接實(shí)時(shí)分析，簡(jiǎn)稱為DART，是一種基于質(zhì)譜的新型電離技術(shù)，近年來，質(zhì)譜學(xué)領(lǐng)域的相關(guān)專家對(duì)此展開了研究。在標(biāo)準(zhǔn)氣壓的條件下，電離源放電，激發(fā)氦氣或氮?dú)馍杉ぐl(fā)態(tài)原子，再將該激發(fā)態(tài)原子快速加熱，用電離源對(duì)其進(jìn)行電場(chǎng)加速，待測(cè)化合物解析，并瞬間化為離子。由于時(shí)間較短，該辦法可實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)分析，能在幾秒內(nèi)直接分析保健食品表面的化合物，實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行低損耗的定性分析。

李文杰等[9]采用DART離子源結(jié)合三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法對(duì)減肥膠囊中添加的西布曲明進(jìn)行快速定性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在4批保健品中，有3批樣品的母離子下的子離子與鹽酸西布曲明的質(zhì)譜圖相同。用質(zhì)譜反應(yīng)監(jiān)測(cè)法進(jìn)行檢測(cè)，填充劑使用可溶性的淀粉，檢出限是1ppm，在進(jìn)行大批量樣品的檢測(cè)時(shí)，該方法檢測(cè)時(shí)間短，特別是對(duì)于一些中藥類的保健食品，可大量減少人力和化學(xué)試劑的損耗，該方法可用于保健食品中大批量的快速篩查檢測(cè)。

4.3 解吸附電暈束電離質(zhì)譜檢測(cè)法(DCBI-MS)

DCBI是一種解吸附電暈束離子化技術(shù)，通過加熱氣體使樣品解吸，施加高壓在電極上，兩極之間產(chǎn)生強(qiáng)電場(chǎng)，激發(fā)流經(jīng)的氦氣，等離子體會(huì)被氣流帶出，形成電暈束于空心陰極針內(nèi)。這種方法快捷高效，靈敏度高，且無需消耗大量試劑，可使繁瑣復(fù)雜的前處理過程得到簡(jiǎn)化，該法是一種快速半定量篩選，若要準(zhǔn)確定量還需結(jié)合高效液相色譜法。

趙勇等[10]通過DCBI-MS和高效液相色譜法對(duì)食品中的西布曲明進(jìn)行快速分析，待測(cè)樣品無需任何預(yù)處理即可直接進(jìn)行分析，1 min內(nèi)出結(jié)果，DCBI-MS和高效液相色譜法定性結(jié)果一致。若利用DCBI-MS進(jìn)行半定量分析時(shí)，要用時(shí)間譜圖上一級(jí)離子所圍成的峰面積來計(jì)算，但若需準(zhǔn)確測(cè)定還需結(jié)合高效液相色譜法。因此，DCBI-MS法常用于輔助高效液相色譜法對(duì)減肥食品中非法摻入西布曲明進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的篩查。

4.4 解吸附電噴霧電離質(zhì)譜檢測(cè)法(DESI-MS)

DESI是一種目前正在被廣泛應(yīng)用的常壓離子化方法，它起源于常壓質(zhì)譜分析。DESI的主要機(jī)理是液滴攜帶，待測(cè)物被噴霧液滴浸染表面并溶解，到達(dá)表面的液滴會(huì)濺射出次級(jí)小液滴，樣品無需進(jìn)行預(yù)處理。由于它是一種軟離子源，分子很少產(chǎn)生碎裂，對(duì)于混合物中的物質(zhì)鑒別和快速高通量分析可同時(shí)實(shí)現(xiàn)。目前，DESI已被應(yīng)用于藥品檢測(cè)和蛋白質(zhì)成分等多個(gè)領(lǐng)域的分析。

許光明等[12]應(yīng)用DESI-MS方法對(duì)保健類食品中非法添加的西布曲明及其衍生物進(jìn)行快速鑒別和半定量分析，研究了實(shí)驗(yàn)過程中多種影響因素，如毛細(xì)管溫度、掃描冊(cè)數(shù)等，可以快捷簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的定性鑒別保健食品中的西布曲明，結(jié)果與液質(zhì)聯(lián)用方法一致。

4.5 光譜分析法

王新財(cái)[13]采用近紅外特征譜段相關(guān)系數(shù)法對(duì)35批保健食品中西布曲明進(jìn)行快速鑒別。通過標(biāo)準(zhǔn)品圖譜和樣品圖譜的對(duì)比確定特征譜段6010～5900 cm-1、4680～4480 cm-1，取二階導(dǎo)數(shù)的相關(guān)系數(shù)29%為設(shè)定模型閾值，通過所建模型對(duì)批次樣品進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果與液質(zhì)進(jìn)行對(duì)比，準(zhǔn)確率高達(dá)94.3%。孫映求等[14]用便攜式拉曼光譜儀對(duì)市售保健食品中的西布曲明進(jìn)行快速檢測(cè)，探討了不同酸度條件下對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，在優(yōu)化酸度條件下，測(cè)定樣品中西布曲明含量并將結(jié)果與HPLC結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果一致。

5 西布曲明的定量檢測(cè)

5.1 高效液相色譜法(HPLC)

高效液相色譜法是以液體為流動(dòng)相，使用高壓輸送裝置，將極性不同的流動(dòng)相送入裝有固定相的色譜柱內(nèi)，各成分在柱內(nèi)被分離后，在檢測(cè)器中進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。

王金生[15]采用高效液相色譜法對(duì)市售具有減肥作用的23種保健品中的西布曲明進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)過程中，在流動(dòng)相中加入三乙胺，優(yōu)化流動(dòng)相組成，做了穩(wěn)定性、精密度和回收率實(shí)驗(yàn)，該方法檢出限為3 ng。

李靜等[16]建立了檢測(cè)減肥食品中非法摻入的西布曲明的高效液相色譜法。西布曲明在11.15～111.50 μg/mL(r=0.999)的范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，平均回收率為98.97%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.60%。該方法簡(jiǎn)便易行、結(jié)果準(zhǔn)確，常用于西布曲明的檢測(cè)。汪元符[17]采用高效液相色譜法測(cè)定減肥食品中非法添加的西布曲明，測(cè)定結(jié)果良好。

5.2 膠束電動(dòng)毛細(xì)血管色譜法(MECC)

膠束電動(dòng)毛細(xì)色譜是在電解質(zhì)中加入超過臨界膠束濃度的表面活性劑使其在溶液中形成膠束，這些膠束在電泳過程中按其所帶的電荷不同朝著與電流相同或相反的方向遷移作為一種“假固定相”，在電場(chǎng)作用的同時(shí)，樣品組分可以在“假固定相”和電解質(zhì)之間進(jìn)行自由分配，依據(jù)其電泳淌度和分配行為的不同而進(jìn)行分離。MECC既能分離中性化合物又能分離帶電組分，與高效液相色譜法相比，具有分離效率高、速度快、樣品用量少、試劑消耗少和分離模式多等優(yōu)點(diǎn)。

徐遠(yuǎn)金等[18]建立了使用膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法測(cè)定保健食品中西布曲明的方法，探討了緩沖液酸堿度和濃度、表面活性劑濃度、有機(jī)改性劑、電壓、溫度和進(jìn)樣時(shí)間對(duì)分離效果的影響。該方法檢出限為1.0 mg/L，是一種可以準(zhǔn)確檢測(cè)減肥食品中的西布曲明的方法。

5.3 與質(zhì)譜聯(lián)用法

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)以及液相色譜-質(zhì)譜(HPLC-MS)聯(lián)用是目前應(yīng)用最廣泛的色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，其分離能力強(qiáng)，適用于定量分析。質(zhì)譜具有高靈敏度、低檢測(cè)限的特點(diǎn)，可以檢測(cè)出化合物的結(jié)構(gòu)信息，但分離復(fù)雜混合物的能力比較差，適于定性分析。色譜與質(zhì)譜聯(lián)用，可以把色譜的高分離能力和質(zhì)譜的高鑒別能力匯聚為一體，在對(duì)復(fù)雜混合物進(jìn)行定量和定性分析時(shí)，結(jié)果更為準(zhǔn)確。Yang Li等[19]報(bào)道了減肥類保健食品中芬氟拉明、西布曲明的GC-MS檢測(cè)方法，先用2%甲酸溶液提取待測(cè)樣品，后用固相萃取柱進(jìn)行凈化，以孔雀石綠作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，采用VF-5MS毛細(xì)管色譜柱分離，回收率為80.1%～106%，方法檢出限7.5～375 μg/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.6%～13.9%。

王向峰等[20]采用多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)技術(shù)，在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下，選擇280.1/125.1離子對(duì)為檢測(cè)對(duì)象，對(duì)西布曲明進(jìn)行鑒別和定量分析。該方法檢出限為10 pg，平均回收率為99.79%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.28%，方法靈敏可靠，可用于西布曲明的檢測(cè)。

李萌等[21]采用HPLC-MS技術(shù)，對(duì)樣品中所含有的麻黃堿、偽麻黃堿、芬氟拉明和西布曲明進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)四種化合物在檢測(cè)系統(tǒng)中顯示出較好的分離度，13 min可得出結(jié)果，樣品的平均回收率達(dá)到85%～104%。

5.4 分光光度法

秦宗會(huì)等[22]建立剛果紅褪色光度法測(cè)定保健食品中非法摻入的鹽酸西布曲明。剛果紅與西布曲明在呈弱酸性的NaH2PO4-Na2HPO4的緩沖介質(zhì)中生成離子締合物，溶液顏色發(fā)生明顯變化，最大褪色波長在490nm，從而建立了測(cè)定鹽酸西布曲明的光度法。實(shí)驗(yàn)探討了剛果紅用量、pH值、表面活性劑、加樣的順序及體系穩(wěn)定性等因素對(duì)吸光度值的影響，在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)不同批號(hào)曲美膠囊中西布曲明的含量進(jìn)行測(cè)定，并將測(cè)定結(jié)果與高效液相色譜結(jié)果相對(duì)比，結(jié)果令人滿意。此外，謝兵[23]等人根據(jù)西布曲明與酸性鉻藍(lán)K發(fā)生反應(yīng)生成締合物，在652 nm處形成負(fù)吸收，檢出限為1.66×10-7mol/L。

5.5 離子遷移譜(IMS)

離子遷移譜法又稱為離子淌度譜法，是一種根據(jù)離子遷移所消耗的時(shí)間來進(jìn)行離子區(qū)分并定性的技術(shù)，與傳統(tǒng)的色譜質(zhì)儀器對(duì)比，離子遷移色譜儀工作過程中不需在真空狀態(tài)下，儀器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，便攜性較強(qiáng)，分析速度快，可以快速篩選出保健食品中非法添加的化學(xué)物。

何歡等[24]選擇了39種減肥藥物進(jìn)行IMS檢測(cè)建立數(shù)據(jù)庫，對(duì)20種明確具有非法添加的保健食品和6種多藥物混合物進(jìn)行篩查，并與液質(zhì)測(cè)試結(jié)果進(jìn)行比較，該方法測(cè)定假陰性率小于5%，假陽性率小于10%，滿足篩查方法要求。

5.6 毛細(xì)管電泳法(CE)

毛細(xì)管電泳法是近年來發(fā)展迅速的新型分離分析技術(shù)，是以微小毛細(xì)管為分離通道，在高壓直流電場(chǎng)的條件下，樣品中各組分之間遷移速度和分配能力產(chǎn)生顯著差異，從而將物品分離。該方法裝置簡(jiǎn)單易操作，樣品的耗量少且前處理簡(jiǎn)單，分析過程花費(fèi)時(shí)間短，分離效率高，但它需要依靠標(biāo)準(zhǔn)品的對(duì)照來進(jìn)行定性分析。因此，毛細(xì)管電泳法尚未完全廣泛應(yīng)用。

李陽等[25]建立了測(cè)定減肥類功能食品中違禁成分芬氟拉明、偽麻黃堿、安非拉酮、西布曲明等高效毛細(xì)管電泳分析方法。在優(yōu)化電泳條件下對(duì)不同廠家的7種減肥樣品進(jìn)行檢測(cè)，西布曲明的檢出限為0.35 mg/L，平均回收率為91.30%。

6 小結(jié)

采用薄層色譜、近紅外光譜等方法對(duì)非法添加的西布曲明進(jìn)行快速定性分析，但保健食品成分的復(fù)雜性而使定性的準(zhǔn)確度降低；色質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)結(jié)果最為準(zhǔn)確，是最常用的檢測(cè)方法之一，但儀器昂貴，技術(shù)操作要求嚴(yán)格，測(cè)定成本高，該方法很難在基層檢測(cè)部門普及；離子遷移譜是一種快速，便捷的檢測(cè)方法，但其專屬性有待加強(qiáng)；毛細(xì)管電泳法分析時(shí)間短、分離效率高、成本低，需要標(biāo)準(zhǔn)品的對(duì)照來進(jìn)行定性分析，所以毛細(xì)管電泳這種儀器并未完全普及。因此，找到一種既能快速定性定量分析的檢測(cè)方法，且成本低，普遍適用性強(qiáng)，是廣大學(xué)者正在探索的一個(gè)新的檢測(cè)方法。

本文對(duì)目前國內(nèi)外已有的西布曲明檢測(cè)方法進(jìn)行梳理找出現(xiàn)有方法的優(yōu)勢(shì)及存在的問題，并對(duì)各種方法進(jìn)行比較和總結(jié)，以期為建立西布曲明檢測(cè)新方法提供參考。