葛保華，范明杰，孔令民，徐 梅，宇 凌*

（1.山東省曹縣動(dòng)物防疫監(jiān)督所，山東 菏澤 274400；2.山東省菏澤市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，山東 菏澤 274000）

1 PRRS流行病學(xué)

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是20世紀(jì)80年代末出現(xiàn)的一種高度傳染性病毒疾病，主要引起妊娠母豬的流產(chǎn)、木乃伊胎、死胎等繁殖障礙以及各年齡段豬（特別是仔豬）的呼吸道疾病[1]。1987年美國(guó)的北卡羅林那州、明尼蘇達(dá)州和依荷華州第一次出現(xiàn)了以繁殖障礙為特征的PRRS。主要癥狀是妊娠母豬后期流產(chǎn)、死產(chǎn)增多，產(chǎn)弱仔比例顯著提高，分娩率顯著降低；母豬發(fā)情延遲現(xiàn)象，斷奶仔豬和哺乳仔豬出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸道癥狀，斷奶豬還出現(xiàn)高死亡率。由于發(fā)病原因不清楚，所以被稱為“神秘病”[2]。荷蘭在1991年分離到該病的病原命名為L(zhǎng)V病毒株，后來(lái)歐盟把該病正式命名為豬繁殖與呼吸綜合征，國(guó)際獸醫(yī)組織1992年將其定為B類傳染病。豬繁殖與呼吸綜合征病毒主要分為兩種：歐洲型和美洲型，分別以美國(guó)1992年分離的VR-2332和荷蘭1991年分離的LV為代表毒株[3]。在中國(guó)，臺(tái)灣養(yǎng)豬科學(xué)研究所1993年首次報(bào)道PRRS在該地區(qū)流行[4]。1995年間，最初在我國(guó)的上海、北京爆發(fā)PRRS，隨后向其周圍的地區(qū)和省份蔓延。郭寶清等1996年首次從國(guó)內(nèi)疑似病豬中分離出PRRSV，確定中國(guó)存在PRRSV[5]。隨后，PRRS發(fā)病的范圍逐漸擴(kuò)大。河南省1997年召開(kāi)的華中地區(qū)獸醫(yī)病理學(xué)術(shù)討論會(huì)上，報(bào)道了該病在河南地區(qū)發(fā)病情況。1998年在中國(guó)江西省一個(gè)較大規(guī)模的養(yǎng)殖場(chǎng)暴發(fā)了疑似PRRS疫情，病情持續(xù)相當(dāng)一段時(shí)間找不出病原。眾多試驗(yàn)結(jié)果表明，利用兔體搔癢試驗(yàn)顯示豬偽狂犬病結(jié)果陰性，利用豬瘟兔體交互試驗(yàn)顯示豬瘟陰性；隨機(jī)采集10頭豬豬血樣送有關(guān)部門(mén)做進(jìn)一步試驗(yàn)，結(jié)果豬全為豬繁殖與呼吸綜合征抗體陽(yáng)性。初步確定該養(yǎng)殖場(chǎng)暴發(fā)的疾病為豬繁殖與呼吸綜合征[6]。2006年5月，我國(guó)江西省、河南省、江蘇省、湖南省、安徽省、浙江省、湖北省等22個(gè)省爆發(fā)流行以豬高熱、高發(fā)病率、高死亡率為特征的豬無(wú)名高熱病，嚴(yán)重流行于中國(guó)中南部，隨后迅速向東南、西北等各地傳播蔓延。2007年，除了2006年發(fā)生過(guò)的疫區(qū)再次發(fā)生外，在一些沒(méi)有該病發(fā)生的地區(qū)也發(fā)現(xiàn)了PRRS。2008年，PRRS的疫情更加嚴(yán)峻，全國(guó)幾乎各個(gè)養(yǎng)豬地區(qū)都出現(xiàn)了該病的身影。我國(guó)農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局2007年3月根據(jù)免疫組化檢測(cè)、回歸動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)病理學(xué)結(jié)果，將“豬無(wú)名高熱病”的病因正式定名為高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（HP-PRRSV），其基因序列主要變異表現(xiàn)在Nsp2基因缺失和GP5基因的突變[7]。

2013年豬高致病性PRRSV在中國(guó)的流行特點(diǎn)表現(xiàn)為：快速大面積傳播、高發(fā)病率、高死亡率、病原種類復(fù)雜，導(dǎo)致嚴(yán)重的混合感染，疫情在不同地區(qū)和時(shí)間上有一定的區(qū)域空間分布特征。北方各省份發(fā)生時(shí)間較晚，感染率較南方低。2002年5月開(kāi)始在很多省份發(fā)病，以后一年比一年嚴(yán)重。疫情分布的季節(jié)性特點(diǎn)是：每年5月中下旬南方省份開(kāi)始發(fā)病，流行的高峰期出現(xiàn)在7～9月；北方諸省區(qū)的疫病在7月中下旬開(kāi)始出現(xiàn)，流行高峰期出現(xiàn)在8～10月，極個(gè)別地區(qū)到12月仍有疫情發(fā)生；惡劣的天氣變化等流行病學(xué)因子與疫情發(fā)展密切相關(guān)，發(fā)病高峰期在2007年，此后趨于緩和，個(gè)別地區(qū)已經(jīng)處于穩(wěn)定狀態(tài)，而有些地區(qū)仍偶有發(fā)病。

2 PRRSV特征

2.1 病原學(xué)特性

PRRSV病毒粒子直徑為50～65 nm且有囊膜的單股正鏈RNA病毒，核衣殼直徑25～35 nm，病毒表面有明顯纖突，長(zhǎng)約5 nm，核衣殼為二十面體且立體對(duì)稱的。在第10次國(guó)際病毒大會(huì)上，把PRRSV、猴出血熱病毒（SHFV）、小鼠乳酸脫氫酶病毒（LDV）以及馬動(dòng)脈炎病毒（EAV）被認(rèn)定同屬于一個(gè)新設(shè)立的套式目（NidDvirale）動(dòng)脈炎病毒科（Arteriviridae）動(dòng)脈炎病毒屬（Arterivirus）[8]。人們普遍人為PRRSV的抵抗力不強(qiáng)，不同條件里PRRSV存活時(shí)間長(zhǎng)短不一樣，PRRSV在4℃時(shí)保存1～2 d，長(zhǎng)期穩(wěn)定保存在-20℃，長(zhǎng)期保存在-70℃條件。PRRSV對(duì)溫度抵抗力差，低溫穩(wěn)定性好，經(jīng)45 min 56℃PRRSV完全喪失感染性，病毒在干燥條件快速喪失感染性；PRRSV對(duì)酸堿條件敏感，只有在6.5＜pH＜7.5的環(huán)境中能夠中穩(wěn)定存在，不耐酸堿，在pH＞7.5或者pH＜6.5的環(huán)境中病毒迅速喪失感染力[9-11]。在潮濕的環(huán)境有助于PRRSV存活，在自來(lái)生理鹽水、水、井水、PBS等水中，不同毒株可以生存3～11 d，在干燥的條件下PRRSV感染性快速喪失。病毒的囊膜能被氯仿和乙醚等去污劑和脂溶劑破壞，使PRRSV復(fù)制能力喪失[12]。PRRSV能夠感染灌流收集的肺泡巨噬細(xì)胞（PAM），并在PAM細(xì)胞中生長(zhǎng)復(fù)制，還可在傳代的CRL 11171、猴腎細(xì)胞系CL-2621、MARC-145等細(xì)胞上生長(zhǎng)，而且在這些細(xì)胞系上均能產(chǎn)生明顯的細(xì)胞病變（CPE）[13]。PRRSV在PAM生長(zhǎng)較好，在其他細(xì)胞系上培養(yǎng)則毒價(jià)很低，而美洲株在所有細(xì)胞系上生長(zhǎng)都較好[14]。PRRSV不能使人的O型紅細(xì)胞及羊、豬、雞、鴨、、豚鼠、小鼠的紅細(xì)胞發(fā)生凝集，但是經(jīng)脂溶劑和非離子去垢劑處理的PRRSV能使小鼠的紅細(xì)胞發(fā)生凝集。仔豬可以獲得被動(dòng)免疫通過(guò)母原抗體，但是當(dāng)母源抗體水平降至保護(hù)水平以下時(shí)，PRRSV會(huì)表現(xiàn)出抗體依賴性增強(qiáng)作用（ADE），仔豬的易感性增強(qiáng)，這種作用為PRRS病的防治帶來(lái)了困難。

2.2 PRRSV的基因組結(jié)構(gòu)

PRRSV為單股、正鏈的核酸系不分節(jié)段RNA病毒，基因組約為15 kb，編碼8個(gè)開(kāi)放閱讀框（ORFs），PRRSV基因組3'端有一個(gè)Poly（A）序列，其編碼順序?yàn)?'-ORFla和ORFlb-ORF（2-6）ORF7-3'端。基因組的3'端是ORFla和ORFlb，占整個(gè)基因大小的80%，負(fù)責(zé)編碼RNA聚合酶活性蛋白和病毒的復(fù)制酶。在ORFla有一個(gè)推定的半胱氨酸富集區(qū)和絲氨酸蛋白酶區(qū)，編碼區(qū)含有一個(gè)疏水區(qū)。ORFIb經(jīng)鑒定有4個(gè)特殊的區(qū)域，分別為富含組氨酸和半胱氨酸的鋅指區(qū)（zinc-finger domain）；含有芯髓序列S/GDD的聚合酶基元序列（motif），該序列經(jīng)常存在于大部分正鏈RNA病毒的RNA聚合酶；結(jié)合蝸牛酶基元序列或者三磷酸腺苷；還有一部分是功能研究未清楚的保守區(qū)。在ORFla和ORFlb包含的兩種結(jié)構(gòu)為RNA聚合酶翻譯過(guò)程中核糖體移碼所必需，其位于重疊區(qū)能夠識(shí)別出7核苷酸結(jié)構(gòu)（UUU-AAAC）和形成RNA擬節(jié)序列。ORF2-ORF7在基因組的5'端，ORF2-ORF4主要編碼囊膜有關(guān)的糖蛋白即次要結(jié)構(gòu)蛋白GP2-GP4。ORF5編碼病毒的囊膜蛋白（GP5），ORF6編碼病毒的膜蛋白（M），ORF7主要編碼核衣殼蛋白（N），其中GP5和M是病毒主要表位抗原研究的比較多[15-20]。

PRRSV基因組通過(guò)產(chǎn)生6個(gè)亞基因組mRNA來(lái)進(jìn)行表達(dá)。這些mRNA具有來(lái)自病毒基因組RNA5'端編碼區(qū)的共同前導(dǎo)序列，其長(zhǎng)度超過(guò)200個(gè)堿基，并且3'端形成嵌套式結(jié)構(gòu)。每個(gè)mRNA只有5'端的ORF被翻譯成蛋白。應(yīng)用Northern印跡雜交試驗(yàn)證實(shí)了mRNA2-7與ORF2-7的相關(guān)性。

2.3 免疫特性

2.3.1 細(xì)胞免疫

細(xì)胞免疫對(duì)于PRRSV非常重要。豬體感染PRRSV后機(jī)體內(nèi)有明顯的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，但是出現(xiàn)的很晚，發(fā)現(xiàn)PRRSV感染后28 d才能檢測(cè)到，感染后49 d增殖反應(yīng)達(dá)到高峰，感染后77 d開(kāi)始減少，和中和抗體產(chǎn)生的過(guò)程極其相似。PRRSV感染后，能夠抑制細(xì)胞因子IFN-α的分泌，能夠顯著的提高IL-10 mRNA的轉(zhuǎn)錄[21-23]。

2.3.2 體液免疫

PRRSV感染機(jī)體后體液免疫都很特別。有研究顯示，PRRSV感染豬體后，在21～49 d，PRRSV特異性抗體達(dá)到最大量，但是產(chǎn)生的大量IgM、IgG并不能保護(hù)機(jī)體免受PRRSV侵害，其沒(méi)有中和作用。1994年，Nelson等用美洲株P(guān)RRSV研究其體液免疫特點(diǎn)，結(jié)果顯示，PRRSV N蛋白抗體是最早檢測(cè)到，其次是PRRSV M蛋白抗體，接著是PRRSV GP5蛋白抗體[24]。PRRSV N蛋白抗體在感染后1周就能檢測(cè)到，能夠持續(xù)幾個(gè)月，但是此抗體并沒(méi)有保護(hù)作用。PRRSV最重要的中和抗體是GP5蛋白抗體，但是此抗體產(chǎn)生的比較晚，PRRSV干擾約30 d才能檢測(cè)到GP5蛋白抗體的產(chǎn)生，感染后10周才能達(dá)到最高峰，盡管GP5蛋白抗體持續(xù)時(shí)間很長(zhǎng)，但是其水平很低，對(duì)豬體起不到保護(hù)作用[25-26]。這樣給PRRSV疫苗研制造成了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。

2.3.3 細(xì)胞因子

PRRSV感染豬體后，造成大量巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞死亡，導(dǎo)致細(xì)胞因子釋放，主要有IL-l、IL-6、IL-8、IFN-α、IFN-β、IFN-γ等，這些都是機(jī)體主要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子。IFN-α在抗PRRSV感染機(jī)制發(fā)揮極其關(guān)鍵的作用。T細(xì)胞通過(guò)分泌的IFN-α活化肺泡巨噬細(xì)胞功能來(lái)發(fā)揮其抗病毒作用。IFN-α也可能通過(guò)活化淋巴細(xì)胞并刺激巨噬細(xì)胞分泌IL-1和IL-6[27]。有資料說(shuō)明，PRRSV感染豬體后會(huì)抑制IFN-α分泌[28]。因此，阻斷IFN-α的分泌可能會(huì)影響Th1細(xì)胞的免疫反應(yīng)，極易引起二次感染。

3 PRRSV的傳播特點(diǎn)及臨床、病理變化

3.1 發(fā)病機(jī)理

PRRSV感染豬機(jī)體后，主要侵入肺泡巨噬細(xì)胞，首先和豬肺泡巨噬細(xì)胞表面的受體結(jié)合，研究發(fā)現(xiàn)肺泡巨噬細(xì)胞表面主要存在3個(gè)受體，分別是硫酸乙酰肝素、唾液酸粘附素和CD163分子。其中硫酸乙酰肝素主要是把PRRSV吸附到肺泡巨噬細(xì)胞，唾液酸粘附素介導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)吞PRRSV，CD163分子可能協(xié)助唾液酸粘附素內(nèi)吞、PRRSV脫衣殼和將PRRSV基因組釋放到肺泡巨噬細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中[29]。PRRSV經(jīng)細(xì)胞內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，PRRSV在肺內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞中復(fù)制大量新的病毒，引起肺泡巨噬細(xì)胞大量裂解，早期肺泡巨噬細(xì)胞抵抗PRRSV的作用可能增強(qiáng)，但是隨著感染時(shí)間持續(xù)，肺泡巨噬細(xì)胞的防御能力逐漸下降，從而抵抗外來(lái)病原微生物的入侵，使肺泡的防御功能顯著下降，為繼發(fā)感染創(chuàng)造了有利的條件[27]。

3.2 傳播途徑

PRRSV有多種途徑傳播，主要傳播來(lái)源是已經(jīng)發(fā)病豬和攜帶PRRSV豬。PRRSV由發(fā)病豬的鼻腔分泌物、乳分泌物、唾液、病公豬精液和尿中排出。在外界環(huán)境中，常存在于圈舍、飼草、污泥、用具、飼料、飲水及污水中。特別是在飲水、污水中能夠長(zhǎng)時(shí)間存活，是造成PRRSV傳播的最重要的來(lái)源。病豬接觸傳播和空氣傳播也是本病的主要傳播途徑。

3.3 臨床表現(xiàn)

往往是豬群發(fā)病突然，體溫顯著升高，達(dá)到41℃；精神沉郁，食欲廢絕或食欲下降；出現(xiàn)眼瞼水腫、眼結(jié)膜炎；還伴隨氣喘、咳嗽等呼吸道癥狀；特別是耳部發(fā)紺，皮膚發(fā)紅，腹下和四肢末梢等處皮膚出現(xiàn)紫紅色斑塊或者是丘疹樣；有些發(fā)病豬出現(xiàn)不能站立、后軀無(wú)力或共濟(jì)失調(diào)等神經(jīng)癥狀；仔豬發(fā)病率很高可以達(dá)到100%、死亡率也很高可達(dá)到50%，母豬流產(chǎn)率可達(dá)30%，成年豬也可發(fā)病死亡。

3.4 病理變化

解剖可見(jiàn)肺臟水腫、淤血、出血，心葉、尖葉出現(xiàn)灶性暗紅色實(shí)變；腦出血、淤血，有軟化灶及膠凍樣物質(zhì)滲出；扁桃體化膿、出血；淋巴結(jié)出血；腎臟呈現(xiàn)土黃色，腎臟表面可以看到見(jiàn)針尖至小米粒大小的出血斑點(diǎn)；心肌有出血和壞死；脾臟表面或邊緣出現(xiàn)梗死灶；有些病例可以看到胃腸道壞死、出血、潰瘍。以上病變因?yàn)樨i的病程不同、個(gè)體差異而有不同的癥狀。

4 對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的危害

藍(lán)耳病給中國(guó)的養(yǎng)豬行業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，2006年5月，華東、中南地區(qū)的湖南、江西等省份的一些豬場(chǎng)，育成豬、保育豬、母豬等暴發(fā)了傳播速度快、治愈率低、死亡率高的變異PRRSV為主要因素引起的豬“無(wú)名高熱病”，此種疫情迅速傳播全國(guó)。目前，許多養(yǎng)豬的地區(qū)都有PRRS疫病，我國(guó)大部分大型養(yǎng)殖場(chǎng)均有PRRSV，而且傳統(tǒng)養(yǎng)豬業(yè)也存在PRRSV，其危害越來(lái)越嚴(yán)重。發(fā)病時(shí)間達(dá)到21～28 d，發(fā)病初期表現(xiàn)癥狀類似感冒，出現(xiàn)發(fā)熱、呼吸困難、食欲不振、咳嗽、嗜睡、精神沉郁等癥狀。發(fā)病幾天后，有些病豬出現(xiàn)耳朵外部、口鼻皮膚、腹部呈現(xiàn)磚紫色，最常見(jiàn)的是耳尖發(fā)紺，豬感染后約50%沒(méi)有任何癥狀或有非常輕微癥狀，但能夠長(zhǎng)期攜帶PRRSV。繁殖母豬的癥狀有早產(chǎn)、產(chǎn)死胎、流產(chǎn)、弱仔及木乃伊胎。感染的哺乳仔豬死亡率極高，可以達(dá)到80%。肥育豬則癥狀比較輕微，出現(xiàn)體溫升高、厭食、易受刺激、呼吸增加、不安、發(fā)育遲緩、皮膚騷癢。PRRS臨床上較難得到控制，治療效果也不理想。但是，在一線臨床專家調(diào)查后發(fā)現(xiàn)，高致病性藍(lán)耳病發(fā)病有一些變化規(guī)律，豬場(chǎng)是否發(fā)病，與飼養(yǎng)條件、豬場(chǎng)底色病、豬場(chǎng)管理、防疫、營(yíng)養(yǎng)條件等因素密切相關(guān)。

5 PRRS的防治

在我國(guó)PRRS流行廣泛，如何采取有效的措施來(lái)有效防治PRRS，已經(jīng)成為全世界都關(guān)注的問(wèn)題。但是目前為止，尚無(wú)有效藥物來(lái)治療PRRS，PRRS疫苗免疫仍然是防控該病的重要手段之一。在流行該病的區(qū)域內(nèi)給豬接種PRRS疫苗，對(duì)繁殖障礙預(yù)防效果較好。但是運(yùn)用疫苗來(lái)防控PRRSV問(wèn)題重重，臨床中弱毒苗和滅活苗雖然能夠減輕臨床癥狀，但是豬群還能夠再次感染，病豬仍然能向外排毒。滅活疫苗比較安全，但是保護(hù)力不強(qiáng)，通常要多次反復(fù)免疫接種；弱毒疫苗雖然能夠持續(xù)長(zhǎng)時(shí)間的免疫反應(yīng)，效果較好，但這種方式很危險(xiǎn)，能夠向外擴(kuò)散病毒，而且病毒毒力有可能會(huì)返強(qiáng)[30-36]。

研究發(fā)現(xiàn)，PRRS免疫防控過(guò)程中困難重重，人們對(duì)PRRSV的免疫應(yīng)答機(jī)理研究不透徹，缺少足夠理論依據(jù)對(duì)PRRS進(jìn)行防治。因此，需要更進(jìn)一步對(duì)PRRSV免疫應(yīng)答機(jī)制進(jìn)行研究，為PRRS的防治提供理論基礎(chǔ)。