宋麗廷 張 娜 喬俊杰 許傳兵

（濰坊工商職業(yè)學(xué)院 濰坊市經(jīng)濟(jì)學(xué)校 山東 諸城 262200）

喹噁啉類抗生素，是一類具有喹噁啉-1， 4-二氧化物結(jié)構(gòu)的化學(xué)合成類的抗菌促生長(zhǎng)劑[1，2]。具有相同的母核結(jié)構(gòu)，該類的抗生素種類繁多，主要有乙酰甲喹(Mequindox， MEQ)、喹烯酮(Quinocetone， QCT)、卡巴氧(Carbadox，CBDX)、喹乙醇(Olaquindox)和喹賽多(Cyadox)等。它們都具有廣譜抗菌、抗球蟲(chóng)、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)和提高飼料效率的作用，能夠抑制細(xì)菌DNA的合成，且價(jià)格便宜，進(jìn)而為生產(chǎn)養(yǎng)殖而被廣泛的添加到飼料中。但是，由于有些不法分子違規(guī)對(duì)其進(jìn)行使用，超劑量將這些抗生素類非法的添加到飼料中，甚至將其當(dāng)作營(yíng)養(yǎng)添加劑來(lái)長(zhǎng)期使用，從而導(dǎo)致一系列的嚴(yán)重后果，如細(xì)菌耐藥性及動(dòng)物源性食品中的殘留等。

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，喹噁啉類抗生素存在著明顯的安全性問(wèn)題[3]。如乙酰甲喹的毒性較大，容易引起中毒，并有研究證明其毒性與代謝密切相關(guān)；喹烯酮同樣有遺傳毒性和細(xì)胞毒性；卡巴氧有致癌致畸和致突變作用[4]；喹乙醇及其殘留能產(chǎn)生遺傳毒性和光敏毒性、染色體畸變和腎上腺皮質(zhì)損害等[5]。

1 藥理作用

喹噁啉類抗生素，主要包括乙酰甲喹、喹烯酮、卡巴氧、喹乙醇和喹賽多等幾種類型。喹賽多的毒性相對(duì)較小，不作研究。

1.1 乙酰甲喹的藥理作用 乙酰甲喹屬于低毒、高效而又廣譜的抗菌類。對(duì)密螺旋體及多種細(xì)菌具有較強(qiáng)的抑制作用[3，6]，對(duì)革蘭氏陰性菌作用強(qiáng)于革蘭氏陽(yáng)性菌，對(duì)豬痢疾密螺旋體的作用尤為突出且復(fù)發(fā)率低。對(duì)用于治療豬和仔豬痢疾、犢牛腹瀉和禽霍亂等疾病有很好的療效。通過(guò)抑制菌體的脫氧核糖核酸(DNA)的合成來(lái)抑制有害菌體是乙酰甲喹主要作用方式。

1.2 喹烯酮的藥理作用 喹烯酮對(duì)痢疾桿菌大腸桿菌、鼠傷寒和金黃色葡萄球菌等均有顯著的抑制作用，且抗菌、促生長(zhǎng)。喹烯酮抑菌作用是通過(guò)抑制細(xì)菌DNA的合成來(lái)實(shí)現(xiàn)的，對(duì)消化道內(nèi)細(xì)菌的抑制，可以減少病原微生物的生長(zhǎng)繁殖，從而保護(hù)腸壁和腸道內(nèi)的有益菌群不受寄生蟲(chóng)或微生物的侵害，提高各種養(yǎng)分的吸收和消化，以此防止疾病發(fā)生進(jìn)而可以加快動(dòng)物的生長(zhǎng)[7]。

1.3 卡巴氧和喹乙醇的藥理作用 卡巴氧和喹乙醇曾經(jīng)作為動(dòng)物的專用藥，具有提高飼料轉(zhuǎn)化率、促進(jìn)蛋白質(zhì)同化，進(jìn)而増加畜禽瘦肉率和促進(jìn)其生長(zhǎng)的優(yōu)點(diǎn)，廣泛的用于羊、牛、豬和雞等，能夠抗菌治病、促進(jìn)生長(zhǎng)及疾病防治[8]。

2 毒理作用

由于喹噁啉藥物的違規(guī)以及超劑量長(zhǎng)久使用，引發(fā)了一系列的問(wèn)題，如食品中的殘留和細(xì)菌耐藥性等。已有研究發(fā)現(xiàn)，喹噁啉類部分藥物在動(dòng)物體內(nèi)代謝后能夠產(chǎn)生毒性較大的代謝物，會(huì)對(duì)組織造成一定的毒性損害，進(jìn)而會(huì)引起致癌、致畸、致突變的風(fēng)險(xiǎn)[6，9]。

2.1 乙酰甲喹的毒理作用 乙酰甲喹在臨床應(yīng)用廣泛，肌注或內(nèi)服均容易進(jìn)行吸收，但大劑量或長(zhǎng)期使用容易引發(fā)中毒[10，11]。同時(shí)因養(yǎng)殖戶對(duì)此缺乏準(zhǔn)確的了解，以及多種含有乙酰甲喹的獸藥制劑混合使用而導(dǎo)致此藥的過(guò)量使用等原因，導(dǎo)致中毒事件時(shí)有發(fā)生，家禽乙酰甲喹中毒癥狀與新城疫相似，在診斷時(shí)易發(fā)生誤診。其中毒的引發(fā)主要是因?yàn)楦鞣N原因?qū)е碌倪^(guò)量使用[12]。

2.2 喹烯酮的毒理作用 喹烯酮具有一定的遺傳毒性和細(xì)胞毒性，甚至具有致癌、致畸、致突變作用[13，14]。王玉春[15]等和Wang[16]等均對(duì)喹烯酮進(jìn)行了一般毒性研究，二者的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果相似，王玉春等人的喹烯酮亞急性毒性試驗(yàn)顯示喹烯酮對(duì)Wistar大鼠及昆明鼠無(wú)明顯的亞急性毒性，但Wang等人的結(jié)果顯示所有劑量組均出現(xiàn)堿性氨基轉(zhuǎn)移酶水平下降，1800mg/kg劑量組的小鼠呈現(xiàn)明顯的體重下降，肝臟、腎臟質(zhì)量增加?？赡苁怯捎诙邅喖毙远拘栽囼?yàn)所設(shè)劑量組不同導(dǎo)致的結(jié)果不同。

2.3 卡巴氧和喹乙醇的毒理作用 （1）卡巴氧和喹乙醇已通過(guò)毒理學(xué)研究表明，具有致癌、致畸等毒性作用[17]。目前，由于使用尚不規(guī)范且價(jià)格便宜，在實(shí)際生產(chǎn)中常有大劑量、長(zhǎng)時(shí)間用藥的情況出現(xiàn)，由此，在動(dòng)物的體內(nèi)造成蓄積殘留，進(jìn)而嚴(yán)重危害人類健康。其本身不穩(wěn)定，故在動(dòng)物體內(nèi)代謝快速，代謝產(chǎn)物分別為喹噁啉-2-羧酸(QCA)及3-甲基喹噁啉-2-羧酸(MQCA)。雖然說(shuō)聯(lián)合國(guó)把喹乙醇的代謝產(chǎn)物暫定為MQCA，但是，實(shí)驗(yàn)證明，MQCA也是喹烯酮和乙酰甲喹的代謝產(chǎn)物[18，19]，是以不能僅僅靠MQCA的結(jié)果就此判定為是喹乙醇的使用。（2）在動(dòng)物體內(nèi)，喹噁啉類抗生素經(jīng)脫單氧和脫雙氧之后主要生成物為QCA和MQCA，故此兩種喹噁啉類抗生素成為組織機(jī)構(gòu)確定的監(jiān)控對(duì)象和獸藥殘留標(biāo)示物。喹噁啉類抗生素可以在生物體內(nèi)被轉(zhuǎn)化，通過(guò)脫氧形成多種代謝產(chǎn)物，而代謝物在動(dòng)物組織體內(nèi)的殘留問(wèn)題不容忽視[20，21]。

3 檢測(cè)方法研究

3.1 乙酰甲喹的檢測(cè)方法研究 （1）已有報(bào)道[22-24]中，用于乙酰甲喹檢測(cè)的方法主要有紫外分光光度法、高效液相色譜法、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。（2）袁群英[22]用紫外分光光度法測(cè)定乙酰甲喹的含量，檢測(cè)波長(zhǎng)為328nm。楊成對(duì)[23]等采用的是氣相色譜-質(zhì)譜法來(lái)對(duì)乙酰甲喹樣品中的共存物進(jìn)行定量和定性分析研究的。在紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為372nm時(shí)，測(cè)得飼料樣品中乙酰甲喹的定量限為10.0μg/kg。劉發(fā)全[24]等人用磷酸緩沖液(pH值3.0)-乙腈-甲醇(55：25：20)作為提取液，對(duì)飼料中的乙酰甲喹、喹烯酮和喹乙醇進(jìn)行超聲提取，用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，在260nm紫外檢測(cè)波長(zhǎng)下，方法的檢出限為2mg/kg。

3.2 喹烯酮的檢測(cè)方法研究 （1）目前報(bào)道的用于檢測(cè)喹烯酮的方法主要是有高效液相色譜法和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[25，26]，此外還有分子印跡聚合物和納米金探針等新技術(shù)的應(yīng)用。（2）金錄勝[25]采用反相液相色譜法對(duì)喹烯酮及其制劑的含量進(jìn)行測(cè)定，在0.05～0.25mg/ml的濃度范圍內(nèi)，喹烯酮的濃度與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系(R=0.9993)，平均回收率為99.89%，變異系數(shù)為1.13。吳仕輝[26]等人采用高效液相色譜法對(duì)魚(yú)蝦中喹烯酮?dú)埩袅康臋z測(cè)方法進(jìn)行了建立，代表材料為凡納濱對(duì)蝦和羅非魚(yú)的肌肉樣品，經(jīng)過(guò)乙酸乙酯提取和正己烷脫脂等一系列的前處理后，用高效液相色譜-紫外檢測(cè)法進(jìn)行分析與檢測(cè)。結(jié)果表明，在0.02～1.0μg/ml的系列濃度范圍之內(nèi)，喹烯酮標(biāo)準(zhǔn)品是呈良好線性關(guān)系的，且R2=0.9998；其檢出限為20μg/kg，加標(biāo)回收率為81.2%～107.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.13%～7.7%。

3.3 QCA和MQCA的檢測(cè)方法研究 （1）Hutchinson[27]等建立了同時(shí)檢測(cè)豬肝中QCA和MQCA的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的方法。樣品經(jīng)酶解后，進(jìn)行液液萃取，萃取液經(jīng)SPE固相萃取小柱凈化，洗脫液再次液液萃取，經(jīng)過(guò)樣品的濃縮和富集后，檢測(cè)。該方法中，QCA和MQCA的檢測(cè)限分別為0.4μg/kg和0.7μg/kg，定量限分別為1.2μg/kg和3.6μg/kg。Wu[28]等使用乙腈-水(60：40)作為提取液對(duì)豬飼料中的卡巴氧、喹烯酮和喹乙醇進(jìn)行超聲提取，提取液經(jīng)HLB固相小柱凈化，用高效液相串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，定量限低于20μg/kg。Merou[29]等建立了同時(shí)檢測(cè)卡巴氧、QCA、MQCA在肌肉中的含量的LC-APCI-MS/MS方法，樣品經(jīng)酶解、提取后經(jīng)固相萃取凈化，經(jīng)過(guò)凈化的提取物使用反相液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行檢測(cè)，其藥物的檢測(cè)限和定量限分別為0.09～0.24μg/kg和0.12～0.41μg/kg。（2）Zhang[30]等以氘標(biāo)記的QCA為內(nèi)標(biāo)，建立了魚(yú)肉中MQCA的超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)法，魚(yú)肉樣品水解后經(jīng)MAX固相萃取小柱凈化，2%的甲酸-乙酸乙酯洗脫，洗脫液于40℃下氮吹至干，1ml流動(dòng)相復(fù)溶后進(jìn)儀器檢測(cè)；檢測(cè)限和定量限分別是0.1ng/g和0.25ng/g，在添加濃度0.25～50.0ng/g范圍內(nèi)，MQCA的回收率為92.7%～104.3%。（3）Wu[31]等研究了同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物組織中QCA和MQCA的高效液相色譜法，樣品經(jīng)偏磷酸酸解后，甲醇提取，乙酸乙酯液液萃取，再使用MAX固相萃取小柱凈化，該方法在2～100mg/kg濃度添加范圍內(nèi)，QCA和MQCA的紫外吸收峰面積與添加濃度呈線性相關(guān)，檢測(cè)限為0.7～2.6mg/kg，定量限1.3～5.6mg/kg。