□ 高 恒 朱玲玲 王 姣 曹程程 王秀娟 楊桂霞 山東中質(zhì)華檢測(cè)試檢驗(yàn)有限公司

1 引言

EDTA-2Na又叫做乙二胺四乙酸二鈉，是一種絡(luò)合能力很強(qiáng)的食品添加劑和重要的人造有機(jī)多元酸[1]，其主要功能是作為穩(wěn)定劑、凝固劑和防腐劑，因其能與各種金屬陽(yáng)離子穩(wěn)定絡(luò)合，防止金屬引起的變質(zhì)和氧化損失，另外還可提高油脂的抗氧化性[2]，進(jìn)而延長(zhǎng)食品的存儲(chǔ)周期。

涼果類食品是指經(jīng)腌制、糖熬浸漬、干燥后的瓜果制品，是傳統(tǒng)美食，深受喜愛。但最近食品安全通報(bào)部分食品中EDTA-2Na違法添加的事件，引人關(guān)注。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB2760-2014）詳細(xì)規(guī)定了醬菜、罐頭及飲料等食品的EDTA-2Na限量值；明確指出果脯食品僅地瓜果脯允許添加[3]。對(duì)于EDTA的測(cè)定，常見有比色法、滴定法[4]和高效液相色譜法、離子色譜法等。數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，滴定法和比色法很難將EDTA和金屬離子的絡(luò)合物和其他絡(luò)合物區(qū)分開，達(dá)不到測(cè)定精確[5]。液相色譜法是通過(guò)檢測(cè)絡(luò)合物計(jì)算樣品中EDTA的含量。通過(guò)比對(duì)兩種常見絡(luò)合物發(fā)現(xiàn)，EDTA-Fe在液相中的檢測(cè)靈敏度遠(yuǎn)大于EDTA-Cu， 如圖1所示，故本文選取EDTA-Fe作為絡(luò)合劑。

2 試驗(yàn)部分

2.1 儀器和試劑

2.1.1 試劑

甲醇、正己烷，色譜純；氯化鐵、無(wú)水乙酸鈉、四丁基溴化銨、磷酸；EDTA-2Na標(biāo) 準(zhǔn) 品（CAS：6381-92-6）；水均為超純水。

2.1.2 儀器設(shè)備

Agilent 1260 Infinity II超高效液相色譜儀（配紫外檢測(cè)器）、電子天平（0.01 mg/kg/0.01 g）、 XW-80A旋渦混合器、KQ-500V型超聲波清洗器、振蕩混合器、超純水儀、3-18KS冷凍離心機(jī)。

2.2 試驗(yàn)方法

2.2.1 溶液配制

氯化鐵溶液：稱取0.2 7g三氯化鐵，溶于90 mL水，加入0.05 mL鹽酸，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻。

緩沖液：稱取6.45 g四丁基溴化銨、1.64 g乙酸鈉，加1 000 mL水超聲攪拌溶解，用磷酸調(diào)pH值為3。

圖1 兩種絡(luò)合物液相色譜圖的比對(duì)

EDTA-2Na標(biāo)液：準(zhǔn)確稱取0.100 0 g標(biāo)準(zhǔn)品，用水定容至100 mL，得到1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，冷藏避光保存。

2.2.2 色譜條件

色譜柱Venusil SAX（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇∶緩沖液15∶85；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)258 nm；進(jìn)樣量10 μL；柱溫30 ℃。

2.2.3 前處理

將去核后的涼果類試樣均勻搗碎，準(zhǔn)確稱取2.500 g試樣于50 mL離心管中，加入水和正己烷，旋渦超聲離心各5 min，冷卻至室溫。將正己烷層棄去，將水層轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中。向管中加入20 mL水復(fù)提取離心一次，并將提取液并入容量瓶中。向容量瓶中加入5 mL氯化鐵溶液，用水定容至刻度線。搖勻后旋渦10 min靜置，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，待測(cè)。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜條件的選擇

在溶液中，金屬離子與EDTA發(fā)生螯合反應(yīng)。條件穩(wěn)定常數(shù)l g KMY值是體現(xiàn)螯合過(guò)程中產(chǎn)物生成的標(biāo)志。文獻(xiàn)顯示，在pH值為3～6時(shí)，F(xiàn)e3+的l g KMY值達(dá)到最大[6]。Fe3+結(jié)合氫氧根的能力較強(qiáng)，且在酸性環(huán)境中不產(chǎn)生沉淀，故選取緩沖液的pH值為3。對(duì)比甲醇∶緩沖液分別為15∶85、20∶80、25∶75條件下，發(fā)現(xiàn)目標(biāo)物隨著流動(dòng)相中甲醇所占比例的提高，出峰時(shí)間會(huì)發(fā)生后移，且在峰面積基本相同的情況下，峰高逐步降低，如圖2所示。由此本試驗(yàn)最終選取流動(dòng)相比例為甲醇∶緩沖液=15∶85。試驗(yàn)通過(guò)對(duì)螯合物EDTA-Fe進(jìn)行掃描后，得出目標(biāo)物在波長(zhǎng)258 nm處有最大吸收。

圖2 流動(dòng)相比例為15∶85，20∶80，25∶75下目標(biāo)物的響應(yīng)

3.2 衍生化方式以及時(shí)間的確定

本試驗(yàn)選取超聲、振蕩、漩渦三種輔助衍生方式進(jìn)行對(duì)比。如圖3所示，旋渦提取的回收率要高于其他方式的回收率。當(dāng)旋渦時(shí)間達(dá)到10 min后回收率無(wú)明顯提高。因此本試驗(yàn)選取最佳衍生方式為渦旋，衍生時(shí)間10 min。

3.3 線性關(guān)系

以EDTA-2Na標(biāo)準(zhǔn)品含量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線如圖4所示。

3.4 方法檢出限、回收率和精密度

采用空白基質(zhì)進(jìn)行加標(biāo)，分別進(jìn)行回收率和精密度試驗(yàn)，以S/N=3計(jì)算方法檢出限，得EDTA-2Na的檢出

圖3 不同衍生方式和時(shí)間對(duì)試驗(yàn)回收率影響

圖4 EDTA-2Na標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 涼果食品樣品的空白基質(zhì)加標(biāo)回收率

限為5.0 mg/kg。準(zhǔn)確稱取同一種基質(zhì)空白的涼果食品樣品，平行稱取21份，每份2.500 g，進(jìn)行三個(gè)水平的加標(biāo)試驗(yàn)，每水平做7次平行試驗(yàn)。按上述前處理方法進(jìn)行處理，最終定容體積為50 mL，結(jié)果見表1。平均回收率和標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在97.1%～99.6%和1.104%～3.872%。

3.5 實(shí)際樣品的測(cè)定

選取30份市面上的涼果類食品利用本試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，其中兩個(gè)樣品檢出值分別為7.35 mg/kg、9.15 mg/kg為陽(yáng)性。結(jié)果表明，本試驗(yàn)方法適用于涼果類食品中EDTA-2Na的含量測(cè)定。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法檢測(cè)涼果類食品中的EDTA-2Na添加量，利用紫外光譜進(jìn)行定性和外標(biāo)法定量。乙二胺四乙酸二鈉在5～100 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，其線性相關(guān)系數(shù)為0.999 97，加標(biāo)回收率在97.1%～99.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.104%～3.872%的相關(guān)范圍內(nèi)。該方法快捷、準(zhǔn)確、實(shí)用性高，為涼果類食品中添加劑乙二胺四乙酸二鈉的高效快速檢測(cè)提供了試驗(yàn)依據(jù)，為保障食品安全檢測(cè)的順利實(shí)施提供了準(zhǔn)確數(shù)據(jù)。