周曙光 甄丹丹 莫緩恒 何柳艷 甄漢深

【摘?要】?目的：?建立HPLC法測定玉米苞葉中蘆丁含量的方法。方法：采用高效液相色譜法，以甲醇為提取溶劑，超聲輔助提取玉米苞葉中的蘆丁，色譜柱為phenomenon?C18?（5μm，250mm×4.6mm）;檢測波長為280nm;流動相采用乙腈-0.1%冰醋酸（20∶80）;流速為0.8mL/min;柱溫為25℃;進(jìn)樣量10μL。結(jié)果：蘆丁進(jìn)樣量在0.19470～2.0047μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.9996），平均加樣回收率為97.70%，RSD為1.46%（n=6）。結(jié)論：該測定方法簡便、快捷，重現(xiàn)性好，可為玉米苞葉藥材質(zhì)量控制和評價提供參考。

【關(guān)鍵詞】?玉米苞葉;蘆丁;含量測定;高效液相色譜法

【中圖分類號】R284.2?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】?A【文章編號】1007-8517（2019）22-0028-04

Determination?of?Rutin?in?Corn?Bracts

ZHOU?Shuguang1?ZHEN?Dandan2*?MO?Yanheng3?HE?Liuyan3?ZHEN?Hanshen2

1.The?Guangxi?Zhuang?Autonomous?Region?peoples?Hospital，Nanning?530021，China;

2.?Guangxi?University?of?Traditional?Chinese?Medicine，Nanning?530001，China;

3.Guangxi?Medical?College，Guilin?541004，China

Abstract：Objective?To?establish?a?HPLC?method?for?determination?of?rutin?in?corn?husks.?Methods??High?performance?liquid?chromatography?（HPLC）?was?used?to?extract?rutin?from?corn?husks?with?methanol?as?the?extraction?solvent.?The?chromatographic?column?was?phenomenon?C18?（5μm，250mm×4.6mm），the?detection?wavelength?is?280nm;the?mobile?phase?was?acetonitrile-0.1%?glacial?acetic?acid?（20∶80）;the?flow?rate?was?0.8mL/minccolumn?temperature?is?25?℃;sample?quantity?is?10μL.Results?There?was?a?good?linear?relationship?between?the?amount?of?rutin?injected?and?the?peak?area?within?the?range?of?0.19470～2.0047μg·mL-1?（r=0.9996），?and?the?average?recovery?rate?was?97.70%.?RSD?was?1.46%?（n=6）.Conclusion?the?method?is?simple，?rapid?and?reproducible，?which?can?provide?reference?for?quality?control?and?evaluation?of?bract.

Keywords：Cornhusks;Rutin;Content;Determination;Highperformance?Liquid?Chromatography

玉米苞葉（corn?husks），是禾本科玉蜀黍?qū)僦参镉衩祝╖ea?mays?L）[1]果穗外部的包被部分。玉米苞葉含有大量的纖維素、一定量的淀粉、總黃酮及單糖多糖等活性成分。2017年我國玉米產(chǎn)量為21?589萬噸，其中玉米副產(chǎn)物產(chǎn)量達(dá)到百萬噸級，大多數(shù)的玉米苞葉被

丟棄或當(dāng)燃料使用，造成資源浪費與環(huán)境污染，近年來對玉米苞葉的研究表明其具有降低血脂[2-5]、抗動脈粥樣硬化[6-7]、抗氧化[8]、抑制α-糖苷酶活性而降糖等藥理作用[9]。玉米苞葉可食可藥，渴望能開發(fā)成為防治心血管疾病的保健品或藥品。

目前還沒有關(guān)于玉米苞葉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，為此，筆者建立HPLC法測定玉米苞葉中蘆丁含量的方法，為玉米苞葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，為玉米苞葉的進(jìn)一步開發(fā)提供參考。

1?材料與方法

1.1?實驗藥材?玉米苞葉采自廣西各地，經(jīng)廣西一心藥業(yè)馬利飛副主任藥師鑒定均為禾本科玉蜀黍?qū)僦参镉衩祝╖eamays?L）的苞葉，來源見表1。

1.2?實驗儀器、試劑?超聲波清洗器（昆山市超聲儀有限公司）;電子天平分析天平（瑞士梅特勒AJ150）;恒溫水浴鍋B-220（上海亞榮生化儀器廠）;高效液相色譜儀（Alliance?e2695，美國沃特世）;蘆?。ㄅ枺?787-200102，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所）;甲醇（廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心，分析純）;超純水。

1.3?實驗方法

1.3.1?色譜條件?色譜柱：phenomenon?C18?（5μm，?250?mm×4.6mm）;檢測波長：280?nm;流動相：乙腈-0.1%冰醋酸（20∶80）;流速：0.8mL/min;柱溫：25℃;進(jìn)樣量：10μL。

1.3.2?對照品溶液的制備?精密稱取蘆丁對照品適量，置50mL容量瓶中，?用甲醇溶解，?并至刻度，?搖勻，?得0.11mg/mL的蘆丁對照溶液，用0.22μm微孔濾膜濾過，濾液備用。1.3.3?供試品溶液的制備?精密稱取經(jīng)干燥粉碎后的玉米苞葉粉末約0.5g（過100目篩），置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20mL，稱定重量，超聲提取30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，過0.22μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2?方法學(xué)考察

2.1?線性關(guān)系考察?分別取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液2、5、10、15、20μL注入高效液相色譜儀，?按上述色譜條件測定其峰面積。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。并計算回歸方程：y=17559x+3478.8，r2=0.9996。表明蘆丁在0.1947～2.0047μg·mL-1內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。進(jìn)樣量、峰面積見表2，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，對照品圖見圖2、樣品圖見圖3。

2.2?精密度實驗?精密吸取蘆丁對照品溶液10μL，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果蘆丁峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.11%，結(jié)果表明儀器精密度良好，見表3。

2.3?重復(fù)性實驗?同一玉米6份，每份約0.5g，精密稱定，?按1.3.3項下供試品溶液制備方法制備，?進(jìn)樣量10μL，RSD為1.01%（n=6），結(jié)果表明樣品重復(fù)性良好，結(jié)果見表4。

2.4?穩(wěn)定性實驗?取同一份供試品溶液，?在相同色譜條件下分別在?0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣10μL，采用HPLC測定蘆丁的峰面積。在12h內(nèi)蘆丁的RSD為1.41%?（n=6）。結(jié)果表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定，結(jié)果見表5。

2.5?加樣回收實驗?取同一批已測含量的供試品6份，?每份約0.5g，精密稱定，?置具塞錐形瓶中，?分別精密加入適量的對照品，再加入甲醇20mL，按上述供試品溶液的提取方法制備，?進(jìn)樣10μL依法測定，?計算平均加樣回收率為97.7%，RSD為1.46%（n=6），?結(jié)果表明該方法可靠，?準(zhǔn)確度高，結(jié)果見表6。

3?玉米苞葉中蘆丁的含量測定

分別稱取10個產(chǎn)地玉米苞葉藥材粗粉，?按1.3.3項下供試品制備方法制備，精密吸取供試品溶液10μL進(jìn)樣，?按1.3.1項下色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，以外標(biāo)一點法計算各樣品中蘆丁的百分含量，結(jié)果見表7，結(jié)果表明廣西10個產(chǎn)地玉米苞葉的蘆丁含量相差不大。

4?小結(jié)

4.1?色譜條件的選擇?本實驗分別考察了ThermoC18（5μm，250mm×4.6mm）色譜柱，Agilent?Wonda?SilC18-WR（5μm，250mm×4.6mm）色譜柱和phenomenon?C18（5μm，250mm×4.6mm）色譜柱。結(jié)果顯示phenomenonC18（5μm，250mm×4.6nm）色譜柱分離效果比較好。

本實驗分別考察了甲醇-水系統(tǒng)，甲醇-0.1%冰乙酸系統(tǒng)，乙腈-水系統(tǒng)，乙腈-0.1%冰醋酸系統(tǒng)，結(jié)果顯示乙腈-0.1%冰醋酸系統(tǒng)作為流動相條件下峰形整體比較好，經(jīng)過幾種比例的考察，選用（20∶80）的比例最佳，所以選用乙腈-0.1%冰醋酸（20∶80）為流動相。

本實驗使用了二極管陣列檢測器（DAD檢測器），對樣品進(jìn)行190～400nm全波長掃描，綜合考慮對照品的出峰情況及分離度，最終確定280nm為本實驗的檢測波長。

本實驗分別考察了20℃、25℃和30℃?3個不同柱溫的色譜圖，結(jié)果顯示25℃峰形整體比較好，所以選擇25℃為檢測溫度。

本實驗分別考察0.5mL/min流速、0.8mL/min和1.0mL/min的色譜圖，結(jié)果顯示0.8mL/min流速色譜圖分離效果最佳，所以選擇流速為0.8mL/min。

4.2?結(jié)果?試驗建立HPLC測定玉米苞葉中蘆丁含量的方法，以甲醇為提取溶劑，超聲輔助提取玉米苞葉，提取液過0.22μm微孔濾膜，利用HPLC測定。以色譜柱：phenomenonC18（250mm×4.6mm，5μm）;流速：0.8mL/min;柱溫：25℃;進(jìn)樣量：10μL;流動相：乙腈-0.1%冰醋酸（20∶80）的條件分離較好。蘆丁進(jìn)樣量在0.19470～2.0047μg·mL-1（???????r=0.9996）范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為97.7%，RSD為0.93%（n=6）。該方法簡便、快捷，重現(xiàn)性好，為玉米苞葉的質(zhì)量評價提供依據(jù)。

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（收稿日期：2019-08-26?編輯：程鵬飛）