楊漢才 甘保波 黃麗君 莫家金

廣東省羅定市人民醫(yī)院，廣東羅定 527200

乙型病毒性肝炎臨床主要表現(xiàn)為肝臟炎性病變特點(diǎn)，嚴(yán)重?fù)p害青少年健康，受到世界范圍內(nèi)關(guān)注。如延誤診治，部分患者惡化為肝癌或肝硬[1]。這就需要開展HBV診斷與治療工作。一般臨床在診斷標(biāo)準(zhǔn)中納入特異血清病原學(xué)檢查及肝功能檢查，在滿足條件情況下，檢測HBV-DNA、DNA-p等，以此較好辨別疾病[2]。感染復(fù)制情況不容易判斷，一些時(shí)候有漏洞出現(xiàn)。僅利用陽性表型指標(biāo)無法很好辨識疾病，也不能展現(xiàn)患者體內(nèi)乙肝病毒活動(dòng)狀況，使得病情評估不正確，發(fā)生較高誤診率，阻礙患者治療，帶來較高死亡率。定量PCR法的使用，可直接了解患者體內(nèi)HBV復(fù)制與傳染性，且便于選取治療方案，準(zhǔn)確判斷療效。為準(zhǔn)確評估乙型病毒性肝炎，本院2016～2017年本院387例表面抗原陽性的患者采用熒光定量PCR（FQ-PCR）法檢測患者乙肝病毒標(biāo)記物陽性表型血清標(biāo)本HBVDNA情況，現(xiàn)將具體情況分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016～2017年本院900多例表面抗原陽性的患者中選取387例作為研究對象，全部實(shí)施乙肝DNA檢測。取387例HBV標(biāo)記物模式的血清標(biāo)本。全部患者中男200例，女187例；年齡17～67歲，平均（45.8±4.1）歲；體質(zhì)量40～86kg、平均體質(zhì)量（68.8±11.5）kg；單身150例，有配偶237例。

1.2 方法

乙肝兩對半使用英科新創(chuàng)的試劑。乙肝DNA定量試劑使用達(dá)安基因試劑。乙肝兩對半所用儀器：帝肯EVO-2dinical150/8。SIEMENS BEPⅢ；乙肝DNA定量所用儀器：羅氏cobasZ480實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)、生物安全柜、上海安亭TGL-16gR高速冷凍離心機(jī)、杭州博日CHB-202恒溫金屬浴等。按照操作要求進(jìn)行，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA法）檢測乙肝病毒標(biāo)記物陽性表型血清標(biāo)本。通過FQ-PCR法定量分析并檢測乙肝病毒標(biāo)記物陽性表型血清標(biāo)本HBV-DNA，嚴(yán)格遵照操作要求開展。陽性，＞1.00+002IU/mL，陰性，＜1.00+002IU/mL。

1.3 評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

乙肝五項(xiàng)也稱為乙肝兩對半，依次為：（1）乙 肝 表 面 抗 原（HBsAg）、（2）乙 肝 表 面 抗 體（抗 -HBs）、（3）乙肝 e 抗原（HBeAg）、（4）乙肝e抗體（抗 -HBe）、（5）乙肝核心抗體（抗 -HBc）。其中，加號是陽性減號是陰性，分析并統(tǒng)計(jì)乙肝病毒標(biāo)記物陽性表型血清標(biāo)本HBV-DNA熒光定量測定結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

將本次研究數(shù)據(jù)輸入統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS22.0表格中，顯著性檢驗(yàn)組間乙肝病毒標(biāo)記物陽性表型血清標(biāo)本HBV-DNA陽性率。采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS18.0版對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（±s ）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乙肝病毒標(biāo)記物陽性表型血清標(biāo)本HBVDNA定量測定結(jié)果

HBV-DNA定量測定結(jié)果可知，在疑似乙肝患者血清標(biāo)本387例中，HBV-DNA陽性187例，陰性200例，定量最高及最低分別為7.70E+009IU/mL、2.71E+003IU/mL。

2.2 乙肝病毒標(biāo)記物陽性表型血清標(biāo)本HBVDNA定量測定與HBV-M的關(guān)系

從ELLSA法檢測乙肝5項(xiàng)與熒光定量PCR法檢測結(jié)果情況看，與大三陽組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 乙肝病毒標(biāo)記物陽性表型血清標(biāo)本HBV-DNA經(jīng)ELLSA法檢測乙肝5項(xiàng)與熒光定量PCR法檢測結(jié)果分析

3 討論

乙型肝炎因?yàn)镠BV而誘發(fā)的一類肝炎性疾病，這種疾病嚴(yán)重威脅人類健康及生命，是引起肝衰竭、肝硬化等不容忽視的一類因素[3]。這種疾病受到世界范圍內(nèi)關(guān)注，乙型肝炎診療歷史較長，我國乙型肝炎患病率非常高，受到各臨床學(xué)者重視，國內(nèi)感染HBV人群較多。所以，預(yù)防與診療乙型肝炎具有突出的意義。

HBV表面標(biāo)記物及乙肝5項(xiàng)如乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗體（抗 -HBs）、乙肝 e抗原（HBeAg）、乙肝 e抗體（抗 -HBe）、乙肝核心抗體（抗-HBc）依然被廣泛地應(yīng)用，同時(shí)表面標(biāo)記物在檢測患者傳染性與病程方面起到突出作用，通過HBV表面標(biāo)記物與乙肝5項(xiàng)在診治疾病方面已經(jīng)有一段時(shí)間，且得到普遍使用，表面標(biāo)記物在傳染性疾病檢測方面起到重要價(jià)值，而ELISA檢測方法因?yàn)槭芟抻谧陨盱`敏度影響其中病毒復(fù)制水平不高，如病毒復(fù)制水平較低，這種檢測手段會使個(gè)體出現(xiàn)漏診或誤診情況[3]。對這種疾病的診斷在以上方法基礎(chǔ)上，診斷乙型肝炎患者上述五項(xiàng)外，然后結(jié)合血清HBV-DNA深入分析，如此較為科學(xué)、準(zhǔn)確性，也更有效[4]。

PCR技術(shù)用于HBV-DNA水平定量檢測當(dāng)中，可用作HBV感染非常精確的一項(xiàng)指標(biāo)，其在HBV復(fù)制、感染等一些方面發(fā)揮了突出作用[5-6]。而因?yàn)镻CR測定需要昂貴儀器設(shè)備，且對醫(yī)師人員提出了較高要求，無疑阻礙了這項(xiàng)技術(shù)使用[7]。

FQ-PCR為臨床基因診斷提供了有效途徑，定量HBV-DNA，真實(shí)呈現(xiàn)了HBV感染、復(fù)制狀況，修正ELISA測定結(jié)果解釋，完全封閉管檢測的應(yīng)用，無需進(jìn)行PCR后處理，防止了交叉感染的出現(xiàn)；且使用實(shí)時(shí)檢測技術(shù)，獲得的Ct值與原始模板數(shù)量表現(xiàn)出一種線性關(guān)系，具有非常高定量準(zhǔn)確率，相比普通PCR，更為靈敏，同時(shí)因?yàn)闊晒馓结樀氖褂茫怨怆妭鹘y(tǒng)形式直接探測PCR擴(kuò)增中熒光信號變化所得的定量結(jié)果，為此，具有非常高的光譜高精確性及DNA雜交高特異性，解決了常規(guī)PCR諸多不足，用于臨床早期疾病診斷中，用于疾病評估及治療結(jié)果的診斷[8]。

在臨床診斷HBV感染經(jīng)常使用的手段是ELISA法檢測，這種檢測是人體對HBV的免疫反應(yīng)狀態(tài)，也是現(xiàn)階段診斷乙型肝炎比較常用的一項(xiàng)指標(biāo)。HBeAg陽性者具有非常高的HBV-DNA定量陽性，從中可見，ELISA法檢測乙肝兩對半是非常不錯(cuò)的監(jiān)測手段，但FQ-PCR能夠準(zhǔn)確無誤呈現(xiàn)HBV-DNA復(fù)制水平變化，便于觀察疾病病程及治療效果。

有學(xué)者證明乙型肝炎HBsAb發(fā)生后，血清中依然存在DNA復(fù)制，而時(shí)間推移下，HBV-DNA的檢出率開始減少[9]。鮑淑華[10]研究指出，對觀察組進(jìn)行具體比較后，活動(dòng)期標(biāo)記物表型和非活動(dòng)期標(biāo)記物表型比非活動(dòng)期HBV-DNA水平要高，以鑒別病毒復(fù)制水平的形式引導(dǎo)臨床病情診治，這和此次研究結(jié)果有相似之處，為實(shí)驗(yàn)實(shí)施創(chuàng)造了良好條件。有研究[11]在ELISA檢測基礎(chǔ)上，采用PCR技術(shù)通過HBV-DNA檢測手段測定各乙肝病毒標(biāo)記物陽性表型組合，在各種陽性組合當(dāng)中，乙型肝炎E抗體HBeAb、乙肝表面抗原HBsAg、乙肝核心抗體HBcAb中HBV-DNA水平為（5.4±1.3）E+004IU/mL。具有最高陽性組合比例，這個(gè)比例達(dá)到30.9%，乙肝表面抗原HBsAg、乙型肝炎E抗原HBeAg、乙肝核心抗體HBcAb陽性等組合中中HBVDNA水平為（1.2±0.3）E+004IU/mL。然后比例達(dá)至22.8%，（HBV-DNA水平在陽性組合ELISA檢測出中有時(shí)會比其余組合低）乙肝病毒的高復(fù)制性，使其具有一定威脅性，僅借助陽性率檢測，不能準(zhǔn)確無誤評估病情，如在其實(shí)驗(yàn)當(dāng)中，比較并分析兩組HBV-DNA水平，得知觀察組HBV-DNA水平偏高，通過分析病毒復(fù)制水平來指導(dǎo)乙型病毒性肝炎的評估。

在本次研究中，結(jié)果：HBV-DNA陽性、陰性例數(shù)分別為187例、200例，定量最高、最低分別為7.70E+009IU/mL、2.71E+003IU/mL。和大三陽組比起來，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。表明，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA法）、FQ-PCR法定量分析乙型病毒性肝炎HBV-DNA含量，具有較高診斷率，為患者臨床治療提供了合理有效的措施，從一定程度上可以體現(xiàn)機(jī)體HBV復(fù)制與感染狀況[12-14]。

總之，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA法）、FQ-PCR法定量分析可準(zhǔn)確呈現(xiàn)HBV-DNA復(fù)制情況，防止漏診及誤診情況發(fā)生，此種檢測手段成本低，操作較為方便，以此更好指導(dǎo)實(shí)踐研究。