匡德宣，王文廣，孫曉梅，陸彩霞，罕園園，仝品芬，李娜，代解杰

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院/北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所樹鼩種質(zhì)資源中心，云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南省實(shí)驗(yàn)樹鼩標(biāo)準(zhǔn)化與應(yīng)用研究創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)，昆明650118)

樹鼩，學(xué)名(Tupaiabelangeri)，英文名(tree shrew)，與松鼠非常相似，體型小，吻尖細(xì)，犬齒細(xì)小，前臼齒寬大，前后肢各有 5 趾。生殖周期短(約6～8月即達(dá)性成熟)，繁殖能力較強(qiáng)(一胎可產(chǎn) 2～5只)，使用成本低。樹鼩為晝出夜伏的小型哺乳類動物，行動敏捷，易受驚，多棲息活動于熱帶雨林、次生林、山地森林和灌木林地區(qū)，主要分布于南亞、東南亞及中國西南地區(qū)[1]。樹鼩在分類上比嚙齒類動物更接近靈長類[2-3]，在遺傳上的基因組和進(jìn)化上非常接近靈長類[4]，被廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、病毒學(xué)、腫瘤學(xué)、眼科學(xué)、腦科學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)等諸多人類醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究領(lǐng)域[5-6]。為了保證樹鼩的質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)操作，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性、一致性和可重復(fù)性，全國實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會于2017年頒布實(shí)施了6項(xiàng)實(shí)驗(yàn)動物樹鼩團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)。本文總結(jié)分析了樹鼩微生物學(xué)與寄生蟲學(xué)、遺傳監(jiān)測、配合飼料、環(huán)境設(shè)施和病理學(xué)診斷規(guī)范質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的編制內(nèi)容，旨在加強(qiáng)該團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的宣傳和實(shí)施，促進(jìn)實(shí)驗(yàn)樹鼩新品種資源的建設(shè)、標(biāo)準(zhǔn)化研究與應(yīng)用和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展，并為制訂樹鼩國家標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 編制背景

實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)準(zhǔn)化和動物實(shí)驗(yàn)的規(guī)范化研究是實(shí)驗(yàn)動物學(xué)科及其行業(yè)的重要特點(diǎn)和本質(zhì)特征。樹鼩是我國重要的野生動物之一，為了使之成為實(shí)驗(yàn)動物新品種，必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)準(zhǔn)化的研究，以滿足生物醫(yī)學(xué)研究的多樣性、特殊性和國際性的發(fā)展需求[7]。在將野生樹鼩進(jìn)行人工馴化、飼養(yǎng)繁殖及應(yīng)用的過程中，必須對樹鼩微生物學(xué)與寄生蟲學(xué)、遺傳學(xué)、營養(yǎng)學(xué)、環(huán)境設(shè)施和病理學(xué)質(zhì)量控制等方面進(jìn)行嚴(yán)格控制及監(jiān)測，以保證樹鼩和樹鼩實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量。雖然對樹鼩的研究已有很長時間，但直到上世紀(jì)80年代樹鼩作為模型動物在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究才引起較多的關(guān)注。隨著相關(guān)研究的不斷深入，樹鼩得到越來越多的科技工作者的青睞，樹鼩的標(biāo)準(zhǔn)化研究也就顯得迫切而重要。在國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目及全國實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會的資助和大力支持下，經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)研究及驗(yàn)證，反復(fù)多次的咨詢論證和廣泛的征求意見，逐步形成了對制定實(shí)驗(yàn)動物樹鼩微生物學(xué)等級及監(jiān)測、寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測、環(huán)境及設(shè)施、遺傳質(zhì)量控制、配合飼料以及病理學(xué)診斷規(guī)范質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的共識，制訂形成實(shí)驗(yàn)動物樹鼩團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)。該實(shí)驗(yàn)樹鼩質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定在很大程度上保證科研數(shù)據(jù)的可靠性、一致性和可重復(fù)性，對提升我國實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)自主創(chuàng)新的研究水平，進(jìn)而提高我國在實(shí)驗(yàn)動物領(lǐng)域的國際地位亦具有重要的科學(xué)意義。

2 編制原則及依據(jù)

本標(biāo)準(zhǔn)的編制遵循“科學(xué)性、實(shí)用性、統(tǒng)一性、規(guī)范性”的原則，在確定本標(biāo)準(zhǔn)的各項(xiàng)指標(biāo)時，嚴(yán)格遵循國家頒發(fā)的《實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例》和《實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量管理辦法》。以實(shí)驗(yàn)動物相應(yīng)的微生物、寄生蟲、環(huán)境設(shè)施、配合飼料、遺傳檢測及病理診斷國家標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)，參考了云南省技術(shù)監(jiān)督局頒布實(shí)施的實(shí)驗(yàn)用樹鼩地方標(biāo)準(zhǔn)《DB53/T 328-2010實(shí)驗(yàn)樹鼩(第1-5部分)》和《DB53/T 328-2012實(shí)驗(yàn)樹鼩(第6-10部分)》等相關(guān)文獻(xiàn)資料[8-17]，在大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的基礎(chǔ)上進(jìn)行科學(xué)的修正和完善，充分考慮人員及樹鼩的福利，使所編制樹鼩團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)既符合國家標(biāo)準(zhǔn)的要求，又能結(jié)合實(shí)際并具有很好的可操作性。有利于樹鼩資源的有效利用，提升國家實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)內(nèi)容，拓展使用范圍。

3 編制內(nèi)容

3.1 樹鼩微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

病原微生物和寄生蟲直接影響樹鼩健康狀況、生產(chǎn)和應(yīng)用。樹鼩病原微生物主要涉及：沙門菌、皮膚真菌、志賀菌、肺炎鏈球菌、變形桿菌、金黃色葡萄球菌、空腸彎曲菌以及皰疹病毒、皰疹病毒、輪狀病毒、呼腸孤病毒及腺病毒等[18-22]，樹鼩寄生蟲主要涉及：虱、蜱、螨蟲、弓形蟲、線蟲、絳蟲及肉孢子蟲等[23-26]。在參考實(shí)驗(yàn)樹鼩微生物和寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測地方標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，《T/CALAS 08-2017 實(shí)驗(yàn)動物 樹鼩微生物學(xué)等級及監(jiān)測》和《T/CALAS 09-2017 實(shí)驗(yàn)動物 樹鼩寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了樹鼩的微生物學(xué)和寄生蟲等級分類、檢測要求、檢測程序、檢測規(guī)則、檢測方法、結(jié)果判定、判定結(jié)論等[27-28]。將沙門菌、皮膚真菌、志賀菌、弓形蟲、線蟲、絳蟲及肉孢子蟲等定為普通級樹鼩質(zhì)量控制必須檢測和排除的項(xiàng)目，肺炎鏈球菌、變形桿菌、金黃色葡萄球菌和空腸彎曲菌被列為SPF級樹鼩必要時檢測項(xiàng)目。皰疹病毒、輪狀病毒、呼腸孤病毒和腺病毒被列為SPF級樹鼩必須檢測和排除項(xiàng)目。另外，結(jié)核桿菌會引發(fā)人畜共患病，雖然有文獻(xiàn)報道實(shí)驗(yàn)性結(jié)核分枝桿菌能感染中國樹鼩[29]，但我們對野外引進(jìn)樹鼩和人工繁育封閉群樹鼩做過結(jié)核桿菌檢測，也曾用人型結(jié)核桿菌接種過樹鼩，均沒有發(fā)現(xiàn)結(jié)核的陽性結(jié)果及臨床病例，與文獻(xiàn)報道有較大差異，推測可能與結(jié)核桿菌的特異性和專屬性有關(guān)，在自然條件下樹鼩不會感染結(jié)核桿菌。因此，標(biāo)準(zhǔn)編制時結(jié)核桿菌暫時未列入檢測項(xiàng)目，將來是否需要作為檢測項(xiàng)目有待進(jìn)一步斟酌和研究。總之，該標(biāo)準(zhǔn)目前適用于樹鼩微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)等級監(jiān)測，防止外來生物和病原體的干擾，避免人及樹鼩受病原微生物和寄生蟲的影響，保證樹鼩健康和實(shí)驗(yàn)的可靠性和準(zhǔn)確性，為將來制定樹鼩微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測國家標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)和提供參考。

3.2 樹鼩遺傳學(xué)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

樹鼩的遺傳質(zhì)量直接決定著實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性、穩(wěn)定性。因此，遺傳質(zhì)量控制也是樹鼩標(biāo)準(zhǔn)化的重要組成部分。目前，國內(nèi)外使用的樹鼩多源于中緬樹鼩滇西亞種的野生型，雖然已被廣泛應(yīng)用于各種人類疾病模型的建立，但其遺傳背景不清晰，一直是制約樹鼩實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)準(zhǔn)化的一大瓶頸。雖然國內(nèi)有部分關(guān)于樹鼩遺傳學(xué)的研究報道[30-33]，但沒有形成國家層面的遺傳檢測體系和標(biāo)準(zhǔn)。在參考實(shí)驗(yàn)樹鼩遺傳質(zhì)量控制地方標(biāo)準(zhǔn)和匯集國內(nèi)外文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上[34-36]，制定了《T/CALAS 11-2017 實(shí)驗(yàn)動物 樹鼩遺傳質(zhì)量控制》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，由全國實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會頒布實(shí)施，填補(bǔ)了無國家層面和指導(dǎo)性強(qiáng)的樹鼩遺傳質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的空白。該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了封閉群樹鼩的命名、繁殖方法和遺傳質(zhì)量的檢測方法[37]。為封閉群樹鼩的引種、繁殖和生產(chǎn)以及保種、性狀控制、生產(chǎn)管理及遺傳學(xué)監(jiān)測提供了技術(shù)依據(jù)，對促進(jìn)我國樹鼩從資源優(yōu)勢轉(zhuǎn)化為科研優(yōu)勢和商品優(yōu)勢，實(shí)現(xiàn)我國樹鼩的標(biāo)準(zhǔn)化，對引導(dǎo)和規(guī)范行業(yè)發(fā)展都具有重要意義。

3.3 樹鼩環(huán)境與設(shè)施的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

樹鼩的環(huán)境設(shè)施指將樹鼩飼養(yǎng)在人為控制的有限空間，并按照人們的意志進(jìn)行生長、繁殖、實(shí)驗(yàn)的一個人工的特定場所及生活環(huán)境。環(huán)境設(shè)施條件不僅影響樹鼠句的品質(zhì)還直接影響樹鼩實(shí)驗(yàn)的科學(xué)性、敏感性和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性、準(zhǔn)確性。樹鼩環(huán)境設(shè)施的條件因素包括：溫度、濕度、氣流速度、氨濃度、光照周期及照度、噪聲、籠器具及飼養(yǎng)間和實(shí)驗(yàn)間輔助設(shè)施的各種理化因素等[38-42]，這些因素的改變，容易引起代謝紊亂，影響樹鼩生長發(fā)育、繁殖(發(fā)情異常、吃仔、哺乳不良等現(xiàn)象)、行為和形態(tài)，機(jī)體抵抗力下降，發(fā)病率增加。近年來，雖然國內(nèi)外有不少關(guān)于生長環(huán)境及設(shè)施的相關(guān)研究報告，但各研究報告在生長環(huán)境的參數(shù)控制和設(shè)施的配置情況上具有較大差異。在實(shí)驗(yàn)樹鼩環(huán)境及設(shè)施地方標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，中國實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會頒布實(shí)施《T/CALAS 10-2017 實(shí)驗(yàn)動物 樹鼩環(huán)境及設(shè)施》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)[43]，規(guī)定了樹鼩設(shè)施、工藝布局、環(huán)境條件的技術(shù)要求以及飲水、籠具、產(chǎn)仔窩箱、動物運(yùn)輸?shù)脑瓌t要求，保證樹鼩種群的健康及穩(wěn)定的生長繁殖，為實(shí)驗(yàn)樹鼩生產(chǎn)和使用機(jī)構(gòu)申請?jiān)S可證認(rèn)證時提供檢測依據(jù)，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性和可靠性。

3.4 樹鼩配合飼料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

在野外環(huán)境中，樹鼩食性廣，喜食水果、昆蟲、鳥蛋和谷類等食物，對甜軟多汁食物較喜歡，對酸澀干硬之物則很少吃，常把食物搬到他們喜歡的地方去吃，也將食物藏于洞內(nèi)，過后再返回來吃，在吃食后飲水，并用前趾清潔嘴唇和面部。因此，在人工飼養(yǎng)條件下，樹鼩生長、發(fā)育、繁殖、增強(qiáng)體質(zhì)和抵御疾病以及一切生命活動均依賴于飼料和營養(yǎng)[44]。充足的營養(yǎng)是維持樹鼩機(jī)體正常生長、繁殖以及健康的先決條件，是樹鼩遺傳和各種生物學(xué)特性得以充分表達(dá)的必要條件，是維持樹鼩健康和提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要因素。鑒于樹鼩在野外環(huán)境和人工飼養(yǎng)條件差別較大，在云南省實(shí)驗(yàn)樹鼩配合飼料地方標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，《T/CALAS 12-2017實(shí)驗(yàn)動物 樹鼩配合飼料》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了樹鼩配合飼料的質(zhì)量要求、營養(yǎng)成分要求及配方、營養(yǎng)成分測定要求、衛(wèi)生要求、檢測規(guī)則以及標(biāo)簽、包裝、貯存和運(yùn)輸要求[45]。保證了樹鼩配合飼料中的蛋白質(zhì)、脂肪、鈣、磷、氨基酸、維生素等各類營養(yǎng)物質(zhì)含量符合樹鼩自身的生理需求及生物學(xué)特性，滿足各階段營養(yǎng)需求、適口性和衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，確保繁育的樹鼩到達(dá)實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量要求，為生命科學(xué)和醫(yī)藥研究提供符合我國實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的樹鼩資源。

3.5 樹鼩病理學(xué)診斷規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)

通過大體解剖和光學(xué)顯微鏡觀察，并結(jié)合全身所見癥狀及各項(xiàng)檢測指標(biāo)對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行綜合的病理學(xué)診斷，是判斷評估實(shí)驗(yàn)動物健康和質(zhì)量狀況的重要手段和最好方法[46-47]。由于病理學(xué)診斷的復(fù)雜性和難于標(biāo)準(zhǔn)化，以往實(shí)驗(yàn)動物國家標(biāo)準(zhǔn)主要關(guān)注傳染性疾病對動物質(zhì)量的影響，至今實(shí)驗(yàn)動物的國家標(biāo)準(zhǔn)還沒有病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)。就樹鼩病理學(xué)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)而言，目前只有2017年中國實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會頒布實(shí)施的《T/CALAS 13-2017 實(shí)驗(yàn)動物 樹鼩病理學(xué)診斷規(guī)范》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)[48]，是目前國內(nèi)關(guān)于樹鼩病理學(xué)診斷最具權(quán)威和參考價值的標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了樹鼩病理學(xué)診斷的規(guī)則、程序、外觀和臨床檢查、解剖和病理學(xué)檢查、結(jié)果判定和結(jié)論等內(nèi)容和方法，為樹鼩傳染性疫情監(jiān)控、飼養(yǎng)繁育、疾病防治及疾病機(jī)理機(jī)制研究提供科學(xué)依據(jù)。

4 存在爭議

盡管樹鼩親緣關(guān)系與靈長類最接近，在生理解剖、生化代謝、神經(jīng)發(fā)育、病毒感染特性、心里應(yīng)激模式等方面與靈長類甚至人類之間都存在高度的相似性，在醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究上的有諸多優(yōu)勢。但樹鼩原本是野生動物，野外環(huán)境和人工飼養(yǎng)條件差別較大，受病原微生物和寄生蟲、環(huán)境設(shè)施、營養(yǎng)飼料、檢測試劑特異性、檢測方法和手段、有毒有害化學(xué)物質(zhì)及其它眾多因素的綜合影響，某些生物學(xué)特性指標(biāo)會隨之改變。因此，樹鼩的實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)準(zhǔn)化研究是一個復(fù)雜而漫長的過程，目前制定頒布的6項(xiàng)樹鼩團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)還需要今后不斷完善和提升。

5 未來展望

中國實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會頒布實(shí)施的6項(xiàng)樹鼩團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)為樹鼩人工飼養(yǎng)繁育和科學(xué)研究提供了技術(shù)保障，標(biāo)志著樹鼩實(shí)驗(yàn)動物化研究取得了階段性進(jìn)展。由于樹鼩的諸多生物學(xué)特性與人類有高度的同源性或相似性，加之與非人靈長類動物比較，其具有體型小、繁殖快、飼養(yǎng)和研究成本低等優(yōu)勢，未來利用樹鼩開展人類疾病動物模型創(chuàng)建、揭示疾病的發(fā)生、發(fā)展及機(jī)制和藥物篩選與評價將發(fā)揮重要和積極的作用。雖然云南省昆明市建有符合實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)準(zhǔn)化的樹鼩種質(zhì)資源基地，國內(nèi)需求樹鼩開展科學(xué)研究的單位和機(jī)構(gòu)也較多，但是，目前樹鼩的推廣應(yīng)用十分有限，其原因是諸多外省需求單位不能提供樹鼩使用許可證，以至于無法辦理樹鼩準(zhǔn)運(yùn)證和運(yùn)輸，使樹鼩的廣泛應(yīng)用受到極大的限制。因此，加強(qiáng)樹鼩團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的宣傳推廣和貫徹實(shí)施，讓更多的實(shí)驗(yàn)動物管理部門及科技工作者更加重視樹鼩作為實(shí)驗(yàn)動物新資源對生命科學(xué)和生物醫(yī)藥研究的重要性和必要性，盡快完善樹鼩的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢測體系，將樹鼩團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)提升為國家標(biāo)準(zhǔn)，為各省市核發(fā)樹鼩使用許可證提供技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)。我們相信，樹鼩在科學(xué)研究和生物醫(yī)藥大健康領(lǐng)域中將發(fā)揮越來越重要的作用。