侯冬巖，李鐵純，回瑞華，刁全平，張美麗

(鞍山師范學(xué)院 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,遼寧 鞍山 114007)

中國白酒是世界蒸餾酒中獨(dú)樹一幟、具有中國濃厚文化色彩的產(chǎn)品.白酒味苦、甘、辛，性溫，入心、肝、肺、胃經(jīng)；可通血脈，御寒氣，醒脾溫中.適量飲用白酒有通風(fēng)散寒、舒筋活血的作用；還可以消除疲勞，陶冶情操，使人輕快并有提神的功能.有失眠癥者睡前飲少量白酒有利于睡眠，并能刺激胃液與唾液分泌，起到健胃的作用.此外，飲用少量低度白酒可以擴(kuò)張血管，促進(jìn)血液循環(huán)，延緩膽固醇等脂質(zhì)在血管壁的沉積，對循環(huán)系統(tǒng)及心腦血管有利.近年來，關(guān)于白酒的釀造工藝、白酒香味成分的分析、白酒的香型及白酒的應(yīng)用等報道較多[1-10].本文采用固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用和高效液相色譜法分析4種常見白酒的己酸乙酯[11-14]，建立快速準(zhǔn)確的分析方法，為開發(fā)和利用白酒提供實(shí)驗(yàn)參考.

1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

1.1 試驗(yàn)儀器

HP 6890-5973氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國惠普公司；75 μm CAR/PDMS Extraction of head(SUPELCO USA)；R2-201型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海中科機(jī)械研究所；510High performance liquid chromatograph (Waters,USA)；PHS-3C精密數(shù)顯酸度計(jì)，上海天達(dá)儀器有限公司.

1.2 試劑

氯化鈉(AR，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司),甲醇(色譜純，山東禹王化學(xué)試劑廠),無水乙醇(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所),乙腈(色譜純，山東禹王化學(xué)試劑廠),磷酸二氫鉀(AR，天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心).

1.3 實(shí)驗(yàn)樣品

河套老窖、水井坊、老龍口、五糧液.

2 4種常見白酒香氣成分的分析

2.1 香氣成分的提取

移取5 mL酒樣于頂空樣品瓶中并密封瓶口，在40 ℃條件下預(yù)熱15 min，將萃取頭插入到樣品瓶中，并于40 ℃恒溫萃取吸附30 min.然后將萃取頭插入氣相色譜儀的進(jìn)樣口，在240 ℃下解吸5 min[15].

2.2 GC-MS測定條件

GC條件：HP-FFAP彈性石英毛細(xì)管色譜柱(25.0 m ×200 μm×0.30μm)；進(jìn)樣口溫度：240 ℃；載氣：He；流速：1 mL/min；柱溫：40 ℃(5 min)，以10 ℃/min升溫至220 ℃(13 min).

MS條件：離子源為EI源；離子源溫度為230 ℃；接口溫度為230 ℃；四極桿溫度為150 ℃；電離電壓為70 eV；倍增電壓為1 988 V；發(fā)射電流為34.6 μA；質(zhì)量范圍m/z為20～500.

2.3 實(shí)驗(yàn)步驟

采用75 μm CAR/PDMS萃取頭提取1.3中酒樣品的香氣成分，由GC-MS對樣品進(jìn)行分析鑒定.圖1～圖4分別給出4種濃香型白酒樣品的總離子流圖，表1給出其分析結(jié)果(表中1、2、3、4分別代表河套老窖、水井坊、老龍口、五糧液).

圖1 河套老窖白酒的總離子流圖

圖2 水井坊白酒的總離子流圖

圖3 老龍口白酒的總離子流圖

圖4 五糧液白酒的總離子流圖

由表1可知，4種常見白酒主要香氣成分組成均含有己酸乙酯，且相對百分含量都較高.

河套老窖含己酸乙酯59.23%、水井坊含己酸乙酯51.82%、老龍口含己酸乙酯68.05%、五糧液含己酸乙酯60.87%.

3 4種常見白酒中己酸乙酯的HPLC定量分析

3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

將甲醇和乙腈分別經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾、脫氣.配制0.1 mol/L的KH2PO4溶液作為流動相，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾、脫氣.準(zhǔn)確稱取0.352 2 g己酸乙酯于10 mL容量瓶中，用60%乙醇水溶液定容，得到濃度為35.22 mg/mL己酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液.再取己酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液2 mL置于25 mL容量瓶中，用60%乙醇水溶液定容.

3.2 樣品溶液的制備

分別取適量的河套老窖、水井坊、老龍口、五糧液酒樣，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，待測.

3.3 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)柱；流動相：乙腈和純凈水的體積比為35∶65；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；掃描波長：190.0～400.0 nm；進(jìn)樣量：10.0 μL.

表1 4種常見白酒的香氣成分組成及相對百分含量

3.4 檢測波長的確定

取適量的3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液，按3.3 色譜條件，在波長范圍190～400 nm內(nèi)掃描，在210 nm 處有最大吸收峰，高效液相色譜圖如圖5.取適量的3.2 樣品溶液，按3.3 色譜條件，在波長范圍190～400 nm內(nèi)掃描，均在210 nm 處有最大吸收峰.因此，選擇檢測波長為210 nm.

圖5 己酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖

3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

從3.1制備的標(biāo)準(zhǔn)溶液中，準(zhǔn)確移取0.20,0.40,0.60,1.00,1.50,2.00 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，用60%乙醇水溶液定容.標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與色譜峰面積之間的回歸方程為：

y=361 798x+272 26，γ=0.999 9，

線性范圍為0.704 4～7.044 mg/mL.

3.6 樣品的測定

準(zhǔn)確稱取經(jīng)3.2處理的4種白酒樣品，每個樣品測定3次，計(jì)算4種白酒樣品的己酸乙酯含量，見表2.

表2 4種常見白酒樣品中己酸乙酯的含量測定結(jié)果 (mg/mL)

3.7 方法的精密度實(shí)驗(yàn)

取適量3.1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，進(jìn)行HPLC檢測，平行測定9次，方法的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.082 0 mg/mL，變異系數(shù)為3.948%.

3.8 最低檢出限的測定

取適量3.1的標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級稀釋，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，測定響應(yīng)值為基線噪音二倍時峰面積，己酸乙酯的最低檢出限小于0.359 0 mg/mL.

3.9 回收率實(shí)驗(yàn)

取適量的酒樣，加入不同體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用流動相定容至10 mL，進(jìn)行HPLC分析，計(jì)算該方法的回收率，見表3.

表3 回收率實(shí)驗(yàn)

4 結(jié)果與討論

固相萃取法提取4種常見白酒的香氣成分，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析相對百分含量.結(jié)果表明香氣成分中主要含有酯類化合物和酸類化合物.其中4種白酒中均含有酯類化合物己酸乙酯，其相對百分含量分別為:河套老窖59.23%、水井坊51.82%、老龍口68.05%、五糧液60.87%.4種白酒香氣成分中己酸乙酯相對百分含量由大到小的順序?yàn)槔淆埧?、五糧液、河套老窖、水井坊.

采用HPLC法定量分析4種常見白酒中己酸乙酯的含量，結(jié)果為河套老窖0.356 5 mg/mL、水井坊0.353 8 mg/mL、老龍口0.618 2 mg/mL、五糧液 0.456 4 mg/mL.4種白酒中己酸乙酯含量由高到低的順序?yàn)槔淆埧凇⑽寮Z液、河套老窖、水井坊.

比較用固相萃取提取、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定4種常見白酒的香氣成分得到的己酸乙酯相對百分含量與用HPLC法定量分析得到的己酸乙酯含量趨勢相一致.

4種常見白酒中均含有己酸乙酯，己酸乙酯的含量高低決定著白酒的風(fēng)味特征.己酸乙酯的含量與原料、曲的種類、發(fā)酵工藝、窖池結(jié)構(gòu)、發(fā)酵時間、生產(chǎn)環(huán)境和貯存時間等有關(guān).