徐 慧， 趙雙枝， 劉孝永， 張彥昊， 陳蕾蕾

(山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品研究所/山東省農(nóng)產(chǎn)品精深加工技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)部新食品資源加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東濟(jì)南 250100)

靈芝是我國(guó)傳統(tǒng)名貴大型真菌[1-2]，可用于輔助治療腫瘤、調(diào)節(jié)免疫力、抗氧化、防衰老等，靈芝多糖是其主要功能活性物質(zhì)之一[3-8]。鹿角靈芝是一種表面具有漆樣光澤、菌柄長(zhǎng)、有多個(gè)分支、形似鹿角、因生長(zhǎng)外界條件變化而異型生長(zhǎng)的靈芝菌株，在自然條件下極為罕見(jiàn)，多通過(guò)人工培養(yǎng)方式獲取。傳統(tǒng)靈芝多糖主要從靈芝孢子粉和子實(shí)體中提取，近年來(lái)的研究顯示，通過(guò)深層發(fā)酵提取的靈芝多糖，較傳統(tǒng)方式的得率和功效具有優(yōu)勢(shì)[9-10]。劉艷芳等對(duì)同種靈芝子實(shí)體、菌絲體和孢子粉多糖成分進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)靈芝菌絲體中多糖含量最高，孢子粉中多糖含量次之，子實(shí)體中多糖含量最低[11]。在對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7釋放一氧化氮(NO)產(chǎn)量的影響研究中發(fā)現(xiàn)，從菌絲體和子實(shí)體中提取的多糖活性表現(xiàn)良好，而孢子粉多糖呈低活性狀態(tài)，表明從靈芝菌絲體中制得的靈芝多糖具有產(chǎn)量高、活性優(yōu)的特點(diǎn)。于浩瀚等以8個(gè)靈芝菌株為研究對(duì)象，比較菌絲體多糖、子實(shí)體的多糖含量發(fā)現(xiàn)，血芝的菌絲體多糖含量為子實(shí)體的30倍，進(jìn)而證實(shí)通過(guò)深層發(fā)酵獲得靈芝多糖是切實(shí)可行的[12]。隨著生活水平的提高，人們的保健意識(shí)逐漸增強(qiáng)，僅靠傳統(tǒng)方式制取靈芝多糖已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足現(xiàn)在人們的需求，加上靈芝液體深層發(fā)酵生產(chǎn)的靈芝菌絲體胞內(nèi)多糖具有產(chǎn)量高、質(zhì)量穩(wěn)定、生產(chǎn)周期短、成本低廉等優(yōu)勢(shì)，適合用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，是目前制備靈芝多糖的熱點(diǎn)研究領(lǐng)域[13-14]。

響應(yīng)面法是一種通過(guò)對(duì)響應(yīng)值逼近來(lái)預(yù)測(cè)真實(shí)值的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法。運(yùn)用響應(yīng)面法不僅可以得到最優(yōu)試驗(yàn)方案，還可獲得變量和響應(yīng)值之間的變化趨勢(shì)，達(dá)到減少試驗(yàn)次數(shù)的目的，具有指導(dǎo)工藝參數(shù)優(yōu)化、提高生產(chǎn)效益的優(yōu)勢(shì)[15-16]。本試驗(yàn)以鹿角靈芝液體發(fā)酵產(chǎn)胞內(nèi)多糖得率為指標(biāo)，對(duì)鹿角靈芝的液態(tài)發(fā)酵工藝進(jìn)行單因素和響應(yīng)面法優(yōu)化，以期為液態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)鹿角靈芝多糖的工藝制定提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 菌種與原料 鹿角靈芝(GanodermaamboinenseNCPSLZ1)菌種，由中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏編號(hào)：M2015796。馬鈴薯，市售；麥麩，市售；大豆粉，市售。

1.1.2 培養(yǎng)基的配制 菌種保存及活化培養(yǎng)基：20%馬鈴薯、3%麥麩、3%葡萄糖、0.2% KH2PO4、0.1% MgSO4、2%瓊脂，pH值=7.0。將馬鈴薯洗凈，去皮，切成小塊，加麥麩和蒸餾水煮沸30 min，過(guò)濾。向?yàn)V液中趁熱加入其他試劑，融化后用試管分裝，于121 ℃滅菌30 min，制成試管斜面?zhèn)溆谩?/p>

種子培養(yǎng)基：菌種培養(yǎng)基配方中不添加瓊脂，融化后根據(jù)需要分裝于三角瓶?jī)?nèi)，于121 ℃滅菌30 min備用。

1.2 儀器與設(shè)備

ZWY-2102恒溫培養(yǎng)振蕩器，上海智誠(chéng)分析儀器制造有限公司；5804R臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；BL-58A滅菌鍋，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司；超凈工作臺(tái)，上海力申科學(xué)儀器有限公司；BPH-9000電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，北京醫(yī)療設(shè)備廠；WB-200水浴鍋，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 菌種活化 從保存母種的試管斜面中切出大豆大小的菌絲塊，接于斜面培養(yǎng)基的中部，于(27±2) ℃培養(yǎng)7 d。

1.3.2 種子液的制備 取大豆大小的活化菌絲塊3～4塊，接種于種子液培養(yǎng)基中，500 mL三角瓶裝液量為 300 mL，于(27±2) ℃、150 r/min搖瓶培養(yǎng)7 d。

1.3.3 發(fā)酵液的制備 取適量種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，于(27±2) ℃、150 r/min搖瓶培養(yǎng)，分別考察碳源、氮源、馬鈴薯添加量與初始pH值、接種量、裝液量對(duì)鹿角靈芝菌絲體胞內(nèi)多糖含量的影響。

1.3.4 鹿角靈芝胞內(nèi)多糖的提取 將鹿角靈芝發(fā)酵液于 6 000 r/min 離心15 min，收集菌絲體，將菌絲體用蒸餾水多次洗滌并離心后真空冷凍干燥備用。取1 g凍干鹿角靈芝菌絲體，加50 mL蒸餾水煮沸提取60 min，過(guò)濾，濾渣重復(fù)提取1次，過(guò)濾，合并2次濾液，加3倍體積的無(wú)水乙醇混勻，于 4 ℃ 靜置12 h，離心，在沉淀中加適量蒸餾水復(fù)溶，即得鹿角靈芝胞內(nèi)多糖粗提液。

1.4 鹿角靈芝多糖的測(cè)定方法

1.4.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 準(zhǔn)確稱取10 mg葡萄糖(于104 ℃烘干至恒質(zhì)量)，定容于100 mL容量瓶中，配制成濃度為0.1 mg/mL的葡萄糖母液。準(zhǔn)確吸取濃度為0.1 mg/mL的葡萄糖母液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，置于具塞試管中，分別補(bǔ)水至2.0 mL。然后各準(zhǔn)確加入1.0 mL 6%苯酚溶液和5 mL硫酸，搖勻，置于40 ℃水浴保溫15 min，取出并迅速用流水冷卻至室溫，于490 nm處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)、葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4.2 多糖含量測(cè)定 準(zhǔn)確吸取1 mL鹿角靈芝多糖粗提液，稀釋50倍，取1 mL稀釋液，補(bǔ)水至2 mL，準(zhǔn)確加入1 mL 6%苯酚溶液和5 mL濃硫酸，搖勻，于40 ℃水浴保溫15 min，取出并迅速用流水冷卻至室溫，于490 nm處測(cè)定吸光度。以蒸餾水為空白對(duì)照，根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算鹿角靈芝胞內(nèi)多糖含量。

1.4.3 鹿角靈芝胞內(nèi)多糖含量的計(jì)算 將樣品真空冷凍干燥后制得鹿角靈芝胞內(nèi)多糖，測(cè)定多糖含量，按照以下公式計(jì)算鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率：

式中：C為多糖含量，mg；V為提取液體積，mL；m為凍干菌絲體質(zhì)量g。

1.5 單因素試驗(yàn)

以鹿角靈芝胞內(nèi)多糖含量為指標(biāo)，分別考察碳源含量、氮源含量、裝液量、接種量、初始pH值和馬鈴薯添加量對(duì)鹿角靈芝產(chǎn)胞內(nèi)多糖得率的影響，最終確定各個(gè)單因素最適水平及對(duì)鹿角靈芝胞內(nèi)多糖影響顯著的單因素。

1.5.1 碳、氮源篩選試驗(yàn) 分別以2%葡萄糖、山梨醇、蔗糖、麥芽糖、乳糖、玉米粉和可溶性淀粉作為碳源，添加2%麥麩、20%馬鈴薯、0.2% KH2PO4和0.1% MgSO4，配成7種不同碳源的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行碳源的篩選試驗(yàn)。分別以2%麥麩、(NH4)2SO4、酵母膏和大豆粉作為氮源，添加2%葡萄糖、20%馬鈴薯、0.2% KH2PO4和0.1% MgSO4，配成4種不同氮源的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行氮源的篩選試驗(yàn)。

1.5.2 單因素試驗(yàn) 在優(yōu)選碳、氮源的基礎(chǔ)上，分別考察碳源添加量、氮源添加量、裝液量(500 mL三角瓶裝液量分別為50、100、150、200、250 mL)、接種量(5%、10%、15%、20%)、初始pH值(3、5、7、9、11)、馬鈴薯添加量(5%、10%、15%、20%、25%)對(duì)鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率的影響，培養(yǎng)溫度為(27±2) ℃，轉(zhuǎn)速為150 r/min，培養(yǎng)82 h。

1.6 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)與響應(yīng)面分析

在單因子試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，經(jīng)過(guò)顯著性分析，選取對(duì)鹿角靈芝胞內(nèi)多糖影響顯著的裝液量、接種量和葡萄糖添加量作為自變量，進(jìn)行3因素3水平的響應(yīng)面分析試驗(yàn)。采用Design Expert 8.0.5軟件進(jìn)行Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)并對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行響應(yīng)面分析，建立響應(yīng)面回歸模型[15-16]。對(duì)擬合的回歸方程進(jìn)行方差分析，確定最優(yōu)工藝參數(shù)及最優(yōu)響應(yīng)因子水平，并進(jìn)行模型驗(yàn)證。響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

1.7 數(shù)據(jù)處理與分析

所有試驗(yàn)均重復(fù)3次。單因素試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析及作圖采用Origin 8.5軟件，單因素方差分析及顯著性比較采用SPSS軟件，多重比較采用LSD檢驗(yàn)法。響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)、數(shù)據(jù)處理、作圖及方差分析均采用Design Expert 8.0.5b軟件。

表1 響應(yīng)面分析法試驗(yàn)設(shè)計(jì)因子水平

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線 以葡萄糖含量為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)，并得到回歸方程：y=8.542x-0.007，r2=0.999。

2.1.2 碳源篩選結(jié)果 從圖2可以看出，以葡萄糖、玉米粉和可溶性淀粉為碳源時(shí)，鹿角靈芝菌絲體的胞內(nèi)多糖得率較高，而以山梨醇、蔗糖、乳糖和麥芽糖作碳源時(shí)，不利于鹿角靈芝胞內(nèi)多糖的累積，因此以葡萄糖作為最適碳源。

2.1.3 氮源篩選結(jié)果 從圖3可以看出，以麥麩和酵母膏作為氮源有利于鹿角靈芝液體發(fā)酵菌絲體胞內(nèi)多糖的累積，其中，以麥麩作為氮源時(shí)，胞內(nèi)多糖得率最高，而麥麩價(jià)格低廉易得，因此，本研究以麥麩作為最適氮源。

2.1.4 碳源添加量 從圖4可以看出，葡萄糖添加量對(duì)鹿角靈芝菌絲體胞內(nèi)多糖得率的影響較大。隨著葡萄糖添加量的增加，胞內(nèi)多糖得率呈先顯著上升后顯著下降的趨勢(shì)，當(dāng)葡萄糖添加量為3%時(shí)，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率達(dá)到最高值，因此葡萄糖添加量以3%為宜；當(dāng)葡萄糖添加量為2%～4%時(shí)，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率較高，且不同水平間存在顯著差異。

2.1.5 氮源添加量 從圖5可以看出，當(dāng)麥麩添加量為 1%～5%時(shí)，隨著麥麩添加量的增大，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率呈先上升后下降的趨勢(shì)；當(dāng)麥麩添加量為3%時(shí)，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率達(dá)到大值，故麥麩添加量以3%為宜；當(dāng)麥麩添加量為2%～4%時(shí)，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率較高，但不同水平間差異不明顯。

2.1.6 裝液量 從圖6可以看出，當(dāng)500 mL三角瓶裝液量為50～250 mL時(shí)，對(duì)鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率的影響顯著。隨著裝液量的加大，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率呈現(xiàn)先顯著上升后顯著下降的趨勢(shì)；當(dāng)500 mL三角瓶裝液量為150 mL時(shí)，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率最高，故500 mL三角瓶裝液量以150 mL為宜。當(dāng)500 mL三角瓶裝液量為100 ～200 mL時(shí)，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率較高，且不同水平間差異顯著。

2.1.7 接種量 從圖7可以看出，隨著接種量的加大，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率首先呈顯著上升的趨勢(shì)，當(dāng)接種量為10%時(shí)，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率達(dá)最高值，之后隨接種量的增大，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率的變化不明顯，因此可見(jiàn)，接種量以10%為宜。在接種量為5%～20%范圍內(nèi)，5%～15%的接種量對(duì)鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率的影響顯著。

2.1.8 初始pH值 從圖8可以看出，隨著初始pH值的增加，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率呈先上升后下降的趨勢(shì)，當(dāng)pH值為7時(shí)，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率最高，因此初始pH值以7為宜。當(dāng)pH值為5～9時(shí)，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率較高，但不同水平間差異不明顯。

2.1.9 馬鈴薯添加量 從圖9可以看出，在馬鈴薯添加量為5%～20%的范圍內(nèi)，隨著馬鈴薯添加量的增加，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率呈上升趨勢(shì)，當(dāng)馬鈴薯添加量為20%時(shí)，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率最高，因此，馬鈴薯添加量以20%為宜。當(dāng)馬鈴薯添加量為15%～25%時(shí)，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率較高，且添加量為20%、25%與添加量為15%間差異顯著。

2.2 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)

2.2.1 回歸模型的建立 在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，固定麥麩添加量為3%，馬鈴薯添加量為20%，初始pH值為7.0，采用中心組合設(shè)計(jì)方法，對(duì)裝液量(A)、接種量(B)和葡萄糖添加量(C)進(jìn)行3因素3水平的Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

采用Design-Expert 8.05對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，得到裝液量(A)、接種量(B)和葡萄糖添加量(C)對(duì)鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率(Y)的回歸方程：Y=12.95+0.17A+0.53B+0.97C-0.13AB-0.09AC+1.09BC-4.54A2-2.03B2-1.88C2。

2.2.2 回歸模型的方差分析 對(duì)響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，由表3可以看出，本試驗(yàn)建立的多元回歸模型中P<0.000 1，表明回歸模型極顯著，說(shuō)明不同處理間差異極顯著；模型失擬項(xiàng)P>0.05，說(shuō)明模型失擬項(xiàng)不顯著，試驗(yàn)誤差較小[17]。模型決定系數(shù)R2=0.996 9，校正后的決定系數(shù)RAdj=0.993 0，表明該模型能較好地?cái)M合實(shí)際試驗(yàn)中響應(yīng)值的變化，該回歸模型能對(duì)胞內(nèi)多糖得率進(jìn)行分析和預(yù)測(cè)。變異系數(shù)(CV)表示模型的置信度[18]，CV與模型置信度成反比，本模型的CV為2.81%，表明該模型能較好地體現(xiàn)試驗(yàn)值。其中，B、C、BC、A2、B2、C2對(duì)鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率有極顯著影響(P<0.000 1)，A、AB、AC對(duì)鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率影響不顯著。各影響因素對(duì)鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率的影響依次是C(葡萄糖添加量)>B(接種量)>A(裝液量)。

表3 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果方差分析

注：“*”表示影響顯著(P<0.05)；“**”表示影響極顯著(P<0.01)。R2=0.996 9，RAdj=0.993 0，CV=2.81%。

2.2.3 響應(yīng)面分析 圖10至圖12反映了接種量、裝液量和葡萄糖添加量與響應(yīng)值鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率的關(guān)系。響應(yīng)面三維圖和等高線圖能反映2個(gè)變量間的相互作用，此時(shí)其他變量處于中心水平。響應(yīng)面圖中響應(yīng)面的變化弧度平緩，表明試驗(yàn)因素對(duì)響應(yīng)值影響程度較小，反之則表示影響較大；等高線形狀反映因素間交互影響的強(qiáng)弱，橢圓形表示因素間交互影響顯著，圓形則表示交互作用影響不顯著[19-22]。由圖10、 圖11可知， 裝液量對(duì)鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率的影響大于接種量、葡萄糖添加量。由圖12可知，響應(yīng)面弧度陡峭，等高線呈橢圓形，說(shuō)明接種量和葡萄糖添加量都對(duì)鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率有交互影響，且二者的交互影響顯著。

2.2.4 模型驗(yàn)證 通過(guò)對(duì)鹿角靈芝液體發(fā)酵工藝的優(yōu)化，得到鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率的最佳工藝條件：裝液量為 150.58 mL，接種量為11.08%，葡萄糖添加量為3.32%，在此條件下鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率為13.16%。 考慮到試驗(yàn)實(shí)際操作性，將最佳發(fā)酵工藝調(diào)整為裝液量151 mL、接種量11%、葡萄糖添加量3.3%。在此工藝條件下做5次平行試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，得到鹿角靈芝胞內(nèi)多糖的實(shí)際得率為12.94%，與預(yù)測(cè)值相對(duì)誤差小于5%，表明該方程與實(shí)際情況擬合良好，相應(yīng)優(yōu)化模型真實(shí)可行，具有指導(dǎo)生產(chǎn)的實(shí)用價(jià)值。

3 討論

靈芝多糖是靈芝中發(fā)現(xiàn)較早的有效成分，也是衡量靈芝保健功能的一個(gè)主要指標(biāo)。之前的研究已證明，靈芝菌絲體中的靈芝多糖的含量普遍高于傳統(tǒng)人工栽培或野生靈芝中的靈芝多糖含量[23]，加上液態(tài)深層發(fā)酵技術(shù)的日趨成熟，使得深層發(fā)酵制備靈芝多糖變成獲取靈芝功能成分的主要方向[24-27]。

深層發(fā)酵是一種將微生物細(xì)胞置于底物中培養(yǎng)，最終達(dá)到表面培養(yǎng)形成鮮明對(duì)照狀態(tài)的技術(shù)。隨著抗生素發(fā)酵技術(shù)的發(fā)展，食用菌深層發(fā)酵工藝也逐漸成為研究熱點(diǎn)，目前，靈芝深層發(fā)酵的研究主要集中在培養(yǎng)基和發(fā)酵工藝優(yōu)化方面。有研究發(fā)現(xiàn)：靈芝深層發(fā)酵多以葡萄糖、蔗糖、玉米粉為最適碳源，且碳源添加量不宜超過(guò)3%，這是由于靈芝為低糖發(fā)酵，糖濃度過(guò)高會(huì)造成菌絲體細(xì)胞脫水死亡[28]；氮源是靈芝深層發(fā)酵的重要成分，有機(jī)復(fù)合氮源比無(wú)機(jī)氮源更有利于功能成分的合成；由于鉀對(duì)糖酵解有促進(jìn)作用，糖代謝過(guò)程受磷酸鹽的影響，鎂影響碳源的氧化，因此靈芝深層發(fā)酵中最重要的無(wú)機(jī)鹽為鉀、鎂、磷酸鹽[29]；深層發(fā)酵中的裝液量會(huì)影響溶氧量，而氧含量對(duì)多糖合成又有顯著促進(jìn)作用，因此裝液量通常為30%左右[30]。從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，本研究?jī)?yōu)化得到的鹿角靈芝液體發(fā)酵產(chǎn)胞內(nèi)多糖工藝條件，與前人研究靈芝液體發(fā)酵產(chǎn)胞內(nèi)多糖條件相近。譚才鄧等以靈芝胞內(nèi)多糖為指標(biāo)，采用麥芽糖含量為2%、酵母提取粉含量為2%、ZnSO4含量為0.015%、維生素B1含量為0.1%、KH2PO4含量為0.2%、MgSO4含量為0.05%的培養(yǎng)基組合，最終胞內(nèi)多糖產(chǎn)量為6.64%[31]。相比之下，本試驗(yàn)培養(yǎng)基的優(yōu)勢(shì)在于構(gòu)成簡(jiǎn)單，原料利用了農(nóng)產(chǎn)品及加工副產(chǎn)物，價(jià)格低廉，且經(jīng)響應(yīng)面優(yōu)化靈芝胞內(nèi)多糖得率達(dá)12.94%，高于相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的靈芝深層發(fā)酵胞內(nèi)多糖得率，但本試驗(yàn)參數(shù)為搖瓶水平，擴(kuò)大生產(chǎn)培養(yǎng)至生產(chǎn)水平仍需進(jìn)一步進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)作理論參考。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)以鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率為指標(biāo)，通過(guò)單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面法優(yōu)化液體發(fā)酵培養(yǎng)工藝，確定最佳發(fā)酵工藝條件為20%馬鈴薯、3.3%葡萄糖、3%麥麩、0.2% KH2PO4、0.1% MgSO4，初始pH值=7.0，接種量為11%，500 mL三角瓶裝液量為151 mL，轉(zhuǎn)速為150 r/min，發(fā)酵時(shí)間為82 h。在此發(fā)酵工藝下，鹿角靈芝胞內(nèi)多糖得率為12.94%，與優(yōu)化模型預(yù)測(cè)值13.16%相比，相對(duì)誤差小于5%，表明該優(yōu)化模型真實(shí)可行，對(duì)生產(chǎn)有一定的實(shí)用價(jià)值。