屈曉輝，鄧穎輝

(江西省婦幼保健院病理科，南昌 330006)

卵巢癌為婦科常見(jiàn)惡性腫瘤之一，其死亡率位于婦科惡性腫瘤之首[1]，隨著年齡的增長(zhǎng)，發(fā)病率明顯增高，嚴(yán)重威脅婦女健康，卵巢癌的預(yù)后同臨床分期緊密聯(lián)系，由于各種因素影響，至今缺乏有效的診斷方法，發(fā)現(xiàn)的卵巢癌多數(shù)已經(jīng)處于晚期[2]，存活率仍較低，卵巢癌及早診治能明顯提高患者的生存率，因此早期診斷卵巢癌對(duì)于患者預(yù)后的改善得尤為重要。

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β（transforming growth factor β，TGF-β）是細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子，可促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)形成，促進(jìn)新生血管形成[2]，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖與分化，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。TGF-β1是一種分子質(zhì)量為25KD的多肽，是TGF-β在人體內(nèi)的主要存在形式。我們從病理學(xué)的角度，對(duì)TGF-β1進(jìn)行檢測(cè)分析，探討TGF-β1在卵巢漿液性腺癌中的表達(dá)及其臨床意義，為卵巢癌臨床診斷及治療提供重要參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選擇江西省婦幼保健院2010年至2018年間130例各級(jí)卵巢漿液性腫瘤手術(shù)標(biāo)本蠟塊（包含卵巢漿液性囊腺瘤40例、卵巢交界性漿液性囊腺瘤40例及卵巢漿液性腺癌50例），以同期卵巢漿液性囊腺瘤標(biāo)本作為對(duì)照，所選病例手術(shù)前期未進(jìn)行任何放化療，相關(guān)臨床病理資料完善，病理診斷均明確，排除其他組織學(xué)類(lèi)型。

1.2 試劑 一抗TGF-β1、二抗試劑盒及DAB顯色液均購(gòu)自福建邁新生物有限公司。

1.3 方法

1.3.1 制作組織芯片 設(shè)計(jì)7×11點(diǎn)陣的芯片，共77個(gè)位點(diǎn)，其中7個(gè)點(diǎn)做空白定位（如圖1、圖2）；根據(jù)設(shè)計(jì)將受體蠟塊進(jìn)行打孔，孔徑大小與供體組織鉆取孔徑大小一致；對(duì)供體組織HE切片作形態(tài)學(xué)觀(guān)察并在供體蠟塊上準(zhǔn)確標(biāo)記所需要的靶點(diǎn)；利用打孔儀鉆取靶點(diǎn)組織，每個(gè)病例同時(shí)鉆取兩塊腫瘤組織，并分別轉(zhuǎn)移至兩個(gè)受體蠟塊相應(yīng)的孔位上，制成所需的陣列蠟塊；將制成的陣列蠟塊面朝下放入金屬包埋盒中，灌蠟并輕壓蠟塊使組織芯排平，待冷卻后放入65℃烤箱內(nèi)維持45min；最后將蠟塊從烤箱內(nèi)拿出，待其冷卻。

1.3.2 免疫組織化學(xué) 組織芯片4μm厚切片，采用免疫組化SP法，按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)操作（圖3）。

1.3.3 組織學(xué)分級(jí) 依據(jù)2014版WHO分類(lèi)系統(tǒng)，將卵巢漿液性腺癌分為高級(jí)別漿液性腺癌和低級(jí)別漿液性腺癌兩種。

1.3.4 評(píng)估標(biāo)準(zhǔn) 鏡下觀(guān)察TGF-β1的表達(dá)情況，計(jì)數(shù)細(xì)胞漿內(nèi)有黃色或棕黃色顆粒狀物的陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)，對(duì)TGF-β1蛋白表達(dá)進(jìn)行分析，染色強(qiáng)度根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比進(jìn)行半定量分級(jí)：陽(yáng)性細(xì)胞率=0為 0級(jí)，＜10%為 1級(jí)，10%～50%為 2級(jí)，50%～80%為3級(jí)，＞80%為4級(jí)；結(jié)果判斷：陽(yáng)性細(xì)胞百分比＜10%為陰性，10%～100%為陽(yáng)性。

圖1

圖2

圖3

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，組間差異性比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TGF-β1在各級(jí)卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)TGF-β1在卵巢各級(jí)漿液性腫瘤中均有表達(dá)，在卵巢漿液性腺癌組表達(dá)陽(yáng)性率為86.0%，顯著高于卵巢交界性漿液性囊腺瘤組（45.0%）和卵巢漿液性囊腺瘤組(17.5%)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P＜0.05)；且卵巢交界性漿液性囊腺瘤組TGF-β1陽(yáng)性率明顯高于卵巢漿液性囊腺瘤組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)（圖 4 及表 1）。

2.2 TGF-β1的表達(dá)水平與卵巢漿液性腺癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系 卵巢漿液性腺癌中，Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ期患者腫瘤TGF-β1的表達(dá)陽(yáng)性率為93.2%，顯著高于Ⅰ期患者TGF-β1的表達(dá)陽(yáng)性率33.3%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；伴有腫瘤種植/轉(zhuǎn)移患者TGF-β1的表達(dá)陽(yáng)性率為93.0%，顯著高于不伴有腫瘤種植/轉(zhuǎn)移患者TGF-β1的表達(dá)陽(yáng)性率42.9%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；不同年齡分布和不同組織學(xué)分級(jí)的患者TGF-β1的表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（表2）

3 討論

腫瘤是在多種因素共同作用下形成的，其發(fā)生發(fā)展是多種因素影響的復(fù)雜過(guò)程。卵巢癌以上皮性癌居多，其中卵巢漿液性腺癌是上皮性癌中最常見(jiàn)的病理類(lèi)型。晚期卵巢癌的治療原則是以手術(shù)為主的綜合治療，即術(shù)中盡可能切凈腫瘤，為術(shù)后化療打下基礎(chǔ)，但對(duì)于位于一些重要臟器的轉(zhuǎn)移灶和一些小轉(zhuǎn)移灶，術(shù)中處理往往比較棘手。因此，為尋求有效的診斷和治療方案，卵巢癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的機(jī)制一直是婦科腫瘤基礎(chǔ)與臨床研究探索的重點(diǎn)。

表1 TGF-β1在各級(jí)卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)

圖4 TGF-β1在各級(jí)卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)，SP法：A.卵巢漿液性囊腺瘤；B.卵巢交界性漿液性囊腺瘤；C.卵巢漿液性腺癌

表2 卵巢漿液性腺癌中TGF-β1的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

TGF-β(transforming growth factor beta，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β)是一種多功能的多肽類(lèi)細(xì)胞因子，哺乳動(dòng)物組織中存在3種TGF-β亞型：TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3，其中TGF-β1最為重要。幾乎體內(nèi)的所有細(xì)胞都能產(chǎn)生TGF-β并存在其受體，參與細(xì)胞的分化、增殖、轉(zhuǎn)移、形態(tài)的改變以及凋亡等，在機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞生長(zhǎng)和分化、腫瘤免疫等發(fā)面均起到了重要的作用。人類(lèi)TGF-β1基因定位于染色體19q3，含有7個(gè)外顯子，其5ˊ端序列含有5個(gè)調(diào)控區(qū)：1個(gè)類(lèi)增強(qiáng)子活性區(qū)，2個(gè)負(fù)調(diào)控區(qū)和2個(gè)啟動(dòng)子區(qū)。

通常TGF-β1對(duì)正常上皮細(xì)胞發(fā)揮生長(zhǎng)抑制作用，在惡性腫瘤發(fā)展過(guò)程中，TGF-β1起著雙向調(diào)節(jié)作用。在腫瘤發(fā)生早期，TGF-β1發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)因子作用抑制腫瘤形成。隨著腫瘤的進(jìn)展，TGF-β1可通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤周?chē)|(zhì)環(huán)境改變，促進(jìn)新生血管生成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移，抑制宿主免疫系統(tǒng)殺傷腫瘤細(xì)胞等方式發(fā)揮免疫耐受和免疫逃逸，加劇腫瘤生長(zhǎng)與形成[8-12]。

本研究結(jié)果顯示TGF-β1在卵巢漿液性囊腺瘤、卵巢交界性漿液性囊腺瘤及卵巢漿液性腺癌中均有表達(dá)，且在卵巢漿液性腺癌中呈高表達(dá)；與卵巢交界性漿液性囊腺瘤及卵巢漿液性囊腺瘤相比，TGF-β1在卵巢漿液性腺癌組織中的表達(dá)水平顯著升高；與卵巢漿液性囊腺瘤相比，TGF-β1在卵巢交界性漿液性囊腺瘤組織中的表達(dá)水平亦顯著升高，提示TGF-β1的過(guò)表達(dá)在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。

近年較多文獻(xiàn)[3-5]報(bào)道TGF-β表達(dá)水平的測(cè)定對(duì)了解乳腺癌、胃癌、肝癌、肺癌等惡性腫瘤進(jìn)展、判斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、術(shù)后監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)及評(píng)估預(yù)后等諸方面均有較重要意義[15，16]。

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的先決條件，目前TGF-β1被認(rèn)為是誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的最重要的生長(zhǎng)因子。

在本研究中，我們進(jìn)一步對(duì)卵巢漿液性腺癌患者TGF-β1表達(dá)水平與卵巢癌的FIGO分期和癌組織的種植/轉(zhuǎn)移的關(guān)系進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示Ⅱ-Ⅳ期卵巢癌患者腫瘤組織中TGF-β1表達(dá)水平均高于I期，且卵巢癌組織中TGF-β1的表達(dá)水平與腫瘤的種植/轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而卵巢癌組織中TGF-β1的表達(dá)水平與病人的年齡分布及腫瘤組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)，提示TGF-β1的顯著增加發(fā)生在卵巢癌晚期，可能是晚期卵巢癌增加的TGF-β1可誘導(dǎo)腫瘤血管生成，從而促進(jìn)卵巢癌的發(fā)展。

TGF-β1表達(dá)水平與腫瘤不同臨床分期、腫瘤是否種植/轉(zhuǎn)移相關(guān)，表明TGF-β1表達(dá)指數(shù)對(duì)臨床分期有一定價(jià)值，臨床上結(jié)合TGF-β1水平的檢測(cè)，一定程度上可以對(duì)卵巢腫瘤的生物學(xué)行為進(jìn)行評(píng)估，并判定其危害性，評(píng)估腫瘤的預(yù)后情況，反映腫瘤細(xì)胞目前的活性狀態(tài)。

此外，在一些實(shí)體惡性腫瘤研究[6，7]中發(fā)現(xiàn)TGF-β的表達(dá)有助于誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)展和耐藥性的產(chǎn)生。

綜上所述，卵巢癌患者呈現(xiàn)免疫耐受狀態(tài)，TGF-β1表達(dá)水平與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展及種植/轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，TGF-β1水平可為卵巢癌的臨床診斷、病情監(jiān)提供重要的參考價(jià)值，檢測(cè)TGF-β表達(dá)水平對(duì)指導(dǎo)臨床治療可能有重要臨床應(yīng)用價(jià)值，并有可能成為卵巢癌控制轉(zhuǎn)移的靶點(diǎn)。