李 青

（遼陽市疾病預(yù)防控制中心，遼寧 遼陽 111000）

放射線是通過利用不穩(wěn)定元素的衰變過程中釋放出的具有較強(qiáng)穿透性的粒子束如β粒子、γ射線以及常見的X射線等，對工業(yè)設(shè)備質(zhì)量、地下礦物情況以及電鍍厚度等進(jìn)行檢測，從而在多個領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用，但放射線對人體均具有不同程度的傷害。長期低劑量的接觸放射線會導(dǎo)致放射人員的外周血淋巴細(xì)胞發(fā)生畸變，主要會表現(xiàn)出淋巴細(xì)胞染色體畸變陽性率以及微核陽性率的上升，從而對放射人員的機(jī)體健康造成不良影響。從事放射工作人員在入職、在職期間及離職要進(jìn)行定期的職業(yè)健康檢查，以確定射線對人體損傷程度[1-2]。臨床主要通過對放射人員的外周血淋巴細(xì)胞畸變進(jìn)行檢測以判斷射線對受檢者機(jī)體的傷害程度。

染色體制備過程復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)中的影響因素很多，并且目前各地方實(shí)驗(yàn)室對外周血淋巴細(xì)胞微核檢測的標(biāo)準(zhǔn)仍在探索階段，為提高染色體分裂相檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，對遼陽市各醫(yī)療機(jī)構(gòu)及各企業(yè)接觸放射線的工作人員共計(jì)553名（男482名，女71名，年齡在20～55歲，放射工作工齡在6個月至30年不等）的外周血培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，其中83例培養(yǎng)收獲后外周血淋巴細(xì)胞標(biāo)本在油鏡下檢測染色體分裂相數(shù)量少、分散度不好，有重疊，染色體上、下臂短，影響染色體核型分析?，F(xiàn)將可能存在的原因分析如下：

1.一方面培養(yǎng)基培養(yǎng)時間太短，未轉(zhuǎn)化的、脹大的淋巴細(xì)胞較多，分裂相少，通過多次培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)延長5～7 h培養(yǎng)時間，油鏡下 鏡檢發(fā)現(xiàn)收獲的染色體分裂相清晰、分散度更好。

2.另方面培養(yǎng)溫度影響，溫度＜（37±0.5） ℃細(xì)胞生長速度減慢，影響細(xì)胞分裂周期，這樣規(guī)定培養(yǎng)時間內(nèi)收獲染色體的分裂相就少，影響染色體畸變分析。溫度高于（37±0.5） ℃時，細(xì)胞受損或死亡。

3.采集的血液未及時接種到培養(yǎng)基，會造成細(xì)胞的死亡，即使之后再接種到RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞分裂中期的分裂相也會非常少的，影響染色體畸變分析。

4.在收獲細(xì)胞前必須確保所有步驟均是無菌操作，預(yù)防細(xì)菌或病毒的污染。體外細(xì)胞失去了機(jī)體免疫機(jī)制的保護(hù)而容易受到病原菌感染而死亡，因此需要全力確保檢測過程對污染情況的嚴(yán)格防控，可使用無菌注射器進(jìn)行接種，并用酒精對培養(yǎng)裝置進(jìn)行反復(fù)消毒。

5.秋水仙素具有阻止細(xì)胞分裂過程中的紡錘絲形成的作用，并能使已經(jīng)形成的微管解聚、促使DNA復(fù)制以及有關(guān)蛋白質(zhì)的合成過程，從而使細(xì)胞分裂過程停留在分裂中期，能夠令檢測人員良好的觀察染色體的形態(tài)。秋水仙素的濃度越高或作用時間越長，會導(dǎo)致染色體的形態(tài)變短變粗，不利于觀測染色體的真實(shí)形態(tài)，同時秋水仙素的濃度加大，紅細(xì)胞的凝集作用增強(qiáng)，甚至可能發(fā)生溶血，不利于淋巴細(xì)胞生長，因此需要對秋水仙素的濃度以及作用的時間進(jìn)行嚴(yán)格控制，以獲得適宜的染色體形態(tài)[3]。

6.在對細(xì)胞進(jìn)行染色時，應(yīng)控制考緩沖液的酸堿性，采用堿性緩沖液能夠有效提高被乙酸浸潤后酸堿度下降的淋巴細(xì)胞的著色效果，為避免大量的樣本玻片架承載玻片染色時，反復(fù)浸泡會導(dǎo)致染液堿度下降，可適時補(bǔ)充強(qiáng)堿以維持染液有效的堿度。

7.低滲過程是染色體制備過程中非常重要的一個步驟，在加入低滲液之后需要立即對其進(jìn)行吹打以沖散細(xì)胞團(tuán)塊，并進(jìn)行輕柔以防止細(xì)胞破碎。低滲的時間一般為15 min左右，若低滲處理時間過長，可能導(dǎo)致細(xì)胞膜破碎而丟失染色體；若低滲處理時間過短，則會導(dǎo)致細(xì)胞膨脹不夠而使染色體的分散情況不良好，容易呈現(xiàn)為團(tuán)狀，不能對染色體進(jìn)行準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)分析。在低滲處理之后，細(xì)胞已經(jīng)膨脹而容易出現(xiàn)過早破裂的情況，從而導(dǎo)致分裂的細(xì)胞丟失，因此需要在低滲處理后控制好操作力度，維持細(xì)胞的完整性，并能使所得到的染色體輪廓清晰并利于染色。

8.在滴片時，需要控制好距離、滴加量以及制片方式，應(yīng)當(dāng)選取病理級的玻片并冰凍4 h以上后為冰片，以使細(xì)胞良好的附著在玻片上利于染色體分散；在進(jìn)行滴片操作時，需要先吸取少量的細(xì)胞懸液并在玻片上方25 cm左右滴下，每一片玻片3～4滴即可，滴完后在酒精燈外焰過火并晾冷。滴片后需要控制好加熱溫度[4-9]，避免溫度不足導(dǎo)致染色體分散情況差，或溫度抬高導(dǎo)致染色體形態(tài)發(fā)毛、不清晰，并且使分裂相不完整。

人休淋巴細(xì)胞染色體畸變率，是人體輻射損傷程度的黃金標(biāo)準(zhǔn)，想要保障人體淋巴細(xì)胞染色體分裂相分析結(jié)果準(zhǔn)確性，制備過程是最關(guān)鍵的步驟，制備染色體過程復(fù)雜而繁瑣，要嚴(yán)格按照全血直接培養(yǎng)法的操作規(guī)程來操作，提高染色體制備的成功率，為人工制備標(biāo)本和人工分析判斷畸變提供保障。