文│肖和良（湖南省洞口縣畜牧水產(chǎn)局）

2019年5月，中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所自主研發(fā)的非洲豬瘟疫苗取得階段性成果。本文研究了滅活疫苗、減毒疫苗、基因重組疫苗三種主要疫苗和非洲豬瘟疫苗研制難點，總結(jié)了防控非洲豬瘟中國模式。防控非洲豬瘟疫苗和有效藥物產(chǎn)品還需一定時間，必須做好抗擊非洲豬瘟持久戰(zhàn)的準備。

一、對疫苗制作方法的研究

疫苗主要有三種：滅活疫苗、減毒疫苗、基因重組疫苗。

滅活疫苗：分離出病毒以后，經(jīng)過一些方法處理，讓病毒完全喪失活性，將其輸入動物體內(nèi)，即不會使動物染病，又可以使動物產(chǎn)生抗體，達到抵御病毒入侵的目的。滅活疫苗被認為研制周期最短，最有可能獲得突破的疫苗。但這種疫苗不穩(wěn)定，有基因突變的可能性，如果滅活不徹底，還可能對動物造成傷害。

減毒疫苗：使病毒繁殖很多代，甚至上百代，逐漸去除病毒大部分活性，再將其做成疫苗，成為安全有效的滅活疫苗。滅活疫苗是死疫苗，安全性高，不足之處是它只能激發(fā)動物部分免疫力，且需要多次接種。相比之下，減毒活疫苗免疫力強，作用時間長，但存在潛在致病危險，安全性稍差。

基因重組疫苗（也稱基因工程疫苗）：通過實驗，找到病原微生物表面抗原分子的各種基因片段，經(jīng)過篩選，得到對病原微生物來說，最易識別、特異性最高，其他生物體沒有而又容易引起機體免疫應答的基因片段，把它重組到動物細胞表達系統(tǒng)中，產(chǎn)生相應的蛋白質(zhì)，再把這些蛋白質(zhì)注入動物體內(nèi)做免疫試驗，觀察產(chǎn)生抗體的效果。這種方式獲得的疫苗較滅活疫苗過程更為復雜，需要通過多次實驗確保安全有效。

研制一個安全有效的疫苗，即能刺激動物產(chǎn)生免疫抗體，又不能對動物造成傷害。按正常操作，最快也要2年時間，還要經(jīng)過5年甚至更長時間來完善。

在實驗室研究被證明有免疫性和保護率的疫苗，進入臨床（小試、中試）與實驗室試驗免疫效果有一定距離。進入臨床被證實疫苗穩(wěn)定性、具有免疫保護率，才能批準進行工廠化生產(chǎn)，形成疫苗產(chǎn)品，大面積推廣。

疫苗制作過程：分離出病毒→鑒定→實驗室培養(yǎng)→提純→“殺死”它們→成為初級滅活疫苗→輸入動物體內(nèi)→判斷疫苗免疫效果、安全性→臨床試驗→國家審批→最終生物工廠化批量（量產(chǎn)）生產(chǎn)疫苗。

人類研制疫苗歷史上有過很多經(jīng)驗教訓。如小兒麻痹疫苗，在動物模型試驗非常成功，進行人體試驗時，還有1/3試驗者感染發(fā)病而癱瘓。腦膜炎疫苗在人體試驗也引起非常嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)疾病和反應。

2002年5月，筆者到衛(wèi)生部廣東順德動物研究所參觀。該所溫室喂養(yǎng)各類猴子1200多頭，國家各種人藥、疫苗在猴子身上試驗，驗證有效率、副反應以及安全性。美國、日本、德國、英國、俄羅斯、法國等9個國家與該所合作開展藥物試驗業(yè)務(wù)。因此人用疫苗多了一道程序，就是動物試驗這一關(guān)。因此動物疫苗較人用疫苗時間節(jié)省一年以上。

二、中國研制非洲豬瘟疫苗最新進展

目前全球8個國家15個研究所正致力于ASF（非洲豬瘟）疫苗研發(fā)。中國于2019年1月也啟動了ASFV基因缺失活疫苗研發(fā)項目。全球首個ASFV基因Ⅱ型毒株野豬口服疫苗（屬于ASFV基因突變疫苗），于2019年3月被西班牙國家暨世界動物衛(wèi)生組織（OIE）非洲豬瘟病毒研究實驗室主任、馬德里康普頓斯大學獸醫(yī)衛(wèi)生監(jiān)測中心教授何塞·馬紐埃爾比·桑切斯·斯凱諾（Jose Manuel Sanchez-Vizcoino）研制，在野豬上小試成功，取得92%保護率效果，雖然還未完成家豬試驗，但看到了戰(zhàn)勝非洲豬瘟的曙光。

中國有防治非洲豬瘟科技實力。國家級防控動物疫病科研機構(gòu)有國家外來動物疫病研究中心、中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所和中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州畜牧與獸藥研究所等。國家外來動物疫病研究中心為國家外來動物疫病技術(shù)支撐單位，負責外來動物疫病的系統(tǒng)研究、診斷、檢測、監(jiān)測、風險分析及防控策略研究。哈爾濱獸醫(yī)研究所和蘭州畜牧與獸藥研究所有國家級動物疫苗、獸藥研究實驗室，有能力研制防控非洲豬瘟疫苗和有效藥物。2019年5月24日，由中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所自主研發(fā)的非洲豬瘟疫苗取得階段性成果。中國在非洲豬瘟疫苗創(chuàng)制階段主要取得五項進展：

1.分離中國第一株非洲豬瘟病毒。建立了病毒細胞分離及培養(yǎng)系統(tǒng)和動物感染模型，對其感染性、致病力和傳播能力等生物學特性進行了較為系統(tǒng)的研究。2019年3月25日哈爾濱獸醫(yī)研究所公布：參加攻關(guān)組的趙東明、劉任強等人利用2018年9月3日黑龍江佳木斯疫情發(fā)病豬樣品，接種豬原代肺泡巨噬細胞，成功分離出中國第一個非洲豬瘟病毒毒株（Pig/HLJ/18）。

2.創(chuàng)制了非洲豬瘟候選疫苗。實驗室階段研究證明其中兩個候選疫苗株具有良好的生物安全性和免疫保護效果。

3.兩種候選疫苗株體外和體內(nèi)遺傳穩(wěn)定性強。分別將兩種候選疫苗株在體外原代細胞中連續(xù)傳代，其生物學特性及基因組序列無明顯改變，豬體內(nèi)連續(xù)傳代，也未發(fā)現(xiàn)明顯毒力返強現(xiàn)象。

4.明確了最小保護接種劑量，證明大劑量和重復劑量接種安全。

5.臨床前中試產(chǎn)品工藝研究初步完成。已建立兩種候選疫苗的生產(chǎn)種子庫，初步完成了疫苗生產(chǎn)種子批純凈性及外源病毒檢驗，初步優(yōu)化了候選疫苗的細胞培養(yǎng)及凍干工藝。中國非洲豬瘟疫苗研究成果處于國際領(lǐng)先地位。

中國農(nóng)業(yè)科學院非洲豬瘟防控科技攻關(guān)項目組已完成了非洲豬瘟病毒全基因組測定，篩選出多個天然免疫抑制性病毒基因，完成部分基因免疫抑制機制研究；研制出檢測速度快、敏感性及特異性高、穩(wěn)定性好的病毒核酸和抗原類快速檢測試劑盒。研究人員還采集到拉合爾鈍緣蜱、全溝硬蜱、草原革蜱等12個蜱種，進行人工培養(yǎng)和生活史觀察，篩選出快速消殺化學藥物新組方和植物源殺蟲劑有效組方；篩選出復合季銨鹽消毒劑配方，完成了中試生產(chǎn)研究。下一步將在實驗室階段研究進展的基礎(chǔ)上，加快推進中試與臨床試驗以及疫苗生產(chǎn)的各項研究工作，盡快完成免疫機制、診斷檢測、消毒滅蟲技術(shù)等方面的研究。

這些重大科研項目成果取得來之不易。中國農(nóng)業(yè)科學院在我國非洲豬瘟發(fā)生后，第一時間組建非洲豬瘟防控科技攻關(guān)項目組，由哈爾濱獸醫(yī)研究所牽頭，蘭州獸醫(yī)研究所、北京畜牧獸醫(yī)研究所、上海獸醫(yī)研究所、蘭州畜牧與獸藥研究所、中國農(nóng)業(yè)科學院飼料研究所為成員單位，集聚精干力量組建攻關(guān)團隊，并設(shè)立科技創(chuàng)新專項經(jīng)費支持，以疫苗研發(fā)為重點，夜以繼日，加班加點，緊急開展疫苗免疫機制、診斷檢測、消毒滅蟲技術(shù)等聯(lián)合攻關(guān)。

三、做好抗擊非洲豬瘟持久戰(zhàn)的準備

1.非洲豬瘟疫苗研制難點和最終產(chǎn)品形成所需時間的討論。由于非洲豬瘟病毒是一種DNA病毒，擁有雙鏈DNA結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)復雜、基因組龐大，24個基因型；病毒編碼超過150多種蛋白?；虿环€(wěn)定，隨時有突變的可能。哈爾濱獸醫(yī)研究所研發(fā)人員表示，動物有細胞免疫和體液免疫，不同動物疫苗的研發(fā)難點不一樣，非洲豬瘟疫苗難點在于滅活疫苗不好用。以前滅活苗能夠起保護作用，主要是體液免疫占了主要作用，產(chǎn)生中和抗體就能保護。對于非洲豬瘟而言，體液免疫只是產(chǎn)生部分保護，起主要作用的是細胞免疫。并且該病毒沒有一個好的繁殖系統(tǒng)，正常的病毒都有很好的細胞系進行擴增，非洲豬瘟病毒卻沒有，需要豬原代細胞進行培養(yǎng)，意味著需要很多SPF豬的臟器來進行非洲豬瘟病毒的培養(yǎng)。因此國際專家Linda Dixon博士認為，對于非洲豬瘟而言，研制時間最短的滅活疫苗無法使用，需要減毒活疫苗或基因工程疫苗，結(jié)論是：非洲豬瘟疫苗研發(fā)完成需要更長時間，所以中國農(nóng)業(yè)科學院制定《非洲豬瘟防控科研計劃（2018—2022）》，就是考慮到了非洲豬瘟疫苗研發(fā)有很大難度。但非洲豬瘟疫苗研發(fā)取得階段性成果，極大鼓舞了中國人戰(zhàn)勝非洲豬瘟的信心。

筆者認為，中國有強大的疫苗研發(fā)科技實力，加上攻關(guān)項目組專家加班加點，吃苦耐勞精神，攻克難關(guān)，極大縮短研發(fā)時間，相信中國最終會生產(chǎn)出非洲豬瘟疫苗產(chǎn)品，或許2年內(nèi)就可以完成。

2.中國邊境國家和國際防控非洲豬瘟形勢嚴峻。俄羅斯2007年傳染非洲豬瘟以來，至2019年一直沒有撲滅非洲豬瘟。2019年東南亞國家越南、柬埔寨暴發(fā)非洲豬瘟疫病，中國動物衛(wèi)生與流行病學中心副主任黃保續(xù)分析非洲豬瘟跨國境傳入途徑主要有四類：生豬及產(chǎn)品國際貿(mào)易和走私；國際旅客攜帶豬肉及產(chǎn)品；國際運輸工具上的餐廚剩余物；野豬遷徙。

國家外來動物疫病研究中心完成了首發(fā)病例的非洲豬瘟病毒沈陽毒株基因排序檢測，B646L/p72基因序列417個堿基與俄羅斯毒株 100% 匹配，與俄羅斯和東歐目前流行的格魯吉亞毒株（Georgia 2007）屬于同一進化分支，懷疑從俄羅斯跨國境傳入。

3.創(chuàng)建防控非洲豬瘟中國模式。防控非洲豬瘟沒有固定的模式。中國創(chuàng)建了分區(qū)域防控，加強“種豬場、規(guī)模場”兩場以及周邊地區(qū)非洲豬瘟緊急排查，加強養(yǎng)豬場生物安全體系建設(shè)，“點對點”生豬調(diào)運，運載工具備案消毒以及運輸路線管理，外調(diào)生豬和屠宰場生豬及其產(chǎn)品非洲豬瘟病毒檢測，加強官方獸醫(yī)配置和產(chǎn)地檢疫、屠宰檢疫，打擊豬肉產(chǎn)品走私，禁止餐廚剩余物喂豬，疫病豬撲殺無害化處理以及對撲殺無害化處理豬給予財政補貼，設(shè)立公路（含高速公路）動物檢疫站等防控非洲豬瘟模式。全國非洲豬瘟疫情呈現(xiàn)多點散發(fā)、趨于平穩(wěn)、防控有效、總體可控的態(tài)勢。2019年1月以來，中國非洲豬瘟傳播速度放緩，疫情總體可控，防控態(tài)勢逐步向好。

四、總結(jié)

鑒于國際防控非洲豬瘟嚴峻形勢以及防控非洲豬瘟疫苗和有效藥物產(chǎn)品還需2年以上時間，我們必須做好抗擊非洲豬瘟持久戰(zhàn)的準備。