FAO/WHO用于植物保護和公共衛(wèi)生的生物農(nóng)藥登記指南(三)━━微生物農(nóng)藥

2019-01-05 05:49:48農(nóng)向群袁善奎曹兵偉周艷明王以燕

世界農(nóng)藥 2018年6期

農(nóng)向群，袁善奎，曹兵偉，周艷明，王以燕*

(1.中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所植物病蟲害生物學國家重點實驗室，北京 100193；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京 100125)

2017年，F(xiàn)AO/WHO聯(lián)合發(fā)布《用于植物保護和公共衛(wèi)生的微生物、植物源和化學信息素類的生物農(nóng)藥登記指南》(Guidelines for the registration of microbial, botanical and semiochemical pest control agents for plant protection and public health uses)，簡稱《指南》，用于取代1988年FAO出版的“生物農(nóng)藥的登記”。為方便讀者對國際組織在生物農(nóng)藥登記領域的了解，此次介紹其中微生物農(nóng)藥部分。

我國微生物農(nóng)藥發(fā)展較早，已注冊登記的有效成分(細菌、真菌、病毒等)相對較多。在2017年新《農(nóng)藥登記資料要求》中，對微生物農(nóng)藥登記資料要求有些變化，一是首次明確了有效成分的名稱、分類地位(如科屬、種、亞種、株系、致病變種或其他及菌株代號)及菌種來源、寄主范圍說明和菌種鑒定等；二是規(guī)定了其含量單位，如芽孢、孢子、國際/毒力單位(ITU/IU)、菌落形成單位(CFU)、包含體(IB/OB)等；三是更加關注微生物農(nóng)藥的安全性，要求采用有別于化學農(nóng)藥的專門的試驗準則，評價方法更加科學?！吨改稀肥寝r(nóng)藥管理的國際行為守則，對合理規(guī)范我國微生物農(nóng)藥登記具有重要參考價值和指導意義。

1 術語定義

為統(tǒng)一起見，下列定義與OECD，US EPA及EU等國際組織來源的定義保持一致。

1.1 抗生作用(Antibiosis)

抗生作用指2種或2種以上物種之間的關系，其中一種物種受到其他物種的嚴重傷害(例如，被產(chǎn)生毒素所傷害)。

1.2 抗原(Antigenic)

任何物質(zhì)與適當細胞接觸后，在潛伏期(數(shù)天至數(shù)周)后能誘導敏感性和(或)免疫反應，該反應在離體或活體條件下能夠以致敏受試體的抗體和(或)免疫細胞形式表現(xiàn)出來。

1.3 抗菌劑(Antimicrobial Agents)

抗菌劑是可殺死微生物或抑制微生物生長的天然、半合成或合成物質(zhì)，如抗生素，可抑制細菌生長；抗球蟲藥，可抑制球蟲、單細胞寄生性原生蟲生長。

1.4 菌落形成單位(CFU)

菌落形成單位指單個或多個細胞形成單個可見的菌落。

1.5 定植(Colonization)

定植是微生物在機體外部環(huán)境(如皮膚)，也可在內(nèi)部環(huán)境(如腸、肺)繁殖、持續(xù)存在的現(xiàn)象。定植微生物應至少在某器官上持續(xù)比預期更長的時間。微生物數(shù)量可能會下降，但比正常清除速度慢；其數(shù)量也可能保持穩(wěn)定或增長。定植微生物可能是無害的和功能性的微生物，也可能是致病性微生物。沒有指出可能出現(xiàn)的影響。

1.6 污染物或雜質(zhì)(Contaminant or impurity)

污染物或雜質(zhì)指產(chǎn)品中除了微生物農(nóng)藥(MPCA)的特定微生物(或其產(chǎn)生的物質(zhì))外，還存在的任何其他微生物或物質(zhì)；MPCA的取代物或突變體形式被認為是微生物雜質(zhì)。

1.7 生態(tài)位(Ecological niche)

生態(tài)位指一個特定物種或種群在環(huán)境所處的獨特位置，可以理解為在群落或生態(tài)系統(tǒng)里所占據(jù)的實際物理空間及所具有的功能。

1.8 建立(Establishment)

定植。

1.9 寄主/宿主(Host)

寄主/宿主是為其他生物(寄生物)提供生存環(huán)境或養(yǎng)分的動物(包括人類)和植物。

1.10 寄主/宿主特異性(Host specificity)

寄主/宿主特異性指被某種微生物或微生物品系定植的不同寄主種類的范圍。寄主專一的微生物只在一種或少數(shù)幾種不同寄主生物上定植或?qū)ζ洚a(chǎn)生不利影響。非寄主特異的微生物可能在廣泛不同寄主種類上定殖或?qū)ζ洚a(chǎn)生不利影響。

1.11 雜質(zhì)(Impurity)

見污染物。

1.12 侵染(Infection)

侵染是指致病微生物進入易感寄主，不論是否引起病理作用或疾病。該微生物必須進入寄主體內(nèi)，通常是細胞內(nèi)，且能繁殖形成新的侵染單位。簡單地攝取致病體并不意味著侵染。

1.13 侵染性或侵染力(Infective or Infectivity)

侵染性或侵染力指微生物侵入并存活于一活體中，并在機體上或機體中繁殖的能力，不論有無病癥顯現(xiàn)。侵染的性質(zhì)可在侵染嚴重程度、位置和微生物數(shù)量方面有很大差異。

1.14 侵入(Invasion)

侵入是指微生物進入寄主體內(nèi)(如實際穿透表皮層、腸上皮細胞等)。“初期侵入性”是微生物致病的特性。

1.15 代謝物(Metabolite)

見相關次生化合物(代謝物)。

1.16 微生物或微生物體(Microbial or Microorganism)

微生物。

1.17 微生物農(nóng)藥(Microbial pest control agent,MPCA)

見微生物活性物質(zhì)。

1.18 微生物農(nóng)藥產(chǎn)品(Microbial pest control product,MPCP)

含有微生物農(nóng)藥的產(chǎn)品，在登記時或在標簽上標明應用于病蟲害控制。

1.19 微生物活性物質(zhì)(Microorganism active substance)

微生物活性物質(zhì)是指發(fā)揮防治病蟲害作用的微生物(原生生物、真菌、細菌、病毒或其他顯微鏡下可見并可自我復制的活體)(ISPM Pub. No. 3.修訂版，國際植物保護公約，2005)及任何起防治病蟲害作用的相關代謝物(OECD，2008)。微生物活性物質(zhì)可包含活性微生物和/或無活性微生物，也可包含細胞繁殖(生長)過程中產(chǎn)生的相關代謝物/毒素和從生長介質(zhì)中產(chǎn)生的物質(zhì)，前提是這些成分沒有受到人為改變。

1.20 繁殖(Multiplication)

繁殖是指在侵染過程中，微生物復制、群體數(shù)量增加的能力。

1.21 霉菌毒素(Mycotoxin)

霉菌毒素即指真菌毒素。

1.22 非活性微生物(Non-viable microorganism)

非活性微生物是指沒有復制或轉(zhuǎn)移遺傳物質(zhì)能力的微生物。

1.23 非活性殘留物(Non-viable residue)

非活性殘留物是指無復制或轉(zhuǎn)移遺傳物質(zhì)能力的殘留物。

1.24 致病性(Pathogenicity)

致病性是指微生物引發(fā)寄主疾病和/或造成寄主傷害的能力。很多病原體致病作用是依靠⑴ 毒性和侵入性，或⑵ 是毒性和定植能力。但有些入侵病原體致病是致使寄主防御系統(tǒng)反應失常。

1.25 相關次生化合物/代謝物(Relevant secondary compound, metabolite)

相關次生化合物/代謝物指從毒理學角度對人或動物健康或/和環(huán)境造成危害的任何次生化合物(代謝物)；在此定義下，有些毒素也可看作是相關次生化合物(代謝物)。

1.26 次生化合物(Secondary compound)

次生化合物指微生物產(chǎn)生的，對其生長、擴展或繁殖非必需的化合物。

1.27 共生現(xiàn)象(Symbiosis)

共生現(xiàn)象指生物體間相互關系，其中一種緊密依存于另一種，雙方是互惠關系。

1.28 微生物農(nóng)藥母藥(Technical grade of MPCA)

微生物農(nóng)藥母藥是用于生產(chǎn)微生物農(nóng)藥產(chǎn)品的微生物原料。它是由典型制備方法生產(chǎn)的高純度微生物農(nóng)藥(MPCA)，除了微生物生長或復制、典型純化和制備物質(zhì)外，不含添加劑。它可以純品形式或含有防腐劑、穩(wěn)定劑和稀釋劑的增強形式銷售給微生物農(nóng)藥產(chǎn)品的制造商；也可視為微生物農(nóng)藥產(chǎn)品制造的前期階段。

1.29 活性微生物(Viable microorganism)

活性微生物是指具備復制或轉(zhuǎn)移遺傳物質(zhì)的微生物。

1.30 活性殘留物(Viable residue)

活性殘留物是指能復制或傳遞遺傳物質(zhì)的殘留物。

1.31 類病毒(Viroid)

類病毒是一類由與任何蛋白無關的少量核糖核酸(RNA)組成侵染性病原體。其RNA不編碼蛋白質(zhì)也不翻譯；它由寄主細胞酶復制。已知類病毒能夠引發(fā)多種疾病。

1.32 毒力(Virulence)

毒力是對微生物致病力程度的衡量，以接種一定劑量該微生物所引發(fā)寄主或宿主病害的嚴重程度來表示。它可通過試驗測量，以半數(shù)致死量(LD50)或半數(shù)感染量(LD50)計。

2 登記所需數(shù)據(jù)和信息(資料要求)

本節(jié)將闡述微生物農(nóng)藥登記用到的數(shù)據(jù)和信息。微生物農(nóng)藥(MPCA)、微生物農(nóng)藥產(chǎn)品(MPCP)的資料要求見附件1。

微生物產(chǎn)品登記要求是基于化學農(nóng)藥登記的標準要求制定的，二者架構類似。但具體要求應適用于MPCA特性，并覆蓋這類產(chǎn)品的各方面。因兩種農(nóng)藥有本質(zhì)區(qū)別，所以對化學農(nóng)藥登記要求作調(diào)整是必要的。本章對這些調(diào)整進行說明。

2.1 介紹

用于植物保護和公共衛(wèi)生的微生物農(nóng)藥(MPCA)和微生物農(nóng)藥產(chǎn)品(MPCP)的專業(yè)用物質(zhì)，其評估需要特定的專業(yè)知識。如果農(nóng)藥登記部門沒有具備這種知識的人員，有必要對 MPCPs的微生物知識培訓，使有關人員能進行恰當評估。另外，還須考慮下列因素。

在某些國家，登記部門不僅負責登記，還負責核準MPCA和MPCP生產(chǎn)設備的健全和安全，保障產(chǎn)品的銷售者和使用者都按標簽說明操作。因此，有必要對管理人員進行培訓，確保他們能夠履行所有這些職責。

對許多微生物來說，從接種發(fā)酵到配制產(chǎn)品的生產(chǎn)過程可能是完全封閉的，因此不可能有MPCA活性物質(zhì)的樣品。在這種情況下，僅用MPCP測試是可以接受的。

審查MPCAS和MPCPs的信息和數(shù)據(jù)的評估人員，同時考慮測試結果和測試指南也很重要?，F(xiàn)有化學農(nóng)藥測試指南可能無法直接適用于 MPCA和MPCPs，因此通常需要修改指南。美國環(huán)保署(US EPA)、經(jīng)合組織(OECD，2008；OECD，2011；OECD，2012)和歐盟(EU)已制定了很多微生物農(nóng)藥評估指南或指導，這些資料都在下文適當時提到。

除微生物細胞外，微生物也有產(chǎn)生次生化合物(也稱次生代謝物)的潛能。這些化合物可能出現(xiàn)在產(chǎn)品中和/或存在于微生物體內(nèi)；可能會對MPCA活性有益或無益，還可能是或不是毒理學的關注點。

次生化合物(代謝物)只有在從文獻或研究中已知是有毒理學危險，可能對人類或環(huán)境造成危害，且/或是主要作用機理時，才需要在材料中予以說明。對次生化合物(代謝物)的評估可遵循對植物源農(nóng)藥(通常是各種物質(zhì)的混合)的評估方法，其中次生化合物可視作植物源農(nóng)藥中的“關注組分”處理，具體參見植物源農(nóng)藥章。

在資料其他通用部分中，當已證明物種內(nèi)有高度相似性時，可使用相同物種的不同株系的數(shù)據(jù)。

2.2 預期用途

數(shù)據(jù)要求與登記化學農(nóng)藥的數(shù)據(jù)要求相同，沒有特殊調(diào)整。

2.3 母藥和制劑的性質(zhì)、特點、生物學特性和分析方法

登記機構一般需要獲知微生物農(nóng)藥(MPCA)和微生物農(nóng)藥產(chǎn)品(MPCP)的以下信息才能做出管理決策：

2.3.1 鑒定

詳細分類學描述和MPCA中物種隸屬關系精確到株系水平。

2.3.2 生產(chǎn)

生產(chǎn)方法的詳細描述，包括針對人致病菌含量的質(zhì)量控制。在經(jīng)合組織(OECD)編寫的相關指南中，提出產(chǎn)品中對人致病菌含量要在可接受范圍內(nèi)。

2.3.3 成分

標明微生物含量，以g/kg或g/L(或% w/w)和菌落形成單位(CFU)或經(jīng)生物測試的生物效價表示。如涉及到任何發(fā)酵培養(yǎng)基和次生化合物(代謝物)的使用，都應給出量化數(shù)據(jù)。

2.3.4 生物學特征

微生物農(nóng)藥(MPCA)的生物學、生物地理學和生態(tài)學信息，包括：

⑴ 菌種菌株來源；分離方法；菌種保藏方法；有關菌種測試和使用的歷史記錄；密切相關的株系或物種的使用歷史；不論該物種是否來源于本地。

⑵ 微生物在自然界存在的情況，包括地理分布、寄主、棲息地、生態(tài)位、自然發(fā)生水平。

⑶ 微生物生命周期和有關密切物種的信息。

⑷ 靶標寄主范圍的信息，及環(huán)境參數(shù)對生長、感染性、傳播和定植能力影響的信息都是有用的。

⑸ 靶標生物相關信息，包括作用機理和寄主特異性的已知信息。

⑹ 微生物可能產(chǎn)生影響人類健康和/環(huán)境的次生化合物(代謝物)，如果有，則給出其作用機理和任何毒素和/或降解產(chǎn)物的相關信息。

⑺ 生理特性，特別是環(huán)境參數(shù)對生長的影響。

⑻ 遺傳穩(wěn)定性(與作用機理相關的遺傳變異率的特性)。

⑼ 微生物是否會產(chǎn)生干擾人用或動物用藥品的抗體相關信息。

2.3.5 存儲穩(wěn)定性

高溫加速試驗不適用(微生物)，因此采用適當溫度的實時性研究；經(jīng)合組織(OECD，2016)提供過這方面的研究指南。試驗條件也應反映在產(chǎn)品標簽中。

2.3.6 分析方法

現(xiàn)有許多測試方法不適用微生物。如果沒有合適方法，就需要開發(fā)新方法并加以驗證。人們普遍認為，有些技術專業(yè)性很強，可能無法從外部對其進行驗證以達到公認標準。在這種情況下，試驗結果可由另一個公司的另一個實驗室或同一個公司的另一個實驗室再次驗證。內(nèi)部方法是適用的，且第二家實驗室必須能將第一家實驗室的驗證數(shù)據(jù)再現(xiàn)到可接受的范圍內(nèi)。

2.3.7 技術等同性

技術等同原則要適應微生物需要：要從以下一個或幾個方面證明獲準(參考)的數(shù)據(jù)源是等同的：⑴工廠地點變化，⑵ 擴大發(fā)酵罐，⑶ 生產(chǎn)流程變化，如生產(chǎn)設備或繁殖條件(如溫度或原料)。

目的是確保以下參數(shù)在新數(shù)據(jù)與已批準的數(shù)據(jù)等同：⑴ 微生物鑒定，⑵ 生產(chǎn)材料的成分(如接種體、培養(yǎng)基)，⑶ 活性微生物含量(以相關單位確定)，⑷ 相關次生化合物(代謝物)成分，⑸ 微生物污染物含量。

2.4 人類健康(母藥和制劑毒性)

為了評估申請登記的微生物農(nóng)藥(MPCA)和微生物農(nóng)藥產(chǎn)品(MPCP)對人類健康的風險，應提供微生物潛在致病性、侵染力和清除模式的相關數(shù)據(jù)。另外，如涉及次生化合物(代謝物)的毒理影響，也應予以評估。

一般登記機構需要MPCA/MPCP的下列信息才能做出管理決策：

2.4.1 急性毒性(單次暴露毒性/致病性研究)

采用適用微生物試驗方案的基礎性研究，應包括經(jīng)口、呼吸道、腹腔內(nèi)和其他相關暴露途徑的皮膚刺激和眼刺激的侵染性、致病性和毒性。某些情況下，可免除提供試驗數(shù)據(jù)的合理說明。

2.4.2 高級階段研究

一般不需要對MPCA重復劑量進行亞慢性或慢性研究。但如果在急性毒性研究中發(fā)現(xiàn)了不良反應，就需要進一步研究。如證實相關次生化合物(代謝物)的存在，且/或MPCP中含有有毒助劑，則也應考慮開展額外研究。

2.4.3 致敏性

適用微生物原料的試驗方法還不穩(wěn)定；故現(xiàn)階段不要求進行此試驗。當認為或證實了次生化合物(代謝物)的存在，就按常規(guī)化學農(nóng)藥方法進行致敏性試驗。

2.4.4 基因毒性

如有相關次生化合物(代謝物)存在，則應提供這方面數(shù)據(jù)。

2.4.5 不良反應報告

應提供有關生產(chǎn)設施或文獻中任何報告不良反應發(fā)生率的記錄，及為確定MPCA不會對人類造成不可接受的不良反應而進行任何研究數(shù)據(jù)。

2.5 殘留

為便于登記管理機構對微生物產(chǎn)品的殘留進行評估，應提供下列數(shù)據(jù)：⑴ 獲準用以植物保護和公共衛(wèi)生的微生物不是人類致病菌，意味著不會對哺乳動物造成不良暴露，無需進行殘留研究。但應進行簡短說明，以豁免提供微生物農(nóng)藥(MPCA)對哺乳動物沒有危害的證明數(shù)據(jù)。⑵ 如在微生物體內(nèi)產(chǎn)生相關次生化合物(代謝物)，應提交基于理論計算的豁免理由。該計算將確定MPCA不會遠高于自然條件中的數(shù)量出現(xiàn)在加工食物/飼料中，并應考慮MPCA在作物、食物/飼料中的潛在持久性和可能性。⑶ 如次生化合物(代謝物)有毒理危害可能，且/或是主要作用機理，則需提供信息說明與相關次生化合物(代謝物)接觸的可能性，可能還需要開展相關次生化合物(代謝物)的殘留研究。

2.6 環(huán)境影響

根據(jù)微生物農(nóng)藥(MPCA)/微生物農(nóng)藥產(chǎn)品(MPCP)的組成，登記部門需要下列一種信息來進行管理決策：

2.6.1 本地MPCA物種

⑴ 釋放到環(huán)境中的 MPCA量相當或低于一般情況下自然環(huán)境中的量，且MPCP中不產(chǎn)生次生化合物(代謝物)，或含有但無相關性，或可合理推斷在微生物體內(nèi)生成的量不足以產(chǎn)生毒性，則應提供簡短說明，申請豁免提供相關數(shù)據(jù)。

⑵ 釋放到環(huán)境中的 MPCA量明顯高于一般情況下自然環(huán)境中出現(xiàn)的量，且MPCP中不產(chǎn)生次生化合物(代謝物)，或含有但無相關性，或可合理推斷在微生物體內(nèi)生成的量不足以產(chǎn)生毒性，應提供信息確認該微生物不會比自然環(huán)境中定植和持續(xù)(存活量)水平更高。如無法確認，則需要進行環(huán)境持久性的研究。方法可能需要適當調(diào)整。

⑶ 釋放到環(huán)境中的 MPCA量相當于或低于一般情況下自然環(huán)境中的量，且在 MPCP中產(chǎn)生次生化合物(代謝物)，或可合理推斷在原處生成的量足以產(chǎn)生毒性，應提供土壤、空氣和/或水環(huán)境下的MPCA或MPCP(若適用)數(shù)據(jù)信息。方法可能需要適當調(diào)整。

⑷ 釋放到環(huán)境中的 MPCA量明顯高于一般情況下自然環(huán)境中的量，且在MPCP中產(chǎn)生次生化合物(代謝物)，或可合理推斷在原處生成的量足以產(chǎn)生毒性，應提供在MPCA和MPCP試驗中發(fā)現(xiàn)相關土壤、空氣和/或水環(huán)境中的非靶標生物數(shù)據(jù)。方法可能需要適當調(diào)整。

⑸ 沒有數(shù)據(jù)信息也不能排除相關次生化合物(代謝物)的存在，或應用MPCA的生態(tài)環(huán)境與自然出現(xiàn)的生態(tài)環(huán)境不同，應提供土壤、空氣和/或水環(huán)境下的MPCA或MPCP(若使用)數(shù)據(jù)信息。方法可能需要適當調(diào)整。

2.6.2 非本地MPCA物種

非本地MPCA物種的風險性可能更高，因為可能會在本地定植，取代本地微生物物種或與之競爭。因此，應提供(非本地)MPCA或MPCP(若使用)的相關信息，說明微生物在相關土壤、空氣和/或水環(huán)境中存活和持續(xù)存在的能力。方法可能需要適當調(diào)整。

2.7 生態(tài)毒理學

登記機構根據(jù)所申請微生物農(nóng)藥(MPCA)/微生物農(nóng)藥產(chǎn)品(MPCP)的成分，需要下列一種信息來進行管理決策：

2.7.1 本地MPCA物種

⑴ 釋放到環(huán)境中的 MPCA量相當或低于一般情況下自然環(huán)境中的量，且MPCP中不產(chǎn)生次生化合物(代謝物)，或含有但不相關或可合理推斷在自然環(huán)境生成的量不足以產(chǎn)生毒性，則應提供簡短說明，申請豁免提供相關數(shù)據(jù)。

⑵ 釋放到環(huán)境中的 MPCA量明顯高于一般情況下自然環(huán)境中的量，且MPCP中不產(chǎn)生次生化合物(代謝物)，或含有但不相關，或可合理推斷在自然環(huán)境中生成的量不足以產(chǎn)生毒性，應提供信息確認該微生物不會比自然環(huán)境中定植和持續(xù)的(數(shù)量)水平更高。如無法確認，則需要對非靶標生物進行研究。方法可能需要適當調(diào)整。

⑶ 釋放到環(huán)境中的 MPCA量相當或低于一般情況下自然環(huán)境中的量，且在MPCP中產(chǎn)生次生化合物(代謝物)，或可合理推斷其在自然環(huán)境中生成的量足以產(chǎn)生毒性，應提供MPCA或MPCP(如適用)與非靶標生物的對比研究數(shù)據(jù)。方法可能需要適當調(diào)整。

⑷ 釋放到環(huán)境中的 MPCA量明顯高于一般情況下自然環(huán)境中的量，且在MPCP中產(chǎn)生次生化合物(代謝物)，或可合理推斷其在自然環(huán)境中生成的量足以產(chǎn)生毒性，應提供在MPCA和MPCP試驗中發(fā)現(xiàn)的相關土壤、空氣中和/或水環(huán)境中的非靶標生物數(shù)據(jù)。方法可能需要適當調(diào)整。

⑸ 沒有數(shù)據(jù)信息也不能排除相關次生化合物(代謝物)的存在，或應用MPCA的生態(tài)環(huán)境與其自然出現(xiàn)的生態(tài)環(huán)境不同：應提供土壤、空氣，和/或水環(huán)境下的MPCA或MPCP(按需選擇)數(shù)據(jù)信息。方法可能需要適當調(diào)整。

2.7.2 非本地MPCA物種

非本地MPCA物種可能呈現(xiàn)更高的風險性，因為非靶標生物可能從未與其接觸過。因此，應提供(非本地)MPCA或MPCP(若適用)的相關信息，說明在相關土壤、空氣中和/或水環(huán)境中微生物對非靶標生物的潛在影響。方法可能需要適當調(diào)整。

2.7.3 昆蟲致病性MPCA物種

應提供來自優(yōu)質(zhì)文獻或在相關的環(huán)境介質(zhì)中MPCA對蜜蜂致病性研究的資料。

2.8 藥效

總的來說，登記機構需要來自可靠和具有代表性的田間試驗數(shù)據(jù)，以確保按標簽說明使用的產(chǎn)品效果。

⑴ 精心設計小規(guī)模實驗室和/或人工氣候箱研究得出的數(shù)據(jù)可構成整體數(shù)據(jù)的組成部分，以減少田間/溫室試驗的數(shù)量。

⑵ 如果信息優(yōu)質(zhì)且效果一致，則至少應對靶標害物進行3次大規(guī)模田間試驗。

⑶ 在某些一般領域，如對非靶標植物的影響，實際可用已有信息代替實際數(shù)據(jù)。

⑷ 可使用在相似氣候條件區(qū)域下取得的田間試驗數(shù)據(jù)。

⑸ 在合理情況下，可使用同種靶標害蟲的數(shù)據(jù)推斷其在不同作物上的數(shù)據(jù)。

⑹ 為產(chǎn)品的終端用戶提供良好實施的指導信息，包括可能適用的任何禁忌(如不得在低溫下使用)，如何使用該產(chǎn)品及如何將產(chǎn)品運用于有害生物綜合治理(IPM)和病媒生物綜合管理(IVM)中。

⑺ 應提供關于 MPCP預期使用效果的充足信息，及如何使用產(chǎn)品以達到更有效、更一致的效果。

3 資料評審

3.1 介紹

本節(jié)介紹了微生物農(nóng)藥試驗背景，簡述需要考慮的因素，重點說明在微生物農(nóng)藥(MPCAs)和微生物農(nóng)藥產(chǎn)品(MPCPs)的數(shù)據(jù)和信息評估中需要關注的問題。

首先要注意，申請MPCAs和MPCPs登記提交的材料可來自不同渠道，包括優(yōu)質(zhì)文獻、內(nèi)部研究、和/或針對特定物種或株系的GLP研究。此外，如前文所述，MPCA的性質(zhì)與常規(guī)化學農(nóng)藥不同，所以許多化學農(nóng)藥的試驗方法需要相應調(diào)整。經(jīng)合組織(OECD)、歐盟(EU)和美國環(huán)保署(US EPA)已制定了微生物試驗良好操作指南，申請人可能已使用這些指南。

在實際中，通常能很好地鑒定微生物，使登記機構能預測其性質(zhì)和行為。對于人類和動物健康及植物致病性尤是如此。然而，如認為MPCA在分類學上類似于醫(yī)學或農(nóng)業(yè)上重要的微生物，應詳細審查其性質(zhì)和效果。

一些常見的微生物物種已在植物保護或公共衛(wèi)生領域使用多年，沒有出現(xiàn)，也不會出現(xiàn)不可接受的不良反應，這是由其性質(zhì)決定的。因此，對于這些MPCAs和MPCPs，登記機構的評審人員應接受減免某些資料。

此外，很多常見微生物物種已在很多國家被評估過，其評估方法和決策是很有用的信息。

申請上述常見MPCA和MPCP物種資料減免的條件和標準如下：

⑴ 必須對株系進行充分、明確的鑒定分類到“種”，標注株系名稱，在國際公認的菌種庫中保藏的株系編號。

⑵ 確定 MPCA的生產(chǎn)過程，包括質(zhì)量控制的各步驟。這能清楚說明活性物質(zhì)只包含菌落形成單位，且沒有次生化合物(代謝物)存在。

⑶ 確認產(chǎn)品中的活性物質(zhì)僅與惰性(無毒)助劑混合配制而成。

⑷ 確認儲存后產(chǎn)品中CFU有適當?shù)纳婺芰?效力。

⑸ 確認成品相關的理化和技術性能。

⑹ 確認產(chǎn)品中人類致病性污染物不超過可接受的水平。

⑺ 盡管通過外推法可推斷產(chǎn)品用于不同作物對同一靶標害蟲的藥效，但還要有充足的藥效數(shù)據(jù)證明標簽上的聲明。

3.2 預期用途

資料要求和化學農(nóng)藥登記的資料要求相同，沒有特殊調(diào)整。

3.3 鑒定、特點、生物學特性和分析方法

3.3.1 鑒定

分類學是正確評估微生物的關鍵。須使用最通用的分子分類技術，并在可靠分類學庫中對典型株系和同一物種的其他株系進行比較鑒定。這對于評估人確定申請登記的株系不是和人類致病菌緊密相關的株系是很重要的，并允許讀取相同物種的其他株系，以支持合理的個案(基于同一物種其他株系的信息)。

3.3.2 生產(chǎn)

MPCA本身沒有雜質(zhì)，但對人類致病菌含量應控制在最低值。

⑴ 在微生物生產(chǎn)過程中可能會產(chǎn)生微生物污染物，因此評估人員確認生產(chǎn)過程中履行質(zhì)量控制步驟很重要，以確保產(chǎn)品含有人類致病微生物污染物在可接受范圍內(nèi)。如不能做到這一點，申請人應提供測試詳情和結果，以證明申請登記的微生物中不含人類致病菌污染物，申請流程可參考經(jīng)合組織(OECD)在這方面的指南。

⑵ 確認生產(chǎn)過程和下游過程中沒有顯著的次生化合物(代謝物)(如孢子被洗滌，則不應存在次生化合物)，或如無法做到，申請人應采取合適方法，如高效液相色譜法(HPLC)，并提供試驗細節(jié)和結果，以確認相關次生化合物(代謝物)存在的任何類型和可能的數(shù)量。

3.3.3 組成

微生物是由活體組成或通過特定發(fā)酵過程產(chǎn)生。生產(chǎn)方法和下游加工方法會改變活性物質(zhì)的類型，并決定其是否含有細胞、發(fā)酵培養(yǎng)基殘余和/或次生化合物(代謝物)。

⑴ 登記機構的評審人員需確認提供充足的生產(chǎn)過程詳細信息，以確認活性物質(zhì)的說明和技術參數(shù)是合理的。要確認微生物的量，以g/kg或g/L(或以% w/w計)、菌落形成單位(CFU)或通過生物測定法測得的生物效價表示；以及確認發(fā)酵后培養(yǎng)基殘余的量。如果涉及次生化合物(代謝物)，也應該提供其量化數(shù)據(jù)。生產(chǎn)過程必須保密。

⑵ 某些 MPCA技術規(guī)格基于合適的生物法測定的生物效能。評審人員應明白，由于寄主致病性相互作用的復雜性，細胞和孢子計數(shù)往往差距甚大，且精確度難以標準化。

⑶ 通常接受技術規(guī)格是用范圍而不是絕對數(shù)字表示。

3.3.4 生物特性

提供的MPCA生物學、生物地理學和生態(tài)學的信息通常來自優(yōu)質(zhì)文獻。

⑴ 申請人要提供關于 MPCA的生物學、生物地理學和生態(tài)學的信息。此外，為確定如靶標寄主范圍及各項環(huán)境參數(shù)對生長、侵染性、傳播和定植能力的影響，進行(室內(nèi))研究以支持遞交材料中其他領域的風險評估是有用的。

⑵ 應提供詳細記錄可能產(chǎn)生相關次生化合物(代謝物)的文字證據(jù)。提供的信息中也應該考慮到微生物是否會產(chǎn)生會干擾人用和獸用藥物的抗生素。如果不能排除這種情況，則可能嚴重限制或禁止使用該產(chǎn)品。如果次生化合物(代謝物)被認為是有毒的，則應提供信息說明其是否存在于MPCA / MPCP中。如果其中存在相關次生化合物(代謝物)，將影響對哺乳動物和環(huán)境的風險評估，那就需要更多數(shù)據(jù)來確認產(chǎn)品的使用不會帶來不可接受的風險。

3.3.5 儲存穩(wěn)定性

高溫加速試驗通常不適用，因此需要在適當、合理的儲存溫度進行實時研究。試驗中的條件應在標簽上反映出來。

3.3.6 分析方法

現(xiàn)有許多的檢測方法不適用于微生物。如果沒有合適方法，就需要開發(fā)新方法并加以驗證。有些技術專業(yè)性很強，可能無法從外部對其進行驗證以達到公認標準。

在這種情況下，試驗結果可應由其他公司的實驗室或本公司的其他實驗室再次驗證。需要提供此內(nèi)部方法，且第二家實驗室必須能將第一家實驗室的驗證數(shù)據(jù)再現(xiàn)到可接受的范圍內(nèi)。

3.3.7 技術等同

評估人員可將新來源視為技術等同的第I級，因此當株系或菌株確定為相同并滿足以下標準時，不需要進行第II級評估：

⑴ 活性微生物含量(以相關單位確定)大于或等于(在最小到最大范圍內(nèi))參考來源，以及⑵ 相關次生化合物(代謝物)含量低于或等于參考來源，且⑶用于生產(chǎn)的原料成分是相同的，并且⑷ 微生物污染物含量低于或等于參考來源。

不過，只要產(chǎn)品中微生物污染物含量在已商定的MPCP微生物污染限度內(nèi)，即可接受更高的含量。如果上述標準未得到滿足，可考慮對MPCA進行第Ⅱ級評估，以確定成分(化學和/或微生物)變化是否對人類健康和環(huán)境造成更大風險。其他信息可以在歐盟(EU)指南中找到(EC SANCO，2014a)。

3.4 人類健康

實際操作中，微生物鑒定通常已熟知，因此登記機構能據(jù)此預測其性質(zhì)和行為。在人類和動物健康及植物致病性方面尤其如此。

在某些情況下，根據(jù)微生物性質(zhì)和作用機理及不含相關次生化合物(代謝產(chǎn)物)的事實，可接受在合理的情況下不提供研究數(shù)據(jù)。這需要根據(jù)具體情況加以考慮。但多數(shù)情況下還是需要進行研究。

一般預期MPCA急性毒性研究結果證明不存在風險，而如研究表明對哺乳動物有致病性，登記機構就不會批準該產(chǎn)品登記。如在急性毒性試驗中發(fā)現(xiàn)毒性存在，則應要求進行重復劑量等的額外試驗。

如果存在因皮膚刺激和眼睛刺激而引發(fā)的毒性問題，則應提供保護操作人員和工作人員健康的指導，并應在標簽上用恰當?shù)木菊Z告知限用的信息。根據(jù)劑型的不同，建議說明微生物可能引發(fā)致敏反應。

3.5 殘留

批準用于植物保護和公共衛(wèi)生的微生物不是人類致病菌，這意味著對人類沒有明顯危害。因此，通常不需要關注人體暴露，也不需要暴露研究。

如果MPCA繁殖(數(shù)量和總量增加)，則應根據(jù)任何相關的次級化合物(代謝產(chǎn)物)沒有毒性作用進行風險評估；如次級化合物(代謝物)具有毒理學上的關注和/或主要作用機理，則應提供有關次級化合物(代謝物)的信息。所用方法可遵循第3節(jié)中概述用于植物源農(nóng)藥(通常是多種物質(zhì)的混合物)的方法，因“相關(有毒)次生化合物(代謝物)”被認為類似于“關注組分”。

3.6 環(huán)境影響

微生物性質(zhì)及其與環(huán)境之間關系的特異性，意味著從MCPA分類學、生物學和生態(tài)學角度看，只需提供極少的環(huán)境信息即可。某些MPCA物種和株系可能有大量與之相關的優(yōu)質(zhì)文獻和內(nèi)部研究，如其種群數(shù)量在環(huán)境中衰減的研究。提供這樣信息可為豁免提供數(shù)據(jù)佐證。

如果從微生物性質(zhì)考慮不能排除其可能造成的環(huán)境問題，則需要考慮微生物和/或相關次生化合物(代謝物)可能存在的水平是否低于相應環(huán)境中記載的水平。如果是的話，那么可合理說明為什么它們不會造成重大環(huán)境危害。

評估人員應特別考慮是否提供足夠的信息，以便對在不同生態(tài)環(huán)境中使用非本地 MPCA和本地MPCA進行風險評估。

3.7 生態(tài)毒理學

微生物性質(zhì)及其與寄主之間通常具有高度特異性，這意味著基于MCPA分類學、生物學和生態(tài)學特征，可能只需提供最少限度的非靶標物種信息即可。對于某些MPCA物種和株系，可能會有大量相關優(yōu)質(zhì)文獻或內(nèi)部研究，如對寄主特異性或種群數(shù)量在環(huán)境中衰減。提供這些信息可為豁免資料提供佐證。

如果從微生物性質(zhì)考慮不能排除其對非靶標物種的風險，那么可考慮微生物和/或相關次生化合物(代謝物)的存在是否低于文獻記載的相應環(huán)境中的水平。如果是，那么可以合理解釋為什么它們不會對非靶標生物造成重大危害。

昆蟲病原MPCA的情況特殊，需要注意它們對蜜蜂的潛在影響。應提供微生物對蜜蜂致病性的優(yōu)質(zhì)文獻或相關研究的信息。

評審人員應特別考慮是否提供了足夠信息，以便對在不同生態(tài)環(huán)境下使用的非本地MPCA和本地MPCA進行風險評估。

3.8 藥效

原則上認為，提供藥效資料有助于保護使用者免受制造商夸大宣傳的困擾，并保障微生物產(chǎn)業(yè)的產(chǎn)品質(zhì)量。藥效試驗的目的是證明MPCP為使用者提供了超過任何負面影響的充分惠益。

微生物具有多種作用機理，因此可能難以對試驗中的藥效水平進行評估，并且這一水平可能低于常規(guī)化學農(nóng)藥預期的效果水平。藥效試驗應證明

MPCP為使用者提供了充分的惠益，如在病蟲害管理、作物增產(chǎn)或抗藥性管理方面，其益處超過了任何負面影響。帶來的改善應至少能從數(shù)據(jù)統(tǒng)計上明顯看出，并在可接受的概率水平上。從使用者的角度來看，以有害生物控制水平或作物增產(chǎn)為目標，適當使用該產(chǎn)品是合適的手段，也是值得的。

在作為植物保護用途時，可參考歐洲和地中海植物保護組織(EPPO)發(fā)布的(EPPO，2017a，2017b)藥效試驗指南。不過，公認的是在某些情況下，由于某些MPCP的具體屬性可能需要偏離EPPO指南。在這種情況下，應提供所用方法的詳細說明和解釋。解釋可能關于使用條件下的所用方法、作用機理及影響其藥效的潛在因素聯(lián)系。對于公共衛(wèi)生用途的產(chǎn)品，申請人應遵循適用(WHO，2017)試驗方法指南。

原則上所有試驗都應設有一組對照。在大多數(shù)試驗中，還要有一個適當、合理的參照物。由于使用有害生物防治產(chǎn)品條件的可變性，為了在試驗條件下對藥效進行有意義的評估并允許在一系列不同試驗間進行比較，必須設置參照組。然而，并不要求可接受的藥效必須與標準掛鉤，但要求與所設置的未經(jīng)處理的對照組比較。

原則上，需要來自可靠和具有代表性的田間試驗數(shù)據(jù)。來自精心設計的小規(guī)模實驗室和/或植物培養(yǎng)箱研究的數(shù)據(jù)也可是向登記機構提供整體數(shù)據(jù)包中的一部分，以減少田間/溫室試驗的次數(shù)。

應該指出的是，雖然有很多領域需要涵蓋，但實際上可能會使用信息代替其中某些領域(如對非靶標植物的影響)的實際數(shù)據(jù)。

應該認識到MPCP可以實現(xiàn)對有害生物的完全控制，部分控制或輔助控制。如申請人有充分理由證明藥效是足夠的，評審人員不因該產(chǎn)品效果不足而拒絕對其進行登記。原因可能是：有不同的作用機理(與抗性管理有關)、有價值的用途、抗性管理、化學殘留物管理或在有害生物綜合防治(IPM)或媒介綜合管理(IVM)體系中與其他物質(zhì)有特定兼容性。從使用者角度來看，帶來的改善應至少能從數(shù)據(jù)統(tǒng)計上明顯看出，并在可接受的概率水平上。且對于有害生物控制或作物增產(chǎn)來說，適當使用該產(chǎn)品是合適的手段，也是值得的。

鼓勵向產(chǎn)品的終端用戶提供可能適用的任何禁忌的指南(如不得在低溫條件下使用)、產(chǎn)品的使用方法及如何將產(chǎn)品作為IPM或IVM體系一部分的使用指南。

一般來說，申請人和評審人員應將重點放在確保使用者能得到有關MPCP可能表現(xiàn)的準確信息，并就如何最好地使用該產(chǎn)品提供建議，以使其盡可能有效并始終如一地起作用。

附件1：微生物制劑登記的數(shù)據(jù)要求

本附件由2部分組成：

A.微生物農(nóng)藥：有效成分(MPCA)登記的推薦資料要求。

B.微生物農(nóng)藥：制劑(MPCP)登記的推薦資料要求。每個部分給出了各研究領域適用的幾個表格。注：下表中數(shù)據(jù)編號遵循邏輯順序，但在極少數(shù)情況下未按順序。出于各個國際組織間協(xié)調(diào)一致考慮，數(shù)據(jù)編號與經(jīng)合組織(OECD)農(nóng)藥登記指導文件的格式一致(OECD，2006年)。

A.微生物農(nóng)藥：有效成分登記的推薦資料要求(MPCA)

在本附件A項(下述A1至A7)中列出的測試通常用于MPCA，但取決于MPCA的類型，其生產(chǎn)方法、穩(wěn)定性和/或劑型，測試僅限于母藥(TGAI)或MPCP(視情況而定)?？烧f明未提交某些研究報告或數(shù)據(jù)的理由，并通過提供優(yōu)質(zhì)來源的科學信息彌補。

如果 MPCA 含有相關(有毒)次生化合物(代謝物)，那么可能還需要滿足化學農(nóng)藥登記的資料要求。