張春燕，范小冬，孔文強(qiáng)，謝星星，周春陽(yáng)，杜 彪

（1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院藥物臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，四川 瀘州 646000；2.四川省南充市西充縣人民醫(yī)院藥劑科，四川 南充 637200；3.西南醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，四川 瀘州 646000；4.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科，四川瀘州 646000；5.川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，四川 南充 637000；6.重慶三峽中心醫(yī)院藥學(xué)部，重慶 404000）

抑郁癥的發(fā)病機(jī)制至今尚不明確，遺傳因素、心理因素、環(huán)境因素、免疫功能等多種因素與抑郁癥的發(fā)生及發(fā)展關(guān)系密切［1］。目前，臨床使用的大多數(shù)抗抑郁藥主要以“單胺類(lèi)遞質(zhì)假說(shuō)”作用機(jī)制為目標(biāo)開(kāi)發(fā)的調(diào)節(jié)突觸間隙單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)［如5-羥色胺（5-HT）、去甲腎上腺素（NE）、多巴胺等］水平而發(fā)揮抗抑郁作用，常規(guī)抗抑郁藥物主要有三環(huán)類(lèi)抗抑郁藥物、選擇性5-HT再攝取抑制劑（SSRI）、單胺氧化酶抑制劑、選擇性NE／5-HT再攝取抑制劑等［2］，這些抗抑郁藥物存在起效時(shí)間較長(zhǎng)、復(fù)發(fā)率較高、臨床治愈率低且殘留癥狀突出等共性問(wèn)題。近年來(lái)，中藥治療抑郁癥研究取得了較大進(jìn)展，主要涉及有柴胡、白芍、枳殼、淫羊藿、石菖蒲等單味中草藥，以及常用中藥復(fù)方如逍遙散、開(kāi)心散、小柴胡湯、四逆散等多種制劑［3］。中藥通過(guò)多途徑、多層次、多靶點(diǎn)治療抑郁癥，彌補(bǔ)了西藥的不足。復(fù)方佛手口服液（曾用名安康口服液）是重慶三峽中心醫(yī)院根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論合理組方而成的抗抑郁新制劑。在此對(duì)復(fù)方佛手口服液的研究概況進(jìn)行綜述，為中藥復(fù)方制劑治療抑郁癥提供新的治療方案。

1 概述

組方：佛手 100 g，郁金 90 g，酸棗仁 50 g，柴胡、桑椹、大棗各45 g，甘草25 g，矯味劑單糖漿100 mL，以及一定量的附加劑如防腐劑等。

組方原則：佛手、柴胡為君藥，有疏肝理氣功效；郁金、酸棗仁為臣藥，郁金有理氣祛痰功效，酸棗仁有養(yǎng)心安神、健腦寧志功效；桑椹補(bǔ)血滋陰，生津潤(rùn)燥；大棗補(bǔ)中益氣，養(yǎng)氣安神。諸藥合用，方證合拍，共同起到抗抑郁的良好功效。

處方制備：按處方組成，將處方量的藥材剪碎，倒入燒杯，加入適量去離子水，直至藥材被完全浸沒(méi)，浸沒(méi)1 h后緩慢加熱，保持微沸1 h，分離煎煮液，藥渣再加入適量去離子水繼續(xù)煎煮0.5 h，分離煎煮液2次，合并3次煎出液，過(guò)濾，去除濾渣，將濾液低溫濃縮至一定量，加入單糖漿100 mL，再濃縮至1 000 mL，加入1%殼聚糖，靜置約12 h，吸取上清液，棄掉沉淀物，再加入一定劑量的防腐劑，分裝，即得。

臨床應(yīng)用：適用于年齡18～63歲的符合《中國(guó)精神疾病分類(lèi)方案與診斷標(biāo)準(zhǔn)（第三版）》診斷的輕中度抑郁癥患者。本品每1 mL含生藥0.38 g，每日口服2次，1次20 mL，療程為6周。

2 現(xiàn)代藥理學(xué)研究

佛手為蕓香科植物佛手Citrus medicaL.var.sarcodactylisSwingle的干燥果實(shí)，功能疏肝理氣、和胃止痛、燥濕化痰，用于肝胃氣滯、胸脅脹痛、胃脘痞滿(mǎn)、食少?lài)I吐、咳嗽痰多［4］178-179。佛手的主要化學(xué)成分有揮發(fā)油、黃酮類(lèi)、多糖、微量元素、多酚、氨基酸、香豆素、甾醇類(lèi)等［5］。佛手具有止咳平喘祛痰、抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)作用，以及抑菌、抗炎、抗抑郁作用等［6］。高洪元等［7］探討了佛手揮發(fā)油對(duì)慢性應(yīng)激所致大鼠抑郁模型的干預(yù)作用，采用低、中、高劑量對(duì)90只Wistar大鼠進(jìn)行試驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)佛手揮發(fā)油呈劑量依賴(lài)性地改善大鼠抑郁行為及生化指標(biāo)，推測(cè)佛手抗抑郁作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)血清中皮質(zhì)酮水平和海馬組織神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)水平有關(guān)。蘆紅等［8］采用小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)和小鼠懸尾試驗(yàn)探討了川佛手提取物的抗抑郁作用，研究證實(shí)，川佛手揮發(fā)油、川佛手水提后醇提浸膏和正丁醇浸膏均有明顯的抗抑郁作用，但未發(fā)現(xiàn)川佛手水提浸膏的抗抑郁作用，推測(cè)原因可能與水提浸膏內(nèi)雜質(zhì)過(guò)多有關(guān)。因此，除雜質(zhì)也是復(fù)方佛手口服液制備的關(guān)鍵步驟。宋美卿等［9-10］采用慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和應(yīng)激配合孤養(yǎng)的造模方法，研究著名中醫(yī)教育家施今墨的行氣疏肝對(duì)藥香櫞佛手的抗抑郁作用，發(fā)現(xiàn)香櫞、佛手對(duì)藥不同劑量組對(duì)大鼠體質(zhì)量、糖水偏愛(ài)率、曠場(chǎng)試驗(yàn)各指標(biāo)有不同程度提高作用，證明其可能通過(guò)提高機(jī)體各種非特異性刺激的抵抗力而發(fā)揮抗抑郁作用。

郁金為姜科植物溫郁金Curcuma wenyujinY.H.Chen et C.Ling，姜黃Curcuma longaL.，廣西莪術(shù)Curcuma kwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang 或蓬莪術(shù)Curcuma phaeocaulisVal.的干燥塊根，功能活血止痛、行氣解郁、清心涼血、利膽退黃，用于胸脅刺痛、胸痹心痛、經(jīng)閉痛經(jīng)、乳房脹痛、熱病神昏、癲癇發(fā)狂、血熱吐衄、黃疸尿赤［4］208。郁金的化學(xué)成分主要有揮發(fā)性成分如倍半萜類(lèi)、姜黃素、微量元素、多糖、谷甾醇等成分［11］，主要有抗癌、保肝、調(diào)血脂、抑菌、抗炎、抗血小板聚集、抗氧化、抗抑郁作用［12-13］。

柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum chineseDC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifoliumWilld.的干燥根，按性狀不同，分別習(xí)稱(chēng)“北柴胡”“南柴胡”，功能疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽(yáng)氣，用于感冒發(fā)熱、寒熱往來(lái)、胸脅脹痛、月經(jīng)不調(diào)、子宮脫垂、脫肛［4］280-281，主要化學(xué)成分有皂苷、揮發(fā)油、黃酮、多糖、腺苷、氨基酸等［14］。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，柴胡主要有抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、鎮(zhèn)靜、調(diào)血脂、保護(hù)胃黏膜、保肝、抗病毒作用［15］。

桑椹為桑科植物桑Morus albaL.的干燥果穗，功能滋陰補(bǔ)血、生津潤(rùn)燥，用于肝腎陰虛、眩暈耳鳴、心悸失眠、須發(fā)早白、津傷口渴、內(nèi)熱消渴、腸燥便秘［4］300，主要成分有蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、纖維、維生素、礦物質(zhì)等，具有免疫調(diào)節(jié)、促進(jìn)造血干細(xì)胞生長(zhǎng)、抗氧化、調(diào)血脂、保肝、降血糖、抗癌、促進(jìn)新陳代謝、延緩衰老等藥理作用［16］。

大棗為鼠李科植物棗Ziziphus jujubaMill.的干燥成熟果實(shí)，功能補(bǔ)中益氣、養(yǎng)血安神、用于脾虛食少、乏力便溏、婦人臟躁［4］22-23，主要化學(xué)成分有三萜、皂苷、生物堿、黃酮、糖苷、核苷、糖類(lèi)、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、酰胺類(lèi)、有機(jī)酸、甾體等［17］。大棗具有增強(qiáng)免疫、抑制腫瘤、抗氧化、保肝、抗過(guò)敏、抗疲勞等作用［18］。

酸棗仁為鼠李科植物酸棗Ziziphus jujubaMill.var.Spinosa（Bunge）Hu ex H.F.Chou 的干燥成熟種子，功能養(yǎng)心補(bǔ)肝、寧心安神、斂汗、生津，用于虛煩不眠、驚悸多夢(mèng)、體虛多汗、津傷口渴［4］366-367，主要化學(xué)成分有皂苷、黃酮、三萜、生物堿、脂肪油、甾體、酚酸、多種氨基酸和微量元素等，具有鎮(zhèn)靜催眠、抗驚厥、抗焦慮、抗抑郁、抗應(yīng)激性潰瘍、抗心律失常、抗心肌缺血、強(qiáng)心、防動(dòng)脈粥樣硬化、調(diào)血脂、降壓、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗脂質(zhì)過(guò)氧化等藥理作用［19］。

甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensisFisch.，脹果甘草Glycyrrhiza inflataBat.或光果甘草Glycyrrhiza glabraL.的干燥根和根莖，功能補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調(diào)和諸藥，用于脾胃虛弱、倦怠乏力、心悸氣短、咳嗽痰多、脘腹及四肢攣急疼痛、癰腫瘡毒，可緩解藥物毒性、烈性［4］86-87，主要化學(xué)成分有三萜（包括甘草酸和甘草次酸等）、生物堿、黃酮、多糖等，具有抗炎、降低膽固醇、抗病毒等藥理作用［20］。

3 生產(chǎn)工藝

3.1 提取工藝單因素試驗(yàn)

參考文獻(xiàn)［21-22］確定了以浸泡時(shí)間、提取時(shí)間、提取次數(shù)、加水量為影響因素。按處方量（佛手100g，郁金90 g，酸棗仁 50 g，柴胡、桑椹、大棗各 45 g，甘草 25 g），稱(chēng)取藥材，以浸泡時(shí)間、提取時(shí)間、提取次數(shù)、加水量為考察因素，煎煮藥材后的水提取液過(guò)濾，合并收集濾液，將濾液低溫濃縮至一定量，測(cè)定干膏得率和橙皮苷含量，初步確定了各因素的水平。

3.2 提取工藝優(yōu)化

單因素試驗(yàn)無(wú)法反映出多個(gè)因素間相互作用的結(jié)果，可能對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成較大影響，因此采用中心組合設(shè)計(jì)-響應(yīng)面試驗(yàn)法對(duì)提取時(shí)間和加水量2個(gè)重要因素進(jìn)行進(jìn)一步考察，綜合分析，確定了提取工藝的最優(yōu)條件并進(jìn)行驗(yàn)證。

3.3 澄清工藝研究

制備口服液的凈化過(guò)程中，須對(duì)提取液進(jìn)行除雜，傳統(tǒng)方法如改變?nèi)軇O性的水提醇沉法、借助外力的超速離心法、膜分離技術(shù)的膜分離法、吸附技術(shù)的大孔樹(shù)脂吸附法等，各有的優(yōu)點(diǎn)和不足［23］。醇沉法使用的溶劑乙醇易揮發(fā)，有效成分易損失，成本高。超速離心法操作簡(jiǎn)便、快速，但適用于除去泥沙或藥材細(xì)渣，無(wú)法除去水溶性雜質(zhì)。大孔樹(shù)脂吸附法的孔徑大小不同決定了保留化學(xué)成分有差異，且存在殘留問(wèn)題至今尚未很好地解決。原工藝水煎液根據(jù)傳統(tǒng)煎劑的提取方法，采用L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)，以加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)作為考察因素，以干膏得率、橙皮苷含量為考察指標(biāo)，篩選最優(yōu)提取方法［24］。原工藝去除雜質(zhì)分別采用了水提醇沉法和水提漢威斯特天然澄清劑澄清法。ZTC1+1Ⅲ型天然澄清劑屬新型食品加工助劑，采用了“1+1”澄清技術(shù)，具有高效、不影響有效成分、不需調(diào)整pH、不引入異味、不殘留、安全無(wú)毒、使用方便、熱穩(wěn)定性好、費(fèi)用低廉的特點(diǎn)［25］。澄清工藝條件篩選采用正交試驗(yàn)，以天然澄清劑2組分加入量比例、水提液溫度、放置時(shí)間為因素，以澄清度、沉降時(shí)間、過(guò)濾時(shí)間按（4∶3∶3）的權(quán)重比進(jìn)行加權(quán)綜合評(píng)分作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。該除雜工藝有待優(yōu)化，下一步研究計(jì)劃將進(jìn)行澄清工藝單因素試驗(yàn)考察［26］?？疾煲蛩刂饕校撼吻鍎?組分加入順序、澄清劑用量、藥液濃度、加入澄清劑時(shí)的溫度、攪拌速率、保溫時(shí)間及靜置時(shí)間。評(píng)價(jià)指標(biāo)也可進(jìn)一步改進(jìn)，以橙皮苷保留率、固形物去除率、鞣質(zhì)去除率、蛋白質(zhì)去除率、澄明度得分按照不同權(quán)重分?jǐn)?shù)得出綜合評(píng)分，其計(jì)算公式為：綜合評(píng)分＝橙皮苷保留率×20+固形物去除率×20+鞣質(zhì)去除率×20+蛋白質(zhì)去除率×20+澄明度得分 ×20。

4 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

組方中的佛手、柴胡為君藥，郁金、酸棗仁為臣藥，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要采用薄層色譜法對(duì)君藥佛手、臣藥郁金進(jìn)行薄層定性鑒別；采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方制劑中的橙皮苷含量，作為含量檢測(cè)的控制標(biāo)準(zhǔn)。研究發(fā)現(xiàn)，薄層色譜主斑點(diǎn)清晰、集中、分離效果好；橙皮苷檢測(cè)線性 范 圍 為 0.0416 8 ～0.416 8 μg，平 均 回 收 率 為98.11% ，RSD為 0.25%［27］。2015 年版《中國(guó)藥典 （一部）》推薦佛手橙皮苷含量測(cè)定流動(dòng)相為甲醇-水-冰醋酸（33 ∶63 ∶2，V/V/V），但由于復(fù)方中藥制劑，提取的成分復(fù)雜，橙皮苷未能較好地與雜質(zhì)峰分離，故采用乙腈-4%醋酸溶液（15∶85，V/V），可達(dá)到基線分離，理論板數(shù)達(dá)4 000以上，重復(fù)性較好。該口服液的處方是7味中藥組成的復(fù)方制劑，化學(xué)成分復(fù)雜，在原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中將橙皮苷作為含量檢測(cè)的控制指標(biāo)，質(zhì)量可控性較差，難以反映出復(fù)方佛手口服液的整體質(zhì)量，因此該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待提高。下一步研究將在對(duì)佛手、郁金進(jìn)行薄層定性鑒別的基礎(chǔ)上，增加2種君藥佛手、柴胡及2種臣藥郁金、酸棗仁的主成分含量測(cè)定進(jìn)行，以對(duì)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行補(bǔ)充。

5 臨床研究

早期進(jìn)行的復(fù)方佛手口服液對(duì)比阿米替林治療抑郁癥的臨床研究［28］，實(shí)行分組對(duì)照研究，分別給予復(fù)方佛手口服液和阿米替林治療，療程為6周。采用漢密頓抑郁量表（HAMD）和Asberg氏抗抑郁劑副反應(yīng)量表（SERS）進(jìn)行療效和安全性評(píng)估。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組療效指標(biāo)顯效率、有效率、HAMD量表分值和減分率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；安全性指標(biāo)Asberg量表評(píng)分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。可見(jiàn)，復(fù)方佛手口服液治療抑郁癥療效良好，且安全性較好。