趙麗娜

感染是臨床最常見疾病,人體任一部位均可發(fā)生,多個(gè)器官感染或發(fā)生肺炎、膿毒癥者可危及患者生命。臨床上多數(shù)感染如診斷準(zhǔn)確,治療及時(shí),患者會(huì)在較短時(shí)間內(nèi)痊愈,但有時(shí)感染無法正確診斷,需要實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)有關(guān)指標(biāo)進(jìn)行輔助診斷,判斷病情［1-3］。臨床上生物標(biāo)志物檢測(cè)判斷感染及病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的常用指標(biāo)有炎性反應(yīng)細(xì)胞類的白細(xì)胞,炎性反應(yīng)介質(zhì)類的白細(xì)胞介素-6 及白細(xì)胞介素-8,炎性反應(yīng)蛋白類的C 反應(yīng)蛋白及降鈣素原等。降鈣素原是一種糖蛋白,因其生理?xiàng)l件下由甲狀腺C 細(xì)胞生產(chǎn),所以被稱為甲狀腺降鈣素。正常情況下,降鈣素原產(chǎn)生后僅有少量進(jìn)入外周血,但＜0.05 μg/L,常用檢測(cè)手段無法有效測(cè)出,但人體細(xì)菌感染后,肝臟巨噬細(xì)胞及單核細(xì)胞、肺及腸道組織的淋巴細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞在內(nèi)毒素、腫瘤壞死因子-α 和白細(xì)胞介素-6 的作用下合成分泌降鈣素原,使人體血清降鈣素原水平顯著升高,人體存在炎癥時(shí)可抑制降鈣素原裂解成降鈣素,使降鈣素原及裂解片段進(jìn)入血循環(huán),使血中降鈣素原水平升高。人體感染后3 h 外周血中即可檢測(cè)出降鈣素原,6～12 h可達(dá)高峰。早于其他感染標(biāo)志物的變化,臨床意義重大［4］。本文對(duì)降鈣素原在臨床上的意義及常用檢測(cè)方法進(jìn)行進(jìn)一步闡述。

1 降鈣素原檢測(cè)的臨床意義

1.1 在敗血癥中的應(yīng)用 敗血癥感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征是重癥監(jiān)護(hù)病房患者死亡的主要原因,及時(shí)合理的抗感染治療對(duì)該疾病患者的存活起著至關(guān)重要的作用,而C 反應(yīng)蛋白與白細(xì)胞的檢測(cè)缺乏準(zhǔn)確性,細(xì)菌培養(yǎng)和藥物敏感試驗(yàn)的結(jié)果又不夠及時(shí),常采用經(jīng)驗(yàn)給藥治療,但會(huì)增加患者的死亡率。降鈣素原優(yōu)于其他指標(biāo),其診斷準(zhǔn)確性高,降鈣素原在感染早期時(shí)即能測(cè)出,因此降鈣素原在診斷感染引起敗血癥時(shí)有更高的準(zhǔn)確性和及時(shí)性［1］。

1.2 在膿毒癥以及全身嚴(yán)重細(xì)菌感染中的應(yīng)用 全身炎癥反應(yīng)與膿毒癥在臨床上難以區(qū)分,全身炎癥反應(yīng)可有發(fā)熱、心動(dòng)過速、呼吸加速等,但不能確定為膿毒癥,膿毒癥診斷的前提是存在感染,監(jiān)測(cè)降鈣素原值的變化可以區(qū)分膿毒癥與全身炎癥反應(yīng),患者發(fā)生病毒感染、過敏性炎癥反應(yīng)、腫瘤相關(guān)發(fā)熱以及移植物宿主排異反應(yīng),降鈣素原不升高,或者僅有輕度升高,而發(fā)生細(xì)菌感染性疾病、膿毒癥時(shí)降鈣素原會(huì)明顯升高,因此降鈣素原水平檢測(cè)用于感染性疾病的鑒別診斷中。而且降鈣素原值與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān),對(duì)于全身炎癥反應(yīng)綜合征、膿毒癥、嚴(yán)重膿毒癥、膿毒癥休克等,隨疾病嚴(yán)重程度,降鈣素原水平逐漸升高。說明降鈣素原值的變化與感染嚴(yán)重程度密切相關(guān),對(duì)于臨床正確診斷意義重大。

1.3 在細(xì)菌性感染與非細(xì)菌性感染診斷中的應(yīng)用 臨床上常應(yīng)用白細(xì)胞計(jì)數(shù)及白細(xì)胞分類對(duì)患者是否為細(xì)菌感染進(jìn)行判斷,但此項(xiàng)檢查指標(biāo)特異性、敏感性不高,而應(yīng)用降鈣素原的檢測(cè),在全身感染炎癥早期,即感染2～3 h,其濃度即可上升,6 h 可急劇上升,8～24 h 可維持在較高水平,降鈣素原具有高度敏感性、特異性,只在具有內(nèi)毒素釋放的細(xì)菌感染時(shí)其值才會(huì)明顯上升,而在病毒感染、自身免疫性炎癥反應(yīng)及排異反應(yīng)時(shí),其檢驗(yàn)值不會(huì)升高或僅輕度上升,所以對(duì)于發(fā)熱患者,如不能判斷何種炎癥反應(yīng),可檢驗(yàn)降鈣素原值,以及早正確治療。

1.4 在急性胰腺炎中的應(yīng)用 急性胰腺炎是急腹癥中的一種常見病癥,病情兇險(xiǎn),復(fù)雜,發(fā)病率和病死率非常高。急性胰腺炎分為2 種,一種以胰腺水腫為主的胰腺炎,常預(yù)后良好；另一種為胰腺出血壞死的重癥胰腺炎,病死率非常高。及早對(duì)胰腺炎病情進(jìn)行正確判斷,準(zhǔn)確治療,可減少并發(fā)癥的發(fā)生,提升治愈率,而降鈣素原能靈敏地反應(yīng)機(jī)體的炎癥反應(yīng)情況,對(duì)于急性胰腺炎患者,在入院時(shí)檢測(cè)降鈣素原,可以對(duì)病情的輕重進(jìn)行初步判斷。對(duì)臨床類型進(jìn)行早期分類,可以指導(dǎo)臨床醫(yī)師有針對(duì)性進(jìn)行治療,提升治愈率,在治療過程中監(jiān)測(cè)降鈣素原值的變化,可判斷全身感染程度及治療情況,如其值降低,則表明治療有效,感染予以控制,而且其檢測(cè)方法簡(jiǎn)單,準(zhǔn)確性高,對(duì)于診斷指導(dǎo)、治療胰腺炎是十分理想的臨床檢驗(yàn)指標(biāo)［5-7］。降鈣素原對(duì)急性胰腺炎患者的病程監(jiān)測(cè)以及對(duì)預(yù)后的判斷也有意義,降鈣素原值的大小可反映胰腺炎性的全身感染程度,經(jīng)治療感染得以控制,降鈣素原值可降低或接近正常值。

2 降鈣素原的檢測(cè)方法

2.1 電化學(xué)發(fā)光免疫分析法(ECLIA)采用雙抗體夾心二步法,抗原抗體結(jié)合：將待測(cè)標(biāo)本、生物素標(biāo)記及三聯(lián)吡啶標(biāo)記的單克隆降鈣素原抗體三者加入反應(yīng)杯溫育,先形成抗原-抗體復(fù)合物,而后將包被鏈霉素、親和素的磁性微粒加入溫育,在磁性微粒表面形成鏈霉親和素-生物素-抗體-待測(cè)抗原-釕標(biāo)記抗體復(fù)合物。電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)：通過蠕動(dòng)泵將上述反應(yīng)生成的復(fù)合物送入流動(dòng)測(cè)量室,當(dāng)磁性微粒流經(jīng)電極表面時(shí),磁性微粒被安裝在工作電極下的磁鐵吸附于電極表面。同時(shí),三丙胺緩沖液流入,未結(jié)合的標(biāo)記抗體被沖走。與此同時(shí)電極加壓,啟動(dòng)電化學(xué)發(fā)光反應(yīng),使三聯(lián)吡啶釕和三丙胺在電極表面進(jìn)行電子轉(zhuǎn)移,產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光。光信號(hào)安裝在流動(dòng)室上方的光信號(hào)檢測(cè)器檢測(cè),光的強(qiáng)度與待測(cè)抗原的濃度呈正比。

2.2 免疫熒光法 免疫熒光法是本院檢測(cè)降鈣素原的一種定量的免疫學(xué)檢測(cè)方法,是基于熒光免疫檢測(cè)技術(shù)的微流快速試劑盒,免疫檢測(cè)技術(shù)依賴于抗體分子固有的與抗原分子結(jié)合的特性。用于微點(diǎn)微流試劑盒的降鈣素原具有特異性和敏感性及免疫熒光染料-標(biāo)記抗體捕獲抗體涂層和檢測(cè)區(qū)的表面。當(dāng)樣本流到反應(yīng)區(qū),樣本中的降鈣素原與標(biāo)記抗體通過免疫反應(yīng)相結(jié)合,反應(yīng)物繼續(xù)流動(dòng),與檢測(cè)區(qū)的捕獲抗體反應(yīng),形成一個(gè)降鈣素原與抗體的三明治結(jié)構(gòu),并被捕捉在檢測(cè)區(qū),而其余沒有反應(yīng)的標(biāo)記抗體隨著樣本的流動(dòng)而被沖走。干式熒光免疫分析儀掃描檢測(cè)區(qū)得到熒光信號(hào),其信號(hào)強(qiáng)度與血液中降鈣素原濃度呈正比。

2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)ELISA 雙抗體夾心法檢測(cè)降鈣素原的原理是特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體,將降鈣素原和生物素標(biāo)記的特異性抗體加入微量反應(yīng)板溫育,洗滌后,加入鏈霉親和素標(biāo)記的鏈霉親和素(HRP),再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物顯色,根據(jù)顏色反應(yīng)程度進(jìn)行降鈣素原的定量檢測(cè)。

2.4 膠體金免疫層析法 當(dāng)標(biāo)本(血清或血漿)加到檢測(cè)孔后,與示蹤元素(AU)結(jié)合的抗體就與樣品中的降鈣素原結(jié)合,形成標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物。這個(gè)復(fù)合物在檢測(cè)系統(tǒng)中借助毛細(xì)管作用移動(dòng)通過含有檢測(cè)帶的區(qū)域,在此過程中,標(biāo)記抗原-抗體復(fù)合物就結(jié)合到固相的抗降鈣素原的抗體上。當(dāng)降鈣素原濃度≥0.5 ng/ml,該復(fù)合物呈淡紅色的條帶,條帶的顏色深淺與降鈣素原濃度呈正比,與參考卡片上提供的降鈣素原的濃度范圍相關(guān)。如樣品中不含降鈣素原,則示AU結(jié)合的抗體就擴(kuò)散到對(duì)照條帶區(qū),被固定,產(chǎn)生紅色條帶。

3 討論

降鈣素原檢測(cè)常用于感染以及不明原因發(fā)熱的診斷,其升高常見于細(xì)菌性膿毒血癥,尤其是膿毒血癥和感染性休克。降鈣素原可作為膿毒血癥的預(yù)后指標(biāo),也是急性重癥胰腺炎及其主要并發(fā)癥的可靠指標(biāo)［8］。同時(shí),降鈣素原也能反應(yīng)早期胰腺炎病情程度,還可以早期判斷是否合并感染,有助于早期合理選擇抗生素與預(yù)防感染。在檢驗(yàn)科的檢測(cè)方法中,降鈣素原敏感性、特異性均優(yōu)于C 反應(yīng)蛋白,而傳統(tǒng)的微生物血培養(yǎng)檢查結(jié)果需要3～7 d,而且非陽性的結(jié)果并不能排除臨床感染,并且因時(shí)間長(zhǎng)還可能增加病死率［9］。降鈣素原是現(xiàn)在最常用、對(duì)臨床具有重要指導(dǎo)作用的細(xì)菌感染的生物標(biāo)志物,與以往常用的炎癥標(biāo)志物對(duì)比,具有特異性高、敏感性高、診斷早的明顯優(yōu)勢(shì),而且其檢測(cè)速度快,操作簡(jiǎn)單,結(jié)果準(zhǔn)確,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于膿毒癥、全身嚴(yán)重細(xì)菌感染的早期診斷中,降鈣素原的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)可對(duì)感染嚴(yán)重程度、治療療效及預(yù)后進(jìn)行有效判斷,對(duì)臨床抗菌藥物的合理應(yīng)用具有指導(dǎo)作用［10-12］。但降鈣素原的確切來源以及病理生理作用尚不十分明確,有待有關(guān)人員的進(jìn)一步深入研究與探索。