霍新慧，智 勇，赫吉銘，郭梓杰，馮逸杰，熱愛拉·加納提

（新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院針灸基礎(chǔ)教研室，烏魯木齊 830054）

隨著人們預(yù)防觀念的逐漸加強(qiáng)，“治未病”成為研究的熱點(diǎn)，針灸預(yù)處理在中醫(yī)對胃黏膜損傷“治未病”方面療效顯著[1-2]。胃黏膜損傷（Gastric mucosal lesions，GML）常見的發(fā)病原因有物理性、化學(xué)性（如飲酒、藥物）、精神性刺激，和細(xì)菌或其毒素等因素。胃黏膜損傷的臨床表現(xiàn)是一系列的程序化的損傷反應(yīng)，主要表現(xiàn)為胃黏膜充血、糜爛、水腫、壞死和脫落，以及淺表性潰瘍。針灸預(yù)處理是通過適度針灸預(yù)處理相關(guān)腧穴，以發(fā)揮其扶助正氣、激發(fā)經(jīng)氣的作用，并激發(fā)一系列胃黏膜自身保護(hù)機(jī)制的作用與潛力，從而發(fā)揮其防治疾病的效應(yīng)。

本研究以胃黏膜損傷指數(shù)（UI）、一氧化氮（nitric oxide，NO）和內(nèi)皮素（endothelin，ET）的表達(dá)為指標(biāo)，探討針灸預(yù)處理對胃黏膜損傷的保護(hù)作用及與NO、ET的關(guān)系，并將針預(yù)處理和灸預(yù)處理做比較，研究二者對急性胃黏膜損傷的保護(hù)作用，并探討其對胃黏膜微循環(huán)的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康SD大鼠40只，3～4月齡，空腹體質(zhì)量（200±50）g，雌雄各半，新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物許可證號：SCXK（新）2016-0003，飼養(yǎng)于新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房，屏障來源證號：NO.65000700000749。飼養(yǎng)溫度22～25 ℃，相對濕度40%～60%，自然明暗周期，實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由飲水和進(jìn)食，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物處置方式符合動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 儀器與試劑 半自動(dòng)輪轉(zhuǎn)石蠟切片機(jī)（金華市科技有限公司，H3315），TG16-WS高速臺式離心機(jī)（常州市萬豐儀器制造有限公司），JJ-2組織搗碎勻漿機(jī)（常州市金壇新航儀器廠） ，lympus Bx-70 顯微成像系統(tǒng)（日本OLYMPUS公司）。ELISA試劑盒（武漢博士德生物有限公司）。

1.3 大鼠分組及處理 將大鼠編號，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組，每組10只。1）正常組：鼠架束縛，30 min/次，1次/d，連續(xù)7 d；2）模型組：鼠架束縛，30 min/次，1次/d，連續(xù)7 d；3）針預(yù)處理組：鼠架束縛，毫針刺中脘、足三里（雙），30 min/次，1次/d，持續(xù)7 d；4）灸預(yù)處理組：鼠架束縛，溫和灸中脘、足三里（雙），30 min/次，1次/d，持續(xù)7 d。各組大鼠每次處理后松綁，回籠正常飼養(yǎng)，連續(xù)處理7 d，第8天大鼠禁食不禁水，第9天模型組、針預(yù)處理組和灸預(yù)處理組制作急性胃黏膜損傷模型。

1.4 腧穴定位 腧穴定位依據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[3]常用動(dòng)物穴位定位法確定。中脘：臍上約20 mm，足三里：取雙后肢膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，腓骨小頭下約5 mm處。

1.5 針灸方法 大鼠固定于自制鼠架上，定穴后局部剪毛。毫針刺選用0.25 mm×13 mm的毫針（蘇州針灸用品有限公司），進(jìn)針深度5 mm，平補(bǔ)平瀉法，每10 min行針1次（上午10: 00開始），1次/d，每次30 min，連續(xù)治療7 d。灸法選用溫和灸，將溫灸純艾條（南陽臥龍漢醫(yī)艾絨廠，規(guī)格4 mm×120 mm）固定于改良后的艾條懸灸支架上，使艾條點(diǎn)燃部位垂直距離大鼠穴位或者非穴對照點(diǎn)約2 cm，3個(gè)穴位同時(shí)施灸，30 min/次，1次/d，上午10: 00開始連續(xù)灸治7 d。1.6 模型制備 采用無水乙醇灌胃法[4-5]：各組大鼠在灸預(yù)處理7 d之后，禁食不禁水24 h后進(jìn)行無水乙醇灌胃，正常組采用生理鹽水灌胃，按照每只大鼠0.6 mL/100 g無水乙醇劑量灌入相應(yīng)劑量，為防止大鼠胃黏膜損傷后的自愈，1 h后按照2 mL/只阿司匹林混懸液進(jìn)行灌胃，連續(xù)3 d。

1.7 指標(biāo)檢測

1.7.1 胃黏膜損傷指數(shù)（UI） 末次給藥后，大鼠禁食24 h，禁水8 h，腹腔麻醉（10%水合氯醛0.35 mL/100 g）后立即剖腹， 所有大鼠摘下全胃，沿胃大彎剖開，用冰生理鹽水沖洗，將胃平攤在濾紙上，用放大鏡肉眼觀察進(jìn)行UI的評定。按GUTH法[6]計(jì)算：將用冰生理鹽水沖洗干凈過的胃組織在濾紙上平展開，10倍放大鏡下用直尺肉眼觀察評估：損傷≤l mm（包括糜爛點(diǎn)）為1分；l mm＜損傷≤2 mm為2分；2 mm＜損傷≤3 mm為3分；3 mm＜損傷≤4 mm為4分；＞4 mm為5分；損傷寬度＞2 mm者計(jì)分加倍。每只大鼠的UI 等于胃黏膜各處糜爛的計(jì)分值的和。

1.7.2 胃組織NO、ET的測定 每組隨機(jī)抽取5只胃組織稱重，將剪碎的組織塊（0.5～1 g）放入量好的冰水中（胃組織:冰生理鹽水為1:9），用組織搗碎機(jī)10 000～15 000 r / min 研磨制成10%的胃組織勻漿，4 ℃低溫（低溫低速離心機(jī)）3 000 r/min 離心15 min，取上清液，- 20 ℃低溫保存，酶免法檢測胃黏膜組織勻漿中NO、ET的含量。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布者，多組計(jì)量資料比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），方差齊者用 LSD 和 SNK 法，若方差不齊者用Tamhane’s T2或 Dunnett’s T3法；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大體觀察 正常組大鼠胃黏膜光滑，無充血、水腫、糜爛；模型組大鼠胃黏膜明顯充血、水腫，可見不同程度的點(diǎn)狀、片狀和條索樣糜爛、出血點(diǎn)及潰瘍形成；與模型組比較，針預(yù)處理組和灸預(yù)處理組大鼠胃黏膜損傷面積明顯減少，未見潰瘍形成，可見部分點(diǎn)狀出血，以及條索狀糜爛；尤其是灸預(yù)處理組損傷程度最小，偶見少許點(diǎn)狀糜爛，無出血及潰瘍現(xiàn)象。

2.2 各組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)（UI）的比較 與正常組比較，模型組、針預(yù)處理組和灸預(yù)處理組的UI指數(shù)明顯升高（P＜0.01），說明造模成功；與模型組比較，針預(yù)處理組和灸預(yù)處理組UI指數(shù)明顯降低（P＜0.01），說明針灸預(yù)處理能減輕胃黏膜損傷；與針預(yù)處理組比較，灸預(yù)處理組大鼠UI指數(shù)顯著降低（P＜0.05），說明灸預(yù)處理足三里、中脘穴，相比針預(yù)處理更能顯著減輕胃黏膜損傷。

表1 各組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)（UI）的比較（ ，n = 10）

表1 各組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)（UI）的比較（ ，n = 10）

注：與正常組比較，## P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01；與針預(yù)處理組比較，▲P＜0.05

組 別 UI正常組 0.66±0.69模型組 13.42±4.50##針預(yù)處理組 5.91±2.70##△△灸預(yù)處理組 3.62±2.54##△△▲

2.3 各組大鼠胃組織NO、ET的比較 與正常組比較，模型組、針預(yù)處理組和灸預(yù)處理組的胃組織NO含量明顯降低（P＜0.01），ET含量明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，針預(yù)處理組和灸預(yù)處理組的胃組織NO含量明顯升高（P＜0.01），ET含量明顯降低（P＜0.01）；與針預(yù)處理組比較，灸預(yù)處理組大鼠的胃組織NO含量明顯升高（P＜0.05），ET含量明顯降低（P＜0.01）。說明灸預(yù)處理能顯著改善胃黏膜血液循環(huán)，抵抗胃黏膜損傷，且灸預(yù)處理比針預(yù)處理作用更顯著。

3 討論

胃黏膜損傷是導(dǎo)致多種消化系統(tǒng)疾病的主要病理生理學(xué)環(huán)節(jié)，胃黏膜受到損傷因子一定程度的侵害時(shí)，可啟動(dòng)自身多層次的防御體系與修復(fù)機(jī)制[7]，即胃黏膜保護(hù)[8-9]，Wallace等人將該防御機(jī)制闡述為5個(gè)層次：粘液-碳酸氫鹽-磷脂屏障、表面上皮細(xì)胞防御體系、胃黏膜微循環(huán)屏障、胃黏膜免疫細(xì)胞屏障、胃黏膜的自身修復(fù)。

表2 各組大鼠胃組織NO、ET含量的比較（ ，n = 10）

表2 各組大鼠胃組織NO、ET含量的比較（ ，n = 10）

注：與正常組比較，## P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01；與針預(yù)處理組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組 別 NO/（μg/g） ET/（pg/g）正常組 16.26±2.39 94.65±9.80模型組 9.17±0.68## 188.44±20.60##針預(yù)處理組 11.43±1.70##△△ 144.22±18.07##△△灸預(yù)處理組 12.85±0.64##△△▲ 113.6±13.87##△△▲▲

胃黏膜微循環(huán)屏障是一個(gè)復(fù)雜的、綜合性的調(diào)節(jié)過程，主要的調(diào)控因素有神經(jīng)調(diào)節(jié)、體液調(diào)節(jié)、血管自身調(diào)節(jié)、代謝性調(diào)節(jié)、體溫調(diào)節(jié)等，血管舒張和收縮因子的失衡是其中重要因素之一。一氧化氮（nitric oxide，NO）是內(nèi)源性血管舒張因子，作為一種重要的保護(hù)因子，可以有效的調(diào)節(jié)血管緊張性和內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)性，從而擴(kuò)張血管，改善胃黏膜血液循環(huán)，維持胃黏膜完整性，間接地參與調(diào)節(jié)胃的胃酸分泌，促進(jìn)潰瘍愈合[10-11]。內(nèi)皮素（endothelin，ET）是一種內(nèi)源性損傷因子，以自分泌和旁分泌的方式作用于靶細(xì)胞上的特異性受體，ET具有強(qiáng)烈的收縮血管作用，在胃黏膜損傷過程中通過收縮血管和增加滲出以減少循環(huán)血量來降低胃黏膜血流，從而減弱胃黏膜防御[12-13]。

中醫(yī)根據(jù)患者臨床表現(xiàn)，將胃黏膜損傷歸為“胃脘痛”“嘈雜”“吐酸”“胃痞”等范疇，在治療中注重“養(yǎng)”而非“治”，強(qiáng)調(diào)“治未病”，這與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為防治本病的關(guān)鍵點(diǎn)在于最大限度的激發(fā)胃黏膜自身保護(hù)機(jī)制的作用與潛力的思路不謀而合。

針灸作為中醫(yī)治未病的重要手段，在機(jī)體未病或疾病尚未發(fā)生之前，預(yù)先選取某些腧穴進(jìn)行針灸刺激，以激發(fā)經(jīng)氣，通過扶助正氣以防止疾病的發(fā)生，減輕疾病對機(jī)體的損害[14]。

大量的臨床研究已證實(shí)了針灸對胃黏膜的保護(hù)作用[5]，作為一種生理性溫?zé)岽碳ぴ~性“苦、溫、辛”，歸肝、脾、腎經(jīng)，是治療胃病的外用效藥，灸預(yù)處理與針預(yù)處理和其他方法相比，在“治未病”，尤其是在預(yù)防胃黏膜損傷方面獨(dú)具優(yōu)勢[1-2]。研究顯示，灸法發(fā)揮對胃黏膜損傷的防治作用，是激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)源性保護(hù)物質(zhì)，并啟動(dòng)一系列的保護(hù)效應(yīng)：抗氧化、抗炎、抑制凋亡等抗胃黏膜損傷效應(yīng)，以及損傷后胃黏膜細(xì)胞增殖、重建等[15]。

足三里是足陽明胃經(jīng)的合穴、胃腑下合穴，諸多古籍記載了該穴在治療脾胃病證中具有調(diào)理脾胃、補(bǔ)中益氣的功效，是治療胃腑病的首選腧穴，《四總穴歌》中首句即“肚腹三里留”。現(xiàn)代大量臨床、機(jī)制研究的文獻(xiàn)也證實(shí)了足三里是治療消化系統(tǒng)疾病使用頻次最多的穴位，具有促進(jìn)胃動(dòng)力、增加胃血流量、抑制胃酸分泌，和保護(hù)胃黏膜等功效[11]。此外，足三里是全身強(qiáng)壯要穴之一，常用灸法以提高機(jī)體防御疾病的能力。中脘是胃之募穴，八會穴之腑會，還是手太陽、少陽、足陽明、任脈之會。本穴適當(dāng)胃的中部，具有和胃健脾、疏理中氣之效。研究顯示，治療消化性潰瘍最常用的是足三里配中脘的合募配穴[16-17]，各種證型及癥狀均取此兩穴[18]，下合穴與募穴均擅于治療腑病，臨床上配伍使用可相互協(xié)調(diào)、增強(qiáng)療效。

本研究結(jié)果顯示，與針預(yù)處理比較，灸預(yù)處理可以明顯減輕因無水乙醇灌胃造成的急性胃黏膜損傷，上調(diào)胃黏膜組織NO、下調(diào)其ET的表達(dá)，灸預(yù)處理的效應(yīng)明顯優(yōu)于針預(yù)處理。提示灸預(yù)處理對胃黏膜損傷中胃黏膜微循環(huán)相關(guān)因子NO、ET有較好的調(diào)控作用，激發(fā)了胃黏膜保護(hù)機(jī)制[19-20]。