沈 瑤， 熊遠果， 張 洪

武漢大學(xué)人民醫(yī)院藥學(xué)部，湖北 武漢 430060

結(jié)直腸癌(colorectal carcinoma, CRC)是常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居惡性腫瘤前三位，死亡率較高[1]。CRC的發(fā)病機制尚不明確，目前普遍認(rèn)為其發(fā)生是多因素多基因參與的復(fù)雜過程，是環(huán)境因素和遺傳因素交互作用的結(jié)果[2]。Toll樣受體4(Toll-like receptor 4, TLR4)是介導(dǎo)天然免疫的跨膜信號傳遞受體家族中的一員，可以通過識別病原相關(guān)分子模式參與相應(yīng)的免疫應(yīng)答[3]。同時，TLR4在調(diào)節(jié)腸內(nèi)免疫和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮了重要的作用[4]，其單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism, SNP)會降低腸內(nèi)細(xì)胞對細(xì)菌表面抗原的反應(yīng)性，影響TLR4的激活，進而導(dǎo)致包括CRC在內(nèi)的各種炎癥性疾病的發(fā)生[5-6]。許多臨床研究[7-8]表明，TLR4基因多態(tài)性與CRC的發(fā)生相關(guān)，尤其是位于外顯子區(qū)域的1196C>T及896A>G位點。這兩個位點的突變會使編碼氨基酸的序列發(fā)生改變，導(dǎo)致TLR4蛋白的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，進而影響TLR4信號通路[6]。同時，TLR4的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化會使其與配體的結(jié)合發(fā)生改變，影響促炎癥因子及抗炎癥因子的釋放，促進腫瘤細(xì)胞的增生進而增加了患CRC的風(fēng)險[7]。然而，也有許多相關(guān)文獻[5,7,9]得出了不同的結(jié)論。因此，為了進一步明確TLR4 896A>G位點基因多態(tài)性與CRC發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)性，為明確CRC的發(fā)病機制提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù)，本文收集相關(guān)文獻后采用Meta分析方法進行分析。

1 資料與方法

1.1文獻收集使用檢索詞檢索國內(nèi)外相關(guān)數(shù)據(jù)庫，以“TLR4、Toll樣受體4、基因多態(tài)性、結(jié)直腸癌”等為中文關(guān)鍵詞在CNKI、VIP和萬方數(shù)據(jù)庫中檢索。以“TLR4 or Toll-like receptor 4、mutation or polymorphism or variant、colorectal cancer or colorectal carcinoma or colorectal tumor or CRC or colon cancer”為英文關(guān)鍵詞在PubMed、Science Direct、Web of Science及Wiley Online Library數(shù)據(jù)庫中進行檢索。通過參考文獻回溯法查找更多相關(guān)文獻，避免遺漏。所有檢索更新至2018年2月7日。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)(1)研究類型為病例-對照研究；(2)經(jīng)病理或細(xì)胞學(xué)檢查明確診斷為CRC患者；(3)文獻為公開發(fā)表的，語言為中文或英文；(4)研究TLR4基因多態(tài)性與CRC的關(guān)系；(5)文獻統(tǒng)計方法恰當(dāng)，數(shù)據(jù)報道完整。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn)(1)綜述、會議摘要等；(2)數(shù)據(jù)不充分或無法獲取數(shù)據(jù)的文獻；(3)重復(fù)發(fā)表的文獻；(4)不符合Hardy-Weinberg遺傳定律；(5)研究未設(shè)立對照組。

1.4數(shù)據(jù)提取和方法學(xué)質(zhì)量評價按照納入及排除標(biāo)準(zhǔn)，由兩名研究者對納入文獻獨立進行資料提取，提取完畢后再交叉核對，對存在歧義的文獻可與第三方討論予以解決。資料提取內(nèi)容包括：(1)第一作者信息及文獻發(fā)表年份；(2)病例-對照研究信息，包括：研究人種、基因型檢測方法和病例組與對照組基因型數(shù)量等；(3)質(zhì)量評價的關(guān)鍵要素。按照Newcastle Ottawa Scale (NOS) 標(biāo)準(zhǔn)[10]對納入的文獻進行方法學(xué)質(zhì)量評價，得分≥7分者為高質(zhì)量研究。

1.5統(tǒng)計學(xué)分析采用RevMan 5.2及Stata 11.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理。采用χ2檢驗和I2檢驗評估異質(zhì)性，若P≥0.05且I2<50%，提示各合并的研究數(shù)據(jù)無顯著的異質(zhì)性，采用固定效應(yīng)模型，否則采用隨機效應(yīng)模型進行Meta分析。選取5 種主要的遺傳模型：等位基因模型(G/A)、顯性模型(AG+GG/AA)、隱性模型(GG/AA+AG)及共顯性模型(AG/AA、GG/AA)計算比值比(OR)值及95%CI，繪制森林圖，運用Stata 11.0 軟件進行敏感性分析，Begg’s漏斗圖及Egger’s檢測評估發(fā)表偏倚。

2 結(jié)果

2.1納入文獻基本情況通過文獻檢索，查找到30篇相關(guān)文獻，包括4篇中文和26篇英文。通過閱讀摘要及全文后，最終納入12篇文獻[6,7,9,11-19]，累積病例2 709例，對照組3 717例。納入文獻的基本信息及方法學(xué)質(zhì)量評價見表1。

表1 納入文獻的基本信息及方法學(xué)質(zhì)量評價Tab 1 Basic information and methodological quality evaluation of the literature

2.2異質(zhì)性檢驗與Meta分析異質(zhì)性檢驗采用χ2檢驗和I2檢驗，得到等位基因模型(G/A)：I2=18%，P=0.27；顯性模型(AG+GG/AA)：I2=12%，P=0.33；隱性模型(GG/AA+AG)：I2=0，P=0.75；共顯性模型：AG/AA:I2=4%，P=0.40；GG/AA：I2=0，P=0.74。所有基因模型下P≥0.05且I2<50%，提示各合并的研究數(shù)據(jù)無顯著異質(zhì)性，因此采用固定效應(yīng)模型。Meta分析結(jié)果表明，在5種基因模型下TLR4 896A>G基因多態(tài)性與CRC發(fā)病風(fēng)險無顯著相關(guān)性。各基因模型合并OR值及95%CI分別為：等位基因模型(G/A)：OR=1.11，95%CI：0.96～1.30，P=0.17；顯性模型(AG+GG/AA)：OR=1.12，95%CI：0.96～1.32，P=0.16；隱性模型(GG/AA+AG)：OR=1.10，95%CI：0.53～2.30，P=0.79；共顯性模型AG/AA：OR=1.13，95%CI：0.95～1.33，P=0.16；共顯性模型GG/AA：OR=1.14，95%CI：0.55～2.38，P=0.72。

2.3亞組分析結(jié)果由于種族及環(huán)境因素可能會對基因多態(tài)性產(chǎn)生影響，因此本文按種族將文獻劃分并行亞組分析。亞組分析結(jié)果表明，亞洲人群及白種人中TLR4 896A>G基因多態(tài)性與CRC無顯著相關(guān)性(見圖1～5)。

圖1 等位基因模型G/A與CRC的相關(guān)性 Fig 1 Correlation between allele model G/A and CRC

圖3 隱性模型GG/AA+AG 與CRC的相關(guān)性 Fig 3 Correlation between hidden model GG/AA+AG and CRC

圖4 共顯性模型AG/AA與CRC的相關(guān)性 Fig 4 Correlation between codominant model AG/AA and CRC

圖5 共顯性模型GG/AA與CRC的相關(guān)性 Fig 5 Correlation between codominant model GG/AA and CRC

2.4敏感性分析采用Stata 11.0軟件進行敏感性分析，逐一排除分析后，各合并效應(yīng)量無明顯改變。但在隱性模型GG/AA+AG和共顯性模型GG/AA中，剔除戴穹等[12]文獻時，OR發(fā)生顯著性改變，因此該研究可能是異質(zhì)性產(chǎn)生的原因之一。

2.5發(fā)表偏倚分析各基因模型下TLR4 896A/G基因多態(tài)性與CRC易感相關(guān)性Meta 分析結(jié)果發(fā)表偏倚結(jié)果見表2。Begg’s漏斗圖顯示，所有的研究基本對稱，呈倒置漏斗形(見圖6)。Egger’s 線性回歸結(jié)果為t=1.12，P>0.05，95%CI：-0.78～2.34，包含0(見圖7)，因此本研究無發(fā)表偏倚。

圖6 等位基因模型A/G Begg’s漏斗圖 Fig 6 Begg’s funnel plot of allele model A/G

圖7 等位基因模型A/G Egger’s線性回歸 Fig 7 Egger’s linear regression of allele model A/G

基因型Stdt值P值95% CIA/G0.701.120.290-0.78～2.34AG+GG/AA0.671.110.292-0.74～2.22 GG/AA+AG0.98-1.110.311-3.48～1.31 AG/AA0.621.070.308-0.72～2.07 GG/AA0.98-1.130.301-3.51～1.29

3 討論

TLR可以特異性識別各種病原體，因此在先天性免疫和獲得性免疫中發(fā)揮了重要的作用[20]。TLR4在單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及多種上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞都有較高的表達[21]，而腸上皮細(xì)胞在調(diào)節(jié)細(xì)菌抗原的免疫應(yīng)答具有重要作用，持續(xù)激活TLR4信號通路使TLR4表達增加是上皮癌細(xì)胞獲得惡性表型的重要機制[22]。因此，TLR4基因多態(tài)性可能會影響炎癥因子的合成，從而促進CRC的發(fā)病[23-24]，同時，相關(guān)研究表明，TLR4 mRNA及蛋白的表達可能與CRC的形成有密切的聯(lián)系[25]。

本文通過Meta分析的方法探討TLR4 896A>G基因多態(tài)性與CRC的關(guān)系，初步探索該基因位點的SNP在CRC發(fā)生、發(fā)展中的作用及可能機制，為CRC的防治提供基礎(chǔ)依據(jù)。研究結(jié)果表明，在以上5種遺傳模型中，TLR4 896A>G基因多態(tài)性與CRC易感性的相關(guān)性差異無顯著統(tǒng)計學(xué)意義。亞組分析顯示，TLR4 896A>G基因多態(tài)性無論在亞洲人群或是高加索人群中都與CRC無明顯相關(guān)性，Begg’s漏斗圖和Egger’s檢驗表明在各個遺傳模型中均無發(fā)表偏倚，因此本研究結(jié)果較為可靠。同時，本研究也存在一定的局限性，例如：未評估基因-基因、基因-環(huán)境的相互作用；部分研究缺乏許多混雜因素的說明，例如結(jié)直腸性疾病史等，因此未做分層回歸分析；納入文獻均為已發(fā)表的文獻，缺乏灰色文獻，并且文種限制在中、英文，文種偏倚也可能影響Meta 分析結(jié)果；總樣本量較小，降低了結(jié)論代表性。

目前有關(guān)TLR4基因多態(tài)性與CRC關(guān)系的研究較少，而TLR4基因多態(tài)性與CRC發(fā)病的關(guān)系可能與其他因素交互作用，共同促進了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。本研究結(jié)果表明，TLR4 896A>G基因多態(tài)性與CRC的風(fēng)險無關(guān)?；谝陨暇窒扌裕枰嗲罢靶匝芯窟M一步證實，并適時在本Meta分析的基礎(chǔ)上更新，以期進一步研究TLR4 896A>G SNP與CRC風(fēng)險關(guān)系。