潘春燕

浙江省金華市中心醫(yī)院 浙江 金華 321000

麻杏石甘湯出自漢代張仲景的《傷寒論》，由麻黃、杏仁、石膏、炙甘草四味藥組成，功可辛涼宣泄，清肺平喘[1]。對于麻杏石甘湯提取工藝的研究，文獻報道大多只考慮不同提取方法之間的差異，中藥的提取過程是一個從植物細胞液到溶液的優(yōu)化擴散過程，是有效成分濃度不斷優(yōu)化變化的過程。期間可能發(fā)生多種物理、化學變化，根據(jù)物質(zhì)溶出原理，溶質(zhì)從高濃度向低濃度的擴散，當溶質(zhì)在兩種溶劑中濃度趨于平衡時，溶液中濃度不再變化，即溶劑中有效成分達到最大的濃度。有效成分達到優(yōu)化平衡時的提取時間通常為最優(yōu)提取時間。本研究通過實時測定麻杏石甘湯提取過程中提取液有效成分含量的優(yōu)化變化規(guī)律，確定提取時間；通過稱定每次提取浸膏得率和總成分含量，確定提取次數(shù)，與傳統(tǒng)工藝相比，一定程度上縮短了提取時間，節(jié)約了成本[2]。

1 材料

1.1 儀器：HPLC色譜儀（LC-20AT，日本島津公司），美地亞超聲清洗器（MP-1120C，南昌普惠實驗儀器有限公司），賽多利斯電子天平（BT-120，德國賽多利斯實驗室），加熱套（北京市貝斯特實驗儀器有限公司），離心機（AT-25D，天津津美實驗儀器廠）。

1.2 試藥：鹽酸麻黃堿對照品（批號：171242-200404）、鹽酸偽麻黃堿（批號：171237-201510）、苦杏仁苷（批號：110820-201607）、甘草苷（批號：111610-201607）、甘草酸銨（批號：110731-201619），均由金華市食品藥品檢驗檢測研究院提供，供含量測定用。生麻黃、生石膏、炙甘草飲片購于浙江景岳堂中藥飲片廠。甲醇、乙腈為色譜純（Fisher公司），高氯酸、硝酸分別為分析純；優(yōu)級純，氨水、乙醚、磷酸為分析純（均購自天津化學試劑有限公司），水為超純水（杭州娃哈哈有限公司）。

2 方法

2.1 色譜條件：參考文獻報道色譜條件，流動相為乙腈-0.1%磷酸（5:95），檢測波長207nm，柱溫為35℃；體積流1ml/min。

2.2 提取方法：分述如下。

2.2.1 傳統(tǒng)工藝：稱取麻黃、苦杏仁、甘草各28g，石膏112g，加水1568ml，文火提取，待沸騰后，繼續(xù)提取60min，紗布濾過，再次加水1568ml，提取60min，共提取3次，合并提取液，即得[3]。

2.2.2 優(yōu)化工藝：稱取麻黃、苦杏仁、甘草各28g，石膏112g，加水1568ml，文火提取，待沸騰后，繼續(xù)提取60min，紗布濾過，再次加水 1568ml，提取 60min，每10min取樣測定鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸含量[4]。各有效成分含量均趨于平衡時的提取時間設為優(yōu)化工藝的提取時間，把浸膏重能達到90%以上時的提取次數(shù)作為優(yōu)化工藝的提取次數(shù)。確定提取時間與次數(shù)，作為優(yōu)化工藝。取相同重量飲片，按照優(yōu)化后工藝提取。合并提取液，即得[5]。

2.3 對照品溶液制備：精密稱取麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對照品適量，加甲醇，分別制成每1ml含0.0510mg麻黃堿、0.0454mg偽麻黃堿的溶液。精密稱取苦杏仁苷對照品適量，甲醇配制為每1ml含0.0431mg苦杏仁苷的溶液。稱取甘草苷、甘草酸對照品適量，加70%乙醇制成每1ml含0.02032mg甘草苷、0.0844mg甘草酸對照品溶液（甘草酸對照品質(zhì)量濃度=甘草酸銨對照品質(zhì)量濃度/1.0207）。

2.4 供試品制備：分述如下。

2.4.1 供試品溶液的制備：精密量取麻杏石甘湯10ml，置50ml量瓶中，加甲醇35ml，超聲30min，放冷后，用甲醇定容至刻度，以0.45μm微孔濾膜濾過，即得[6]。

2.4.2 浸膏制備：將傳統(tǒng)工藝、優(yōu)化工藝的2次提取藥液分別合并，各精密量取50ml，置恒重后蒸發(fā)皿，水浴蒸干，置105℃烘箱中3小時，放置常溫后稱重[7]。

2.4.3 樣品測定：精密吸取樣品10μl，注入高效液相色譜儀，按照2.1項下色譜條件測定含量。

3 結(jié)果

3.1 優(yōu)化工藝提取次數(shù)確定：浸膏重第1次7.3215g，第2次3.0142g，第3次0.6845g，前2次浸膏重占3次總重的93.8%，確定優(yōu)化工藝提取次數(shù)為2次。

3.2 各樣品溶液中指標成分的含量：見表1。

表1 前2次提取各時間點指標成分的含量（mg/ml）

3.3 前2次提取液各有效成分含量時間變化曲線：見圖1、圖2。隨著提取時間的延長，各有效成分含量的變化率越來越小，分別在50min、40min時趨于穩(wěn)定。

圖1 第1次提取液各有效成分隨時間變化曲線

圖2 第2次提取液各有效成分隨時間變化曲線

3.4 兩種工藝提取液中指標成分的含量比較：見表2。優(yōu)化工藝提取的麻杏石甘湯各有效成分含量與傳統(tǒng)工藝對比，相對偏差均小于5%。

表2 兩種工藝提取液中指標成分的含量（mg/ml）

4 討論

本方法通過考察提取過程中不同時間麻杏石甘湯有效成分的含量，實時反映提取液中有效成分變化，得出提取過程中有效成分實時變化規(guī)律。對比優(yōu)化工藝與傳統(tǒng)工藝，在保證有效成分含量提取率的前提下，縮短提取時間，節(jié)約能源。在確定提取時間時，由于藥材中指標成分溶出規(guī)律不一致，所以有效成分濃度-時間曲線到達平臺期時間不同。中藥提取時間是影響其湯液中有效成份溶出的重要因素之一，提取時間過短會使許多有效成分未能從藥材中溶出，從而造成藥材資源的浪費；提取時間過長會導致其中揮發(fā)性成分及熱不穩(wěn)定成分的含量降低，且會造成能源的浪費。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，優(yōu)化提取工藝部分有效成分濃度略高于傳統(tǒng)提取工藝，原因可能是提取時間過長會導致其中揮發(fā)性成分及熱不穩(wěn)定成分的含量降低。本方法特別適合考察揮發(fā)性的成分、熱不穩(wěn)定成分、毒性成分以及在提取過程中產(chǎn)生新的有效成分優(yōu)化變化規(guī)律，實時反映這些有效成分隨時間的變化，能夠很好地確定其最佳提取時間。