裴瑜 董旭 唐心一

[摘要]目的 探討咖啡酸對(duì)2型糖尿病大鼠血糖濃度的影響。方法 選取60只6～8周齡雄性SD大鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，隨機(jī)取20只大鼠作為正常觀(guān)察組，分為空白組和實(shí)驗(yàn)組1～3，每組5只。實(shí)驗(yàn)組1～3分別以0.4、0.6、0.8 g/kg咖啡酸灌胃，空白組以1 ml/100 g等量蒸餾水灌胃。其余40只大鼠高糖高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)6周，連續(xù)3 d腹腔內(nèi)注射30 mg/kg的鏈脲佐菌素（STZ），用于2型糖尿病大鼠模型的建立，F(xiàn)PG>7 mmol/L及大鼠尿糖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)陽(yáng)性為造模成功。將造模成功的30只大鼠隨機(jī)分為模型組、阿卡波糖組、聯(lián)合組及咖啡酸組1～3，每組5只。阿卡波糖組予以10 mg/kg的阿卡波糖灌胃，聯(lián)合組采用10 mg/kg的阿卡波糖以及1 g/kg的咖啡酸聯(lián)合灌胃，咖啡酸組1～3分別采用0.8、1.0、1.2 g/kg咖啡酸灌胃，模型組以1 ml/100 g等量蒸餾水灌胃。觀(guān)察不同時(shí)間咖啡酸對(duì)正常觀(guān)察組大鼠空腹血糖濃度（FPG）及胰島素（INS）的影響；觀(guān)察各藥物組對(duì)2型糖尿病大鼠FPG濃度的影響。結(jié)果 灌胃前，灌胃第1、6天，各組（正常觀(guān)察組中）大鼠的FPG濃度比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。灌胃前，各組（模型組和各藥物組）的FPG濃度比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；灌胃后，與模型組比較，各藥物組大鼠的FPG濃度均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01），聯(lián)合組的FPG濃度降低最明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；各藥物組中，以聯(lián)合組的降糖效果最明顯（P<0.05）。結(jié)論 咖啡酸對(duì)2型糖尿病大鼠具有降FPG作用，但不如阿卡波糖的降糖效果顯著。阿卡波糖聯(lián)合咖啡酸的降糖效果最明顯。

[關(guān)鍵詞]咖啡酸；阿卡波糖；2型糖尿病；降血糖

[中圖分類(lèi)號(hào)] R587.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）9（a）-0016-04

[Abstract] Objective To explore the influence of Caffeic Acid on blood glucose concentration in rats with type 2 diabetes mellitus. Methods Sixty male SD rats aged 6-8 weeks were selected and fed for 3 days. Twenty rats were selected as the normal observation group and they were divided into the blank group and experimental group1-3， and there were 5 rats in each group. The experimental group 1～3 was fed with 0.4， 0.6 and 0.8 g/kg of Caffeic Acid respectively， the blank group was gavaged with 1 ml/100 g of equivalent distilled water. The other 40 rats were fed with high-sugar and high-fat diet for 6 weeks and intraperitoneally injected with 30 mg/kg Streptozotocin （STZ） for 3 days， the model of type 2 diabetic rats was established， FPG>7 mmol/L and rat urine sugar test positive were considered to be successful in modeling. Thirty rats successfully modeled were randomly divided into model group， Acarbose group， combined group and Caffeic Acid group 1-3， and there were 5 rats in each group. Acarbose group was given 10 mg/kg Acarbose， combined group was given 10 mg/kg of Acarbose and 1 g/kg of Caffeic Acid， Caffeic Acid group 1-3 was given 0.8， 1.0， 1.2 g/kg respectively， model group was given 1 ml/100 g of distilled water. The influence of Caffeic Acid on fasting blood glucose （FPG） and insulin （INS） in rats of normal observation group was observed at different times； the influence of each drug group on the concentration of FPG in type 2 diabetic rats was observed. Results There was no significant difference in FPG concentration and INS expression level among the groups （in normal observation group） before gavage， gavage for the first， sixth day （P>0.05）. There was no significant difference in FPG concentration among the groups （in model group and various drug group） before gavage （P>0.05）. After gavage， compared with model group， the FPG concentration in various drug group were decreased significantly， and the differences were statistically significant （P<0.05， P<0.01）. The FPG concentration in combined group was significantly lower， and the difference was statistically significant （P<0.01）. Among the drug groups， the combined group had the most significant hypoglycemic effect （P<0.05）. Conclusion Caffeic Acid has a reducing FPG effect on type 2 diabetic rats， but it is not as effective as Acarbose in reducing blood sugar. The effect of Acarbose combined with Caffeic Acid was the most obvious.

[Key words] Caffeic Acid； Acarbose； Type 2 diabetes mellitus； Reducing the blood glucose

2型糖尿病是胰島素分泌量相對(duì)不足或敏感性降低引發(fā)的一類(lèi)代謝紊亂綜合征，患者長(zhǎng)期血糖、血脂等代謝異常，可累及多器官及系統(tǒng)，危害極大，應(yīng)盡早治療，并嚴(yán)格控制患者血糖水平[1-2]。目前主要采用藥物治療，但在治療過(guò)程中都存在諸多副作用。阿卡波糖治療初發(fā)2型糖尿病的臨床效果良好，但易引起胃痛、脹氣等胃腸道反應(yīng)[3]；二甲雙胍作為一線(xiàn)降糖藥物[4]，不良反應(yīng)有惡心、腹脹、腹瀉等[5]；磺脲類(lèi)促泌藥有低血糖反應(yīng)、對(duì)心肌缺血預(yù)適應(yīng)的影響及體重增加等副作用[6]；胰島素類(lèi)長(zhǎng)期肌內(nèi)注射會(huì)使注射部位皮膚萎縮、增生甚至產(chǎn)生硬結(jié)，易出現(xiàn)低血糖反應(yīng)[7]。研究表明，咖啡酸體外對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制強(qiáng)度與阿卡波糖相當(dāng)[8]。在咖啡中開(kāi)發(fā)出一種毒副作用小、生物相容性好、易于接受和堅(jiān)持的天然降糖物質(zhì)，為臨床治療2型糖尿病提供參考。

1材料與方法

1.1材料與儀器

咖啡酸（規(guī)格：5 g/瓶；生產(chǎn)公司：阿拉?。慌?hào)：201606）；阿卡波糖片（50 mg×30片/盒，北京拜耳醫(yī)藥保健有限公司；國(guó)藥準(zhǔn)字H19990205）；STZ溶液（100 mg；美國(guó)sigma公司；批號(hào)：201605）；F-5血糖試紙（50片/盒；日本京都愛(ài)科來(lái)）；大鼠胰島素ELISA檢測(cè)試劑盒（規(guī)格：96T/盒；上海西唐生物科技有限公司；靈敏度：0.5 mIU/L；批號(hào)：201703）；京都血糖儀GT-1640（儀器的測(cè)量范圍在0～900 mg/dl；日本京都愛(ài)科來(lái)）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1動(dòng)物分組及大鼠2型糖尿病模型的建立 選用重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的60只6～8周齡雄性SD大鼠[許可證號(hào)：SCXK（渝）2017-0001]，體重（250±10）g。從60只大鼠中隨機(jī)選取出20只大鼠喂養(yǎng)正常飼料，做正常大鼠觀(guān)察實(shí)驗(yàn)；其余 40只用以誘導(dǎo)2型糖尿病大鼠模型，具體分組：①正常觀(guān)察組大鼠：將20只大鼠隨機(jī)分為空白組和實(shí)驗(yàn)組1～3，共4組，每組5只。②2型糖尿病大鼠：從40只大鼠中篩選出造模成功的30只大鼠，隨機(jī)分為模型組、阿卡波糖組、聯(lián)合組及咖啡酸組1～3，共6組，每組5只。

適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，采用陳欣等[9]介紹的制備2型糖尿病大鼠模型方法，將40只用于造模的大鼠，以高糖高脂飼料連續(xù)飼養(yǎng)6周，第6周末禁食不禁水12 h 后稱(chēng)量大鼠空腹體重，并用30 mg/kg劑量的STZ于腹腔注射3次，每天注射1次，并繼續(xù)給予高糖高脂飼料2周，誘導(dǎo)2型糖尿病模型的建立。注射STZ 2周后取大鼠尾靜脈全血，檢測(cè)FPG濃度，F(xiàn)PG>7 mmol/L，并結(jié)合大鼠尿糖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)陽(yáng)性，為建模成功。40只大鼠中，30只大鼠造模成功，成模率為75%。

1.2.2用藥方法 ①正常觀(guān)察組大鼠：實(shí)驗(yàn)組1～3分別以0.4、0.6、0.8 g/kg咖啡酸灌胃，空白組以1 ml/100 g等量蒸餾水灌胃，分別檢測(cè)灌胃2 h后大鼠FPG濃度及INS表達(dá)水平。②2型糖尿病大鼠：實(shí)驗(yàn)前隔夜空腹8～10 h，檢測(cè)大鼠灌胃前FPG濃度?？Х人峤M1～3分別以0.8、1.0、1.2 g/kg咖啡酸灌胃，阿卡波糖組為10 mg/kg，聯(lián)合組以10 mg/kg的阿卡波糖和1.0 g/kg的咖啡酸混勻后灌胃，模型組以1 ml/100 g等量蒸餾水灌胃。測(cè)灌胃2 h后大鼠FPG濃度。

1.2.3檢測(cè)指標(biāo) 檢測(cè)各組大鼠的空腹血糖（FPG）濃度及胰島素（INS）表達(dá)水平。用京都血糖儀GT-1640測(cè)定大鼠FPG濃度；取大鼠尾靜脈血送重慶醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)院重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，用ELISAcalc軟件計(jì)算出胰島素值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 22.0分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)和方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組不同時(shí)間FPG濃度的比較

灌胃前，灌胃第1、6天，各組大鼠的FPG濃度比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2各組不同時(shí)間INS表達(dá)水平的比較

灌胃前，第1、6天，各組大鼠的INS表達(dá)水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表2）。

2.3各組灌胃前后FPG濃度的比較

灌胃前，各組的FPG濃度比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；灌胃后，與模型組比較，各藥物組大鼠的FPG濃度均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05、P<0.01），聯(lián)合組的FPG濃度降低最明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；各藥物組中，以聯(lián)合組降糖效果最明顯（P<0.05）（表3）。

3 討論

咖啡酸一種天然的酚類(lèi)化合物，具有抗氧化、抗輻射、抗癌、降血壓、預(yù)防心腦血管疾病等多種功能活性[10]?？Х人崃己玫目寡趸饔媚芗m正糖尿病患者體內(nèi)的脂質(zhì)過(guò)氧化和自由基負(fù)荷。已有文獻(xiàn)報(bào)道，咖啡酸在糖尿病大鼠中通過(guò)刺激腎髓質(zhì)分泌β內(nèi)啡肽樣物質(zhì)而起降糖作用[11]，由于在正常小鼠中沒(méi)有觀(guān)察到這種降糖作用[12]，認(rèn)為這一作用具有是非胰島素依賴(lài)性。本研究結(jié)果提示咖啡酸對(duì)正常SD大鼠作用后對(duì)FPG濃度和血清INS水平均無(wú)明顯影響，未顯示出咖啡酸對(duì)正常大鼠的降糖作用。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，2型糖尿病患者的人數(shù)占糖尿病患者總數(shù)的90%以上[13]。本文表明咖啡酸對(duì)2型糖尿病大鼠具有降血糖的作用，但咖啡酸本身存在口服吸收不好，生物利用度較低，不能充分發(fā)揮藥效[14]的問(wèn)題，吳磊等[15]發(fā)現(xiàn)大鼠灌胃給予咖啡酸后，吸收迅速，消除半衰期較短，其絕對(duì)生物利用度只有14.7%。戴國(guó)梁等[16]發(fā)現(xiàn)阿司匹林可減慢咖啡酸在大鼠體內(nèi)代謝的過(guò)程。實(shí)驗(yàn)中咖啡酸的使用劑量和溶解性都影響了其對(duì)大鼠的降糖效果，采取最適劑量并提高其生物利用度和生物活性會(huì)提高其對(duì)2型糖尿病大鼠的降糖功效。阿卡波糖可使人體對(duì)糖的吸收減緩并抑制食物的多糖分解，能有效地改善胰島素敏感性與細(xì)胞功能[17]，降低餐后高血糖，是一種新型的口服降糖藥[18]。本實(shí)驗(yàn)提示阿卡波糖能有效降低2型糖尿病大鼠的FPG濃度，且比咖啡酸的作用效果更好。2型糖尿病早期，使用阿卡波糖藥物治療，通過(guò)該藥單獨(dú)使用或者聯(lián)合其他降血糖藥物使用，均可以有效降低餐后血糖[19]。但在咖啡酸與阿卡波糖聯(lián)合用藥服用于2型糖尿病大鼠實(shí)驗(yàn)中，大鼠的FPG降低程度與阿卡波糖單獨(dú)作用相當(dāng)，不過(guò)關(guān)于咖啡酸單獨(dú)和與咖啡酸聯(lián)合用藥對(duì)大鼠餐后血糖的影響還不確切，提示在2型糖尿病大鼠中，使用阿卡波糖治療，能有效改善大鼠的高血糖水平，選取合適劑量的咖啡酸，對(duì)2型糖尿病的預(yù)防和治療會(huì)有一定的幫助。

咖啡酸在植物界中普遍存在，大量存在于山里紅 （薔薇科）的果實(shí)、一支黃花（菊科）的全草、菜薊（菊科）的葉和金銀花（忍冬科）等多種中草藥植物中[20]，咖啡酸化學(xué)結(jié)構(gòu)比較簡(jiǎn)單，來(lái)源豐富，合成容易，成本較低，在醫(yī)藥方面應(yīng)用價(jià)值大，不過(guò)關(guān)于咖啡酸在2型糖尿病方面的報(bào)道少見(jiàn)，其具體降糖機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，咖啡酸能降低2型糖尿病大鼠的FPG濃度，不如聯(lián)合組和阿卡波糖的效果明顯。但這一新的途徑為2型糖尿病的預(yù)防及臨床治療提供了新思路。

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（收稿日期：2018-03-27 本文編輯：許俊琴）